"ГОСТ Р 55040-2012 (ISO 14730:2000). Национальный стандарт Российской Федерации. Оптика офтальмологическая. Средства ухода за контактными линзами. Метод испытания эффективности антибактериальных консервантов и руководство по определению срока утилизации"
(утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 01.11.2012 N 687-ст)

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "ТКС-оптика" совместно с рабочей группой ПК 7 "Офтальмологическая оптика и приборы" Технического комитета ТК 296 "Оптика и оптические приборы" на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Управлением технического регулирования и стандартизации Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 01 ноября 2012 г. N 687-ст

4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 14730:2000 "Офтальмологическая оптика. Средства ухода за контактными линзами. Методы испытания эффективности предохранения от микробов и срока ликвидации" (ISO 14730:2000 "Ophthalmic optics - Contact lens care products - Antimicrobial preservative efficacy testing and guidance on determining discard date") путем:

- изменения наименования стандарта и его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ Р 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3);

- введения дополнительных фраз. При этом дополнительные фразы, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей национальной стандартизации, выделены курсивом.

Сравнение структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного стандарта приведено в дополнительном приложении ДА.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДБ

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Средства ухода за контактными линзами предназначены для применения с контактными линзами. Эти продукты промывают, чистят, дезинфицируют, используются для хранения, смачивания, создания комфортных условий для контактных линз. Некоторые продукты имеют одну функцию, в то время как другие являются многофункциональными.

Обычно продукты, изготовленные для применения с гидрогельными линзами, могут быть использованы с жесткими газопроницаемыми (RGP) или с полиметилметакрилатовыми (ПММА) линзами, но продукты, специально используемые для линз RGP или ПММА, обычно не подходят для гидрогельных линз.

Большинство жидких средств ухода за контактными линзами упаковывают и реализуют в многоразовых контейнерах. Твердые средства ухода за контактными линзами реализуются в виде таблеток или гранул и должны быть растворены в подходящем растворителе непосредственно перед использованием.

Если жидкое средство ухода за контактными линзами не обладает антибактериальной активностью, антибактериальные консерванты могут быть добавлены в продукт, чтобы подавлять рост микроорганизмов, которые могут быть введены в результате многократного дозирования при использовании и последующем хранении. Все антибактериальные агенты представляют токсический потенциал для пользователя. Для максимальной защиты пользователя концентрация консерванта должна обеспечивать адекватную консервативную активность с минимальной токсичностью.

Существуют различия между офтальмологическими препаратами и средствами ухода за контактными линзами, и некоторые из этих различий важны в отношении испытания эффективности консервации. Как правило, офтальмологические препараты упакованы в контейнеры небольшого объема и предназначены для использования в течение коротких периодов времени ввиду угрозы для глаза. Средства ухода за контактными линзами реализуют в емкостях большого объема и используют с контактными линзами для здоровых глаз на долгосрочной основе. Потенциальные риски в средствах по уходу за контактными линзами заключаются в растворе/взаимодействии линз, вызывающих раздражение глаз и риск загрязнения раствора при ежедневном использовании продукта.

Риск побочных реакций для пациента из-за взаимодействия линз и раствора должен быть сопоставлен с преимуществами безопасности от поддержания антибактериальной активности раствора.

Настоящий стандарт представляет метод испытания и критерии эффективности консервантов. Этот метод был заимствован из фармакопеи, дающей ограничения по времени в процедуре испытания - 28 суток. В справочных приложениях приведены четыре примера метода испытания антибактериальных консервантов, разработанные изготовителями средств по уходу за контактными линзами, чтобы продемонстрировать эффективность консервантов со сроком утилизации более 28 суток.

Настоящий стандарт устанавливает метод испытания, который используется при оценке эффективности антибактериальных консервантов всех многоцелевых растворов по уходу за контактными линзами, и приводит руководство по определению срока утилизации.

Метод применяют к средствам ухода со сроком годности до 28 суток.

Метод не применяют к стерильным средствам ухода, упакованным в дозаторы для одноразового использования или контейнеры, разработанные с физическим барьером, например, аэрозольные баллоны.

Примечания

1 Принципы метода могут быть использованы для увеличения срока утилизации более 28 суток. См. приложения B, C, D и E.

2 Использование множественных или смешанных микробных заражений и/или включение других органических загрузок может влиять на очевидную антибактериальную активность того или иного средства ухода. Оценка таких изменений наряду с испытанием при большем числе микроорганизмов и испытанием средств из частично использованных контейнеров может иметь значение при разработке средства по уходу за контактными линзами, но это не входит в область применения настоящего стандарта.

ГОСТ Р 53941-2010 (ИСО 18369-1:2006) Оптика офтальмологическая. Линзы контактные. Часть 1. Термины, определения и буквенные обозначения

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

4.1 Испытание состоит из заражения продукта стандартным штаммом из коллекции подходящих микроорганизмов в начале испытания, а затем повторного их заражения на 14 сутки. Зараженные продукты хранят при указанной температуре. Вводимую микробиологическую культуру изымают из инокулированных продуктов через определенные интервалы времени и культивируют для определения числа жизнеспособных микроорганизмов. Возможность предотвращения повторного роста подтверждают подсчетом жизнеспособных микроорганизмов в течение длительного периода времени.

4.2 Вводимая микробиологическая культура, выбранная для данного испытания, должна обеспечить определенное число микроорганизмов, на основании чего можно определить скорость и степень потери их жизнеспособности. Данная микробиологическая культура не предназначена для подобного заражения на практике.

4.3 Свойства антибактериального консерванта адекватны, если в условиях испытания обеспечено значительное сокращение бактерий и нет увеличения дрожжей и плесени в зараженной заготовке при указанных температурах. Критерии контроля испытуемых средств приведены в 5.6.

4.4 Для инактивации или удаления остаточных антибактериальных консервантов во время культивирования и подсчета числа выживших микроорганизмов должны быть приняты соответствующие меры, а эффективность этих мер должна быть оценена и подтверждена органами контроля.

Следует использовать тест-штаммы, приведенные в таблице 1.

Примечание - Допускается использовать тест-штаммы из других коллекций культур, перечисленных в приложении F.

5.1.2.1 Триптоновый соевый агар (TSA).

5.1.2.2 Агар Сабуро с декстрозой (SDA).

5.1.2.3 Фосфатно-солевой раствор Dulbecco с буферной добавкой, без хлорида кальция и хлорида марганца (DPBS): 200 мг/л KCl, 200 мг/л KH₂PO₄, 8000 мг/л NaCl и 2160 мг/л Na₂HPO₄·7H₂O или подходящий растворитель.

5.1.2.4 Фосфатно-солевой раствор Dulbecco с буферной добавкой плюс 0,05% (масса/объем) полисорбата 80 (DPBST) или подходящий растворитель.

5.1.2.5 Оцененные нейтрализирующие агенты (при необходимости), например, нейтрализующий бульон Dey-Engley (DEB) и бульон Letheen.

Для проведения испытаний требуется следующее лабораторное оборудование:

Стерильные пипетки.

Ватные тампоны.

Трубки.

Чашки Петри (от 90 до 100 x 20 мм).

Спектрофотометр (для определения плотности клеток и подсчета числа колоний).

Средство, которое подлежит испытанию, должно быть средством, реализуемым на рынке. Аликвотные пробы должны быть взяты непосредственно из контейнера перед проведением испытания.

Следует испытать три лота (партии) средства. Каждый лот средства испытывают отдельным тест-штаммом для каждого из них.

Сохранение тест-культуры проводят в соответствии с рекомендациями куратора соответствующей коллекции культур.

Тест-культуры следует изымать из коллекций (ATCC, NCIB, NCTC, NCPF или других коллекций культур) не более пяти пассажей каждой тест-культуры (см. приложение F), при этом изымают тест-культуру предыдущего раза.

Культивируют инокулят на скошенном агаре при условиях, указанных в таблице 2.

Используют стерильный DPBST или подходящий растворитель для сбора каждой выращенной культуры; смыв культуры с агара промывают, переносят в подходящий сосуд и встряхивают. Отфильтровывают суспензию спор через стерильную стеклянную вату или марлю, чтобы удалить нитяные фрагменты.

Допускается промывать культивированный инокулят после сбора с использованием центрифуги. Для осуществления диспергирования отдельных клеток допускается отфильтровывать бактерийные взвеси (например, используя фильтр с размерами пор от 3 до 5 мкм). Все вводимые тест-культуры доводят до концентрации от 1·10⁷ до 1·10⁸ КОЕ/мл с помощью DPBST или другого подходящего растворителя. Определяют приблизительную концентрацию клеток каждой взвеси путем измерения помутнения взвеси или раствора взвеси с помощью спектрофотометра. Действительную концентрацию колониеобразующих единиц (далее - КОЕ/мл) следует определять во время испытания для каждой взвеси, например методом подсчета с использованием чашки Петри.

Если используют центрифугу, каждый процесс центрифугирования следует проводить при температуре от 20 °C до 25 °C не более 10 мин при ускорении не более 4000g. Используют взвеси бактериальных и дрожжевых клеток в день приготовления.

Примечания

1 Более длительные периоды центрифугирования могут потребовать более низких ускорений.

2 Споровые взвеси можно использовать в течение 7 суток после приготовления при условии хранения их в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C.

5.4.1 Приготовляют одну или более пробирок (для каждого испытуемого лота), содержащих не менее 10 мл раствора испытуемого средства на каждую вводимую тест-культуру.

Примечание - Чтобы обеспечить эффективное техничное исполнение испытания, используют пробирки для образцов, а не контейнеры от линз. Поскольку между ингредиентами раствора и материалом пробирок может быть несовместимость, необходимо использовать пробирки, изготовленные из соответствующего материала.

Вводят в пробирку с испытуемым образцом средства взвесь испытуемых тест-культур в количестве от 1,0·10⁵ до 1,0·10⁶ КОЕ/мл. Убеждаются, что объем вносимой бактериальной культуры не превышает 1% объема образца. Обеспечивают полное диспергирование инокулята путем надлежащего перемешивания.

5.4.2 Хранят инокулированное средство при температуре от 20 °C до 25 °C. Температуру необходимо отслеживать с помощью калиброванного устройства и регистрировать его показания.

Если средство чувствительно к свету, его следует защитить от попадания света в течение периода проведения испытания.

5.4.3 Берут 1,0 мл аликвотных проб инокулированного средства для определения числа жизнеспособных микроорганизмов на 7 и 14 сутки.

5.4.4 После взятия аликвотных проб 14-дневного инокулята каждое средство вновь инокулируют по 5.4.1, используя введение тест-культур в количестве от 1,0·10⁴ до 1,0·10⁵ КОЕ/мл.

5.4.5 Берут 1,0 мл аликвотных проб инокулированного средства для определения числа жизнеспособных микроорганизмов на 21 и 28 сутки.

5.4.6 Подвергают каждую из 1,0 мл аликвотных проб, взятых через заданные промежутки времени, действию соответствующей серии десятичных разведений в оцененных нейтрализующих средах. Интенсивно перемешивают взвесь встряхиванием и дают постоять, чтобы завершить нейтрализацию. Условия нейтрализации должны базироваться на проверке контроля питательной среды (см. 5.5.2).

Если антибактериальный агент в составе невозможно надлежащим образом инактивировать или нейтрализовать, удаляют его оцененным методом мембранной фильтрации (см. приложение A).

5.4.7 Определяют число жизнеспособных микроорганизмов в соответствующих растворах путем приготовления тройных чашек (если иное не оговорено) с подходящей питательной средой (например, TSA для бактерий и SDA для плесени и дрожжей).

Если была применена мембранная фильтрация для удаления или нейтрализации антибактериальных агентов, культивируют мембраны на этих средах.

Если используется метод чашечного разлива, хранят агар перед разливкой в разливочные чашки при температуре ниже 50 °C.

Примечание - Агаровые среды, используемые для определения числа жизнеспособных микроорганизмов, также могут содержать противомикробные инактиваторы или нейтрализаторы.

5.4.8 Чашки с тест-культурами должны быть инкубированы при температуре от 30 °C до 35 °C, посевы с дрожжевыми грибами (дрожжами) - при температуре от 20 °C до 25 °C или от 30 °C до 35 °C. Посевы с плесневыми грибами инкубируют при температуре от 20 °C до 25 °C. Периоды инкубации для оптимального пророста бактерий, дрожжей и плесени должны быть определены. Минимальные периоды инкубации должны быть основаны на анализе контроля питательной среды (см. 5.5.2). Записывают число наблюдаемых КОЕ/мл на чашках, которые поддаются подсчету.

Чашки во время инкубации следует периодически наблюдать, чтобы предотвратить появление чашек, в которых из-за чрезмерного роста бактерий, дрожжей и плесени КОЕ не поддаются подсчету.

5.4.9 Определяют среднее число КОЕ на чашках, поддающихся подсчету. Вычисляют уменьшение числа микроорганизмов в заданные моменты времени.

Примечание - Каждая чашка, поддающаяся подсчету, содержит от 30 до 300 КОЕ для бактерий и дрожжей и от 8 до 80 КОЕ для плесени, за исключением случаев, когда КОЕ наблюдаются только в чашках для разведения 10⁰ или 10^-1.

5.4.10 Отсутствие микроорганизмов необходимо документировать, например, написав "0" или "НР" (нет роста), когда чашки для всех растворов образца в отдельный момент времени не содержат КОЕ.

5.4.11 Концентрацию жизнеспособных микроорганизмов рассчитывают на каждый заданный момент времени. Концентрация жизнеспособных микроорганизмов в следующие 14 суток инокулирования является суммой концентрации инокулята и концентрации выживших микроорганизмов на 14 сутки.

Начальные и повторные концентрации вносимой бактериальной культуры рассчитывают путем диспергирования идентичной аликвотной пробы инокулированного материала в объеме растворителя по 5.4.1 для получения конечной концентрации от 1,0·10⁵ до 1,0·10⁶ КОЕ/мл для начального инокулирования и от 1,0·10⁴ до 1,0·10⁵ для повторного. Убеждаются, что объем вносимой бактериальной культуры не превышает 1% объема образца. Диспергирование вносимой культуры обеспечивают перемешиванием. Оценивают данный контрольный образец в начале испытания на КОЕ/мл, чтобы продемонстрировать пригодность среды, используемой для роста бактериальной культуры, и обеспечить оценку начальной концентрации исходной вносимой бактериальной культуры. Помещают соответствующую аликвотную пробу из каждой пробирки на три восстановительных агаровых чашки (если иное не оговорено).

Разбавляют 1/10 раствора средства в оцененном нейтрализующем бульоне (1 мл в 9 мл). Дают бульону постоять до завершения реакции нейтрализации. Подготавливают вторую контрольную пробирку, содержащую 10 мл подходящего растворителя (например, DPBST). Вводят в пробирки достаточное количество культуры, чтобы получилось от 10 до 100 КОЕ/мл вводимого микроорганизма на каждую чашку. Выдерживают в течение соответствующего периода времени при температуре окружающей среды, не допуская размножения инокулированных микроорганизмов. Помещают соответствующую аликвотную пробу из каждой пробирки на три восстановительных агаровых чашки (если не оговорено иное).

Для пророста бактерий необходимо выдержать чашки при температуре от 30 °C до 35 °C. Для пророста дрожжей необходимо выдержать чашки при температуре от 20 °C до 25 °C или от 30 °C до 35 °C. Для пророста плесени необходимо выдержать чашки при температуре от 20 °C до 25 °C. Определяют минимальные периоды выдерживания для достижения оптимального пророста бактерий, дрожжей и плесени.

Убеждаются, что рост бактериальных культур в растворе нейтрализующего средства составляет не менее 50% роста бактериальных культур во второй пробирке с подходящим растворителем.

Если для нейтрализации требуется разбавление более чем 1/10, следует применить мембранную фильтрацию.

Оценивают нейтрализацию продукта перед каждым введением микроорганизма.

Испытуемые средства должны удовлетворять указанным критериям на протяжении всего указанного срока годности до утилизации.

Соответствие критериям по 5.6.2 и 5.6.3 должно обеспечиваться в течение 28 суток использования после вскрытия (срок годности).

Примечание - Если дата утилизации больше 28 суток, применяют методы по приложениям B, C, D и E.

Число каждого жизнеспособного микроорганизма, обнаруженного в каждом миллилитре, должно быть на уровне или ниже среднего значения не менее 3log на 14 сутки.

После повторного внесения на 14 сутки бактериальной культуры концентрация каждого жизнеспособного микроорганизма должна быть уменьшена до уровня среднего значения 3log к 28 суткам.

Число каждого жизнеспособного микроорганизма, обнаруженного в каждом миллилитре, должно оставаться на уровне или ниже начальной концентрации в течение 14 суток (в пределах погрешности +/- 0,5log).

На 28 сутки концентрация каждого жизнеспособного микроорганизма должна быть на уровне или ниже концентрации каждого микроорганизма после повторного внесения бактериальной культуры (в пределах погрешности +/- 0,5log).

В протоколе об испытании должна быть представлена следующая информация:

a) ссылка на настоящий стандарт;

b) определение средства:

- наименование средства;

- номер партии;

- конечный срок утилизации;

- изготовитель;

- условия хранения;

- активное(ые) вещество(а) и его (их) концентрация(и) (при необходимости);

c) фамилия/имя (фамилии) оператора(ов);

d) отклонения от протокола;

e) период (дата и время) инкубации;

f) срок хранения инокулированного средства;

g) полученные результаты, включая число жизнеспособных микроорганизмов.

A.1.1.1 Разбавляющая жидкость с нейтрализаторами или без них.

A.1.1.2 Триптоновый соевый агар (TSA).

A.1.1.3 Фосфатно-солевой раствор Dulbecco с буферной добавкой, без хлорида кальция и хлорида марганца (DPBS): 200 мг/л KCl, 200 мг/л, 200 мг/л KH₂PO₄, 8000 мг/л NaCl и 2160 мг/л Na₂HPO₄·7H₂O или подходящий растворитель.

A.1.1.4 Фосфатно-солевой раствор Dulbecco с буферной добавкой, 0,05% (масса/объем) полисорбата 80 (DPBST) или подходящий растворитель.

A.1.1.5 Оцененные нейтрализирующие реактивы/среды (при необходимости), например, нейтрализующий раствор Dey-Engley (DEB) и бульон Letheen <1>.

--------------------------------

<1> Нейтрализующий раствор Dey-Engley (DEB) и бульон Letheen приведены в качестве примеров. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

Обычное испытательное оборудование (например, стерильные пипетки, чашки Петри, контейнеры), включая следующие устройства:

A.1.2.1 Стерильный мембранный фильтр.

A.1.2.2 Стерильный аппарат для размещения стерильного мембранного фильтра и фильтрата.

A.1.2.3 Оборудование для создания вакуума или давления, чтобы обеспечить прохождение жидкой фазы инокулированного тест-раствора через мембранный фильтр с соблюдением стерильности.

Номинальный размер отверстия мембранного фильтра должен быть не более 0,45 мкм, диаметр не менее 47 мм, и материал фильтра не должен содержать химических веществ, которые могут оказать токсическое действие на микробные клетки.

A.2.1 В стерильном фильтровальном устройстве (A.1.2.1) смачивают стерильный мембранный фильтр (A.1.2.1) в стерильном средстве DPBST (A.1.1.4) или в подходящем разбавителе.

A.2.2 С соблюдением стерильности переносят измеренный объем вносимого тест-раствора в стерильный продукт DPBST по A.1.1.4.

A.2.3 Перекачивают разбавленный раствор в мембрану и фильтр посредством вакуума или давления. Разбавляют вносимый тест-раствор объемом от 50 до 100 мл растворяющей жидкостью и тщательно перемешивают, чтобы обеспечить равномерное распределение по всей поверхности фильтра.

Примечание - При этом уменьшается вероятность того, что КОЕ разместятся на фильтре в одном и том же месте.

A.2.4 Промывают мембранный фильтр несколько раз растворяющей жидкостью, которая может содержать дополнительные нейтрализующие вещества (если необходимо). Действительный объем растворяющей жидкости должен быть определен эмпирическим путем по каждому составу для каждого вводимого микроорганизма.

Примечание - Трех объемов растворяющей жидкости (каждый по 100 мл) обычно достаточно для удаления и/или растворения антибактериального агента.

A.2.5 Инкубируют мембранный фильтр соответствующими средами для обеспечения выращивания КОЕ на поверхности фильтра.

Примечание - Это можно осуществить путем стерильного удаления мембранного фильтра из сборочного узла фильтра и установкой мембраны на поверхности стерильной агаровой чашки, без признаков жидкости, или мембрану можно поместить в агаровый сэндвич. Допускается использовать модуль стерильного мембранного фильтра, что требует наличия дополнительных стерильных сред для герметичного фильтра и инкубации мембраны в месте нахождения. При этом должна быть использована подходящая среда и разработан метод испытания. Время инкубации должно быть установлено.

A.2.6 Определяют среднее число КОЕ/мл на мембранных фильтрах, поддающихся подсчету (от 3 до 100 КОЕ/47 мм фильтр для бактерий и от 3 до 10 КОЕ/47 мм фильтр для плесени). Вычисляют и документально фиксируют значение КОЕ/мл инокулированного раствора.

Подтверждают эффективность нейтрализатора путем ввода аликвотной пробы инокулированного тест-раствора в стерильную растворяющую жидкость объемом от 50 до 100 мл, используя то же соотношение объема тест-раствора и объема растворяющей жидкости. Перекачивают весь объем на мембрану и фильтр под давлением или в вакууме. Промывают фильтр несколько раз растворяющей жидкостью, используя тот же объем, что и при процедуре испытания. Переносят от 5 до 100 КОЕ вводимых микроорганизмов (один вид на фильтр) в 100 мл разбавляющей жидкости и наносят на мембрану. Инкубируют мембранный фильтр вместе со средами, как описано в процедуре испытания (см. A.2.5).

Повторяют процедуру с использованием растворяющей жидкости, не подвергавшейся действию тест-раствора. Сравнивают количества с количествами, полученными тем же методом, но с использованием соответствующего растворителя (например, DPBST) вместо тест-раствора. Подтверждают, что культуральный материал на соответствующей среде присутствует (если не указано иное). Убеждаются в том, что восстановление на фильтре в нейтрализаторе составляет не менее 50% культурального материала.

B.1.1 Испытание состоит в инокуляции испытуемых средств микроорганизмами высокой концентрации (примерно 10⁶ КОЕ/мл) на нулевые сутки. Испытуемые средства подвергаются провокационной пробе с низким уровнем инокуляции организмов (примерно 10³ КОЕ/мл) по схеме испытаний.

B.1.2 Моменты инокуляции устанавливают в начале испытания, через 2 недели, затем через 25%, 50%, 75% и 100% предложенного времени до даты утилизации.

B.1.3 Моменты взятия проб должны включать 1, 2, 3, 4 недели и 25%, 50%, 75% и 100% предложенного времени до даты утилизации, а также 14 суток после этой даты.

B.1.4 Испытуемые пробы на 28 сутки должны удовлетворять критериям испытания в соответствии с эффективностью предохранения многодозовых консервантов для ухода за контактными линзами.

B.1.5 После процедуры проведения испытуемых образцов провокационной пробе должен быть указан стаз.

B.2.1.1 Тест-культуры (тест-штаммы)

Тест-культуры - по 5.1.1.

B.2.1.2 Питательные среды и реактивы

Питательная среда и реактивы должны соответствовать питательной среде и реактивам, приведенным в 5.1.2.

B.2.1.3 Испытательное оборудование

Испытательное оборудование должно соответствовать оборудованию, указанному в 5.1.3.

B.2.1.4 Испытуемые образцы и содержание тест-культур

Испытания контрольным инокулированием образцов проводят для подтверждения даты утилизации после даты вскрытия, используя три партии растворов по уходу за контактными линзами, представленных на рынке.

Содержание и сохранение тест-культур должно соответствовать указанному в 5.2.

Приготавливают микробиологическую культуру (инокулят) по 5.3.

B.2.3.1 Приготовляют из отдельных испытуемых образцов комбинированный образец объемом не менее 250 мл.

B.2.3.2 Подготавливают отдельно 50 мл контейнеры на каждую вводимую тест-культуру для каждого подопытного образца.

Помещают подопытный образец в 250 мл флакон или контейнер.

B.2.3.3 Подготавливают 50 мл контейнеры подходящего растворителя для контрольных образцов бактерий, дрожжей и плесени.

B.2.3.4 Инокулируют испытуемый состав образца и контролируют посредством 0,5 мл аликвотной пробы взвесью тест-культур в количестве от 1,0·10⁸ для достижения конечной концентрации 1,0·10⁶ КОЕ/мл. Обеспечивают полное диспергирование инокулята путем интенсивного перемешивания.

B.2.3.5 Хранят инокулированное средство при температуре от 20 °C до 25 °C. Температуру отслеживают с помощью калиброванного устройства и регистрируют его показания.

Если средство чувствительно к свету, его следует защитить от попадания света в течение периода проведения испытания.

B.2.3.6 По состоянию на 1, 2, 3, 4 неделю и на 25%, 50%, 75% и 100% предлагаемой даты утилизации, и на 14 сутки после предполагаемой даты утилизации берут 1,0 мл аликвотных проб инокулированного средства для определения числа жизнеспособных микроорганизмов в каждый период времени.

B.2.3.7 Проводят повторную инокуляцию образца на 2 неделе и после 25%, 50%, 75% и 100% предлагаемой даты утилизации, используя соотношение 0,05 мл/50 мл инокулированного средства с содержанием 10⁶ КОЕ/мл, чтобы обеспечить конечную концентрацию примерно 10³ КОЕ/мл. Повторяют подсчет числа жизнеспособных организмов в каждый период времени перед каждой повторной инокуляцией.

B.2.3.8 Подвергают каждую из 1,0 мл аликвотных проб, взятых через заданные промежутки времени, действию соответствующей серии десятичных разведений в оцененных нейтрализующих средах. Хорошо перемешивают взвесь встряхиванием и дают постоять, чтобы завершить нейтрализацию.

Если антибактериальный агент в составе невозможно надлежащим образом инактивировать или нейтрализовать, удаляют его оцененным методом мембранной фильтрации (см. приложение A).

B.2.3.9 Определяют число жизнеспособных микроорганизмов в соответствующих растворах путем приготовления тройных чашек (если не оговорено иное) с подходящей питательной средой (например, TSA для бактерий и SDA для плесени и дрожжей).

Если была применена мембранная фильтрация для удаления или нейтрализации антибактериальных агентов, культивируют мембраны на этих средах.

Если используется чашечный метод разлива, хранят агар перед разливкой в разливочных чашках при температуре ниже 50 °C.

Примечание - Агаровые среды, используемые для определения количества жизнеспособных микроорганизмов, также могут содержать противомикробные инактиваторы или нейтрализаторы.

B.2.3.10 Чашки с тест-культурами должны быть инкубированы при температуре от 30 °C до 35 °C, посевы с дрожжевыми грибами (дрожжами) - при температуре от 20 °C до 25 °C или от 30 °C до 35 °C. Посевы с плесневыми грибами инкубируют при температуре от 20 °C до 25 °C. Периоды инкубации для оптимального пророста бактерий, дрожжей и плесени должны быть определены. Минимальные периоды инкубации должны основываться на анализе контроля питательной среды (см. B.2.4.2). Записывают число наблюдаемых КОЕ/мл на чашках, которые поддаются подсчету.

B.2.3.11 Определяют среднее число КОЕ на чашках, поддающихся подсчету. Вычисляют уменьшение числа микроорганизмов в заданные моменты времени.

Примечание - Каждая чашка, поддающаяся подсчету, содержит от 30 до 300 КОЕ/на чашку для бактерий и дрожжей и от 8 до 80 КОЕ/на чашку для плесеней, за исключением случаев, когда КОЕ наблюдаются только в чашках для разведения 10⁰ или 10^-1.

B.2.3.12 Отсутствие микроорганизмов необходимо документировать, когда чашки для всех растворов образца в отдельный момент времени не содержат КОЕ.

B.2.3.13 Наличие жизнеспособных микроорганизмов рассчитывают в каждый установленный момент времени.

B.2.4.1 Контроль вносимой бактериальной культуры

Контрольные образцы подпитывают в каждый период инокуляции путем добавления физиологического раствора (для бактерий и дрожжей) или физиологического раствора 80 <1> для плесени таким же образом, как и для инокулированного образца.

--------------------------------

<1> 80 является примером подходящего коммерчески доступного продукта. Эта информация приведена для удобства пользователей данного стандарта и не означает продвижение данного продукта посредством настоящего стандарта.

Теоретические цифры могут быть найдены путем вычисления накопленной суммы последнего внесения инокулята плюс по последним подсчетам числа жизнеспособных микроорганизмов в составе образца.

B.2.4.2 Контроль питательной среды

Дата утилизации подтверждается, если число жизнеспособных бактерий уменьшается на 3log на 14 сутки и их число не увеличивается <2>.

--------------------------------

<2> Концентрация каждого жизнеспособного микроорганизма должна быть на уровне или ниже концентрации каждого микроорганизма после повторного внесения бактериальной культуры в пределах погрешности +/- 0,5log (т.е. рост организмов не обнаружен).

Протокол испытаний должен соответствовать приведенному в 5.7.

C.1.1 Метод состоит из инокулирования средства с заданным внесением подходящих микроорганизмов, хранения инокулята при заданной температуре, изъятия инокулята из контейнера через определенные промежутки времени и подсчета жизнеспособных микроорганизмов в образцах. Способность образцов предотвращать повторный рост подтверждается путем подсчета числа жизнеспособных микроорганизмов в течение более длительных периодов времени.

C.1.2 Размер инокулята, выбранный при этом методе, не предназначен в качестве репрезентативного подобной пробы на практике, но он дает возможность обеспечить подсчет числа микроорганизмов для оценки скорости и степени потери их жизнеспособности.

C.1.3 Средство должно соответствовать требованиям для адекватного хранения контактных линз на начальном этапе и после имитации использования в течение предполагаемого интервала времени до даты утилизации (критерии эффективности содержатся в C.2.7).

C.1.4 Должны быть приняты соответствующие меры для инактивации или удаления остаточных антимикробных препаратов во время культивирования и подсчета жизнеспособных микроорганизмов, и эффективность этих мер должна быть оценена и подтверждена.

Действие этого процесса в ходе испытания должно быть продемонстрировано с помощью соответствующего контроля.

C.2.1.1 Тест-культуры (тест-штаммы)

Тест-культуры - по 5.1.1.

C.2.1.2 Питательные среды и реактивы

Питательная среда и реактивы должны соответствовать питательной среде и реактивам, приведенным в 5.1.2.

C.2.1.3 Испытательное оборудование

Испытательное оборудование должно соответствовать оборудованию, указанному в 5.1.3.

C.2.1.4 Испытуемые образцы и содержание тест-культур

Средство, которое подлежит испытанию, должно быть средством, реализуемым на рынке. Следует испытать три лота (партии) средства.

Аликвотные пробы должны быть взяты непосредственно из конечного контейнера перед проведением испытания. Должно быть применено подходящее число контейнеров для обеспечения достаточного объема средства для испытания после имитации использования.

Сохранение и содержание тест-культур - по 5.2.

Приготовление микробиологической культуры (инокулята) - по 5.3.

C.2.3.1 Методика испытаний контрольным введением тест-культуры - по 5.4.

Используя непривитое средство в оригинальной упаковке, подвергают его имитацией использования распределением соответствующих аликвот из контейнеров на срок не менее намеченной даты утилизации (т.е. расходовать по 1 мл каждые 3 дня в течение трех месяцев).

Должно быть использовано подходящее число контейнеров, чтобы обеспечить достаточный объем продуктов, доступный для испытания контрольным введением тест-культур после имитации использования (т.е. контейнеры могут быть объединены, чтобы обеспечить достаточный объем средства для испытания).

В конце периода имитации использования повторяют испытания по C.2.3.

C.2.6.1 Контроль вносимой бактериальной культуры

Начальные и повторные концентрации вносимой бактериальной культуры рассчитывают путем диспергирования идентичной аликвотной пробы инокулированного материала в объеме растворителя по 5.4.1 для получения конечной концентрации от 1,0·10⁵ до 5,0·10⁶ КОЕ/мл для начального инокулирования и от 1,0·10⁴ до 1,0·10⁵ КОЕ/мл - для повторного инокулирования. Убеждаются, что объем вносимой бактериальной культуры не превышает 1% объема образца. Диспергирование вносимой культуры необходимо обеспечить перемешиванием. Оценивают данный контрольный образец в начале испытания на КОЕ/мл, чтобы продемонстрировать пригодность среды, используемой для роста бактериальной культуры, и обеспечить оценку начальной концентрации исходной вносимой бактериальной культуры. Помещают соответствующую аликвотную пробу из каждой пробирки на три восстановительных агаровых чашки (если не оговорено иное).

C.2.6.2 Контроль питательной среды

C.2.7.1 Основные критерии

Используемые средства должны соответствовать критериям эффективности как для начальной концентрации вносимой бактериальной культуры, так и для последней концентрации имитационного использования.

C.2.7.2 Бактерии

C.2.7.3 Плесени и дрожжи

Протокол испытаний должен соответствовать протоколу по 5.7.

D.1.1 Метод состоит из заражения средства внесением подходящих микроорганизмов, хранения инокулята при заданной температуре, изъятия инокулята из контейнера через определенные промежутки времени и подсчета числа микроорганизмов в образцах. Способность образцов предотвращать повторный рост подтверждается путем подсчета числа жизнеспособных микроорганизмов в течение более длительных периодов времени.

D.1.2 Размер инокулята, выбранный при этом методе, не предназначен в качестве репрезентативного подобной пробы на практике, но он дает возможность обеспечить подсчет числа микроорганизмов для оценки скорости и степени потери их жизнеспособности.

D.1.3 Средство должно соответствовать требованиям для адекватного хранения контактных линз на начальном этапе и после имитации использования в течение предполагаемого интервала времени до даты утилизации (критерии эффективности содержатся в D.2.7).

D.1.4 Должны быть приняты соответствующие меры для инактивации или удаления остаточных антимикробных препаратов во время культивирования и подсчета числа оставшихся жизнеспособных микроорганизмов, и эффективность этих мер должна быть подтверждена. Действие этого процесса в ходе испытания должно быть продемонстрировано с помощью соответствующего контроля.

D.2.1.1 Тест-культуры

Тест-культуры - по 5.1.1.

D.2.1.2 Питательные среды и реактивы

Питательная среда и реактивы должны соответствовать питательной среде и реактивам, приведенным в 5.1.2.

D.2.1.3 Испытательное оборудование

Испытательное оборудование должно соответствовать оборудованию, указанному в 5.1.3.

D.2.1.4 Испытуемые образцы и содержание тест-культур

Средство, которое подлежит испытанию, должно быть средством, реализуемым на рынке. Следует испытать три лота (партии) средства. Испытание проводят непосредственно в наибольшем по размеру контейнере средства.

Содержание тест-культур - по 5.2.

Приготовление микробиологической культуры (инокулята) - по 5.3.

D.2.3.1 Вводят в пробирку с испытуемым образцом средства взвесь испытуемых тест-культур в количестве от 1,0·10⁵ до 1,0·10⁶ КОЕ/мл. Убеждаются, что объем вносимой бактериальной культуры не превышает 1% объема образца. Обеспечивают полное диспергирование инокулята путем надлежащего перемешивания.

D.2.3.2 Хранят инокулированное средство при температуре от 20 °C до 25 °C. Температуру необходимо отслеживать с помощью калиброванного устройства и регистрировать его показания.

Если средство чувствительно к свету, его следует защитить от попадания света в течение периода проведения испытания.

D.2.3.3 Берут 1,0 мл аликвотных проб инокулированного средства для определения числа жизнеспособных микроорганизмов на 7, 14, 21 и 28 сутки инокуляции и продолжают отбор проб с 7-дневными интервалами, пока содержание средства закончится.

D.2.3.4 Подвергают каждую из 1,0 мл аликвотных проб, взятых через заданные промежутки времени, действию соответствующей серии десятичных разведений в оцененных нейтрализующих средах. Тщательно перемешивают взвесь встряхиванием (на вортексе) и дают постоять, чтобы завершить нейтрализацию. Условия нейтрализации должны быть основаны на анализе контроля питательной среды (см. 5.5.2).

Если антибактериальный агент в составе невозможно надлежащим образом инактивировать или нейтрализовать, удаляют его оцененным методом мембранной фильтрации (см. приложение A).

D.2.3.5 Определяют число жизнеспособных микроорганизмов в соответствующих растворах путем приготовления тройных чашек (если иное не оговорено) с подходящей восстановительной средой (например, TSA для бактерий и SDA для плесени и дрожжей).

Если была применена мембранная фильтрация для удаления или нейтрализации антибактериальных агентов, культивируют мембраны на этих средах.

Если используется чашечный метод разлива, хранят агар перед разливкой в разливочные чашки при температуре ниже 50 °C.

Примечание - Агаровые среды, используемые для определения числа жизнеспособных микроорганизмов, также могут содержать противомикробные инактиваторы или нейтрализаторы.

D.2.3.6 Чашки с тест-культурами должны быть инкубированы при температуре от 30 °C до 35 °C, посевы с дрожжевыми грибами (дрожжами) - при температуре от 20 °C до 25 °C или от 30 °C до 35 °C. Посевы с плесневыми грибами инкубируют при температуре от 20 °C до 25 °C. Периоды инкубации для оптимального пророста бактерий, дрожжей и плесени должны быть определены. Минимальные периоды инкубации должны быть основаны на анализе контроля питательной среды (см. 5.5.2). Записывают число наблюдаемых КОЕ/мл на чашках, которые поддаются подсчету.

D.2.3.7 Определяют среднее число КОЕ на чашках, поддающихся подсчету. Вычисляют уменьшение числа микроорганизмов в заданные моменты времени.

Примечание - Каждая чашка, поддающаяся подсчету, содержит от 30 до 300 КОЕ для бактерий или дрожжей и от 8 до 80 КОЕ для плесени, за исключением случаев, когда КОЕ наблюдаются только в чашках для разведения 10⁰ или 10^-1.

D.2.3.8 Отсутствие микроорганизмов необходимо документировать, например, написав "0" или "НР" (нет роста), когда чашки для всех растворов образца в отдельный момент времени не содержат КОЕ.

D.2.3.9 Концентрацию выживших микроорганизмов рассчитывают на каждый момент времени инокуляции.

D.2.4.1 Контроль вносимой бактериальной культуры

Начальную концентрацию инокулята рассчитывают путем диспергирования идентичной аликвотной пробы в объеме растворителя, который используется в D.2.3.1, чтобы достичь конечной концентрации от 1,0·10⁴ до 5,0·10⁵ КОЕ/мл. Убеждаются, что объем вносимой бактериальной культуры посева не превышает 1% объема образца. Обеспечивают диспергирование бактериальной культуры перемешиванием. Оценивают этот контрольный образец на КОЕ/мл в начале испытания, чтобы продемонстрировать пригодность средства, используемого для роста испытуемого микроорганизма, и определяют начальную концентрацию исходной вносимой бактериальной культуры. Помещают соответствующую аликвотную пробу из каждой пробирки на три восстановительные агаровые чашки (если не оговорено иное).

D.2.4.2 Контроль питательной среды

D.2.5.1 Бактерии, плесень и дрожжи

Число жизнеспособных микроорганизмов должно оставаться на начальных концентрациях или ниже.

D.2.5.2 Определение даты утилизации

Дата утилизации средства должна соответствовать интервалу времени, который показывает увеличение числа любых микроорганизмов.

Протокол испытаний - по 5.7.

E.1.1 Метод состоит из инокуляции испытуемых средств микроорганизмами с низким уровнем концентрации.

E.1.2 Время инокуляции: начало испытания, 24 ч, 1 неделя, 2 недели, 4 недели, 6 недель, 8 недель, 12 недель, 16 недель, 18 недель, 24 недели и далее с шестинедельными интервалами, и/или пока желательная или отмеченная дата утилизации не будет превышена дважды.

E.1.3 Время отбора контрольных образцов начинается через 24 ч и продолжается перед каждым повторным инокулированием, а также в конце испытаний.

E.1.4 Чтобы контрольные образцы прошли испытание, результат подсчета микроорганизмов во всех контрольных образцах должен быть меньше результата общего подсчета после последнего введения плюс предыдущий подсчет выживших микроорганизмов.

E.1.5 Испытание на определение даты утилизации проводят как дополнение к испытаниям эффективности многодозовых консервантов для средств ухода за контактными линзами в качестве контрольного инокулирования для подтверждения маркированного срока годности. Требования к дате утилизации должны быть выдержаны на протяжении всего маркированного срока годности.

E.2.1.1 Тест-культуры (тест-штаммы)

Тест-культуры - по 5.1.1.

E.2.1.2 Питательные среды и реактивы

Питательная среда и реактивы должны соответствовать питательной среде и реактивам, приведенным в 5.1.2.

E.2.1.3 Испытательное оборудование

Испытательное оборудование должно соответствовать оборудованию, указанному в 5.1.3.

E.2.1.4 Испытуемые образцы и содержание тест-культур

Средство, которое подлежит испытанию, должно быть средством, реализуемым на рынке. Следует испытать три лота (партии) средства. Испытание проводят непосредственно в двух контейнерах средства для каждого микроорганизма в соответствии с графиком времени введения по E.1.2.

Содержание тест-культур - по 5.2.

Приготовление микробиологической культуры (инокулята) - по 5.3.

E.2.3.1 В нулевой день вводят в пробирку с испытуемым образцом средства взвесь испытуемых тест-культур в количестве от 1,0·10³ до 2,0·10³ КОЕ/мл. Убеждаются, что объем вносимой бактериальной культуры не превышает 0,5% объема образца в каждый период инокуляции. Обеспечивают полное диспергирование инокулята путем надлежащего перемешивания.

E.2.3.2 Хранят инокулированное средство при температуре от 20 °C до 25 °C. Температуру необходимо отслеживать с помощью калиброванного устройства и регистрировать его показания. Если средство чувствительно к свету, его следует защитить от попадания света в течение периода проведения испытания.

E.2.3.3 Через 24 ч берут 1,0 мл аликвотных проб инокулированного средства для определения числа жизнеспособных микроорганизмов.

E.2.3.4 Повторно вводят взвесь испытуемых тест-культур с соблюдением требований E.2.3.1 - E.2.3.3 до 7 суток. Повторяют процедуру инокуляции на 2-й, 4-й, 8-й, 18-й и 24-й неделях и продолжают отбор проб с 6-недельными интервалами, пока предполагаемая дата утилизации не будет достигнута.

E.2.3.5 Подвергают каждую из 1,0 мл аликвотных проб, взятых через заданные промежутки времени, действию соответствующей серии десятичных разведений в оцененных нейтрализующих средах. Тщательно перемешивают взвесь встряхиванием (на вортексе) и дают постоять, чтобы завершить нейтрализацию. Условия нейтрализации должны быть основаны на анализе контроля питательной среды (см. 5.5.2).

Если антибактериальный агент в составе невозможно надлежащим образом инактивировать или нейтрализовать, удаляют его оцененным методом мембранной фильтрации (см. приложение A).

E.2.3.6 Определяют число жизнеспособных микроорганизмов в соответствующих растворах путем приготовления тройных чашек (если не оговорено иное) с подходящей питательной средой (например, TSA для бактерий и SDA для плесени и дрожжей).

Если была применена мембранная фильтрация для удаления или нейтрализации антибактериальных агентов, культивируют мембраны на этих средах.

Если используется чашечный метод разлива, хранят агар перед разливкой в разливочные чашки при температуре ниже 50 °C.

Примечание - Агаровые среды, используемые для определения числа жизнеспособных микроорганизмов, также могут содержать противомикробные инактиваторы или нейтрализаторы.

E.2.3.7 Чашки с тест-культурами должны быть инкубированы при температуре от 30 °C до 35 °C, посевы с дрожжевыми грибами (дрожжами) - при температуре от 20 °C до 25 °C или от 30 °C до 35 °C. Посевы с плесневыми грибами инкубируют при температуре от 20 °C до 25 °C. Периоды инкубации для оптимального пророста бактерий, дрожжей и плесени должны быть определены. Минимальное время инкубации должно быть основано на анализе контроля питательной среды (см. E.2.4.2).

E.2.3.8 Определяют среднее число КОЕ на чашках. Вычисляют уменьшение числа микроорганизмов в заданные моменты времени.

Примечание - Каждая чашка, поддающаяся подсчету, содержит от 30 до 300 КОЕ для бактерий или дрожжей и от 8 до 80 КОЕ для плесени, за исключением случаев, когда КОЕ наблюдаются только в чашках для разведения 10⁰ или 10^-1.

E.2.3.9 Отсутствие микроорганизмов необходимо документировать, например, написав "0" или "НР" (нет роста), когда чашки для всех растворов образца в отдельный момент времени не содержат КОЕ.

E.2.3.10 Концентрацию выживших микроорганизмов рассчитывают на каждый момент времени инокуляции.

E.2.4.1 Контроль вносимой бактериальной культуры

Начальные и повторные концентрации вносимой бактериальной культуры в каждый временной интервал рассчитывают путем диспергирования идентичной аликвотной пробы инокулированного материала в объеме растворителя по 5.4.1. Убеждаются, что объем вносимой бактериальной культуры не менее объема испытуемого образца. Диспергирование вносимой культуры необходимо обеспечить перемешиванием. Оценивают данный контрольный образец в начале испытания на КОЕ/мл, чтобы продемонстрировать пригодность среды, используемой для роста бактериальной культуры, и обеспечить оценку начальной концентрации исходной вносимой бактериальной культуры. Помещают соответствующую аликвотную пробу из каждой пробирки на три восстановительные агаровые чашки (если не оговорено иное).

E.2.4.2 Контроль питательной среды

Контроль питательной среды - по 5.5.2.

E.2.5.1 Испытания проводят не менее двух раз для предполагаемой даты утилизации.

E.2.5.2 Число жизнеспособных микроорганизмов не должно быть больше суммы числа жизнеспособных микроорганизмов последнего введения плюс числа жизнеспособных микроорганизмов предыдущего введения в пределах +/- 0,5log (т.е. умножения микроорганизмов не произошло).

E.2.5.3 Средства должны удовлетворять всем критериям на протяжение маркированного срока годности плюс дополнительного времени даты утилизации после вскрытия по окончании срока годности.

Протокол испытаний - по 5.7.