"ГОСТ EN 16344-2016. Межгосударственный стандарт. Продукция косметическая солнцезащитная. Качественное определение УФ-фильтров и количественное определение 10 УФ-фильтров методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(введен в действие Приказом Росстандарта от 04.04.2024 N 424-ст)

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по результатам голосования (протокол от 27 июля 2016 г. N 89-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 4 апреля 2024 г. N 424-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 16344-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2025 г. с правом досрочного применения

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 16344:2013 "Косметика. Анализ косметической продукции. Скрининг УФ-фильтров в косметической продукции и количественное определение 10 УФ-фильтров методом высокоэффективной жидкостной хроматографии HPLC" ("Cosmetics - Analysis of cosmetic products - Screening for UV-filters in cosmetic products and quantitative determination of 10 UV-filters by HPLC", IDT).

Редакционные изменения в тексте стандарта выделены курсивом.

Европейский стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 392 "Косметика" Европейского комитета по стандартизации (CEN).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного европейского стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001 (подраздел 3.6)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

В настоящем стандарте имеется ссылка на следующее приложение Регламента (EC) N 1223/2009 Европейского парламента и Совета от 30 ноября 2009 г. по косметической продукции (далее - Регламент (EC) N 1223/2009):

приложение VI - Перечень УФ-фильтров, разрешенных к использованию в косметической продукции.

В техническом регламенте Таможенного союза ТР ТС 009/2011 "О безопасности парфюмерно-косметической продукции", гармонизированном с Регламентом (EC) N 1223/2009, перечень УФ-фильтров, разрешенных к использованию в косметической продукции, приведен в приложении 5.

Настоящий стандарт устанавливает метод с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для обнаружения УФ-фильтров, разрешенных для использования нормативными документами, распространяющимися на косметическую продукцию. Данный метод предназначен также для количественного определения 10 УФ-фильтров, используемых главным образом в косметической солнцезащитной продукции на эмульсионной основе и в виде спрея, для определения их максимальной концентрации, регламентированной нормативными документами, распространяющимися на косметическую продукцию.

Могут использоваться другие аналитические методы качественного и количественного определения УФ-фильтров, если они обеспечивают получение сопоставимых результатов.

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

2.1 УФ-фильтры (UV-filters): Органические химические соединения, поглощающие ультрафиолетовые лучи, и неорганические вещества, отражающие, рассеивающие и поглощающие ультрафиолетовые лучи.

УФ-фильтры экстрагируют смесью ацетона и метанола. Для качественного определения упомянутых УФ-фильтров и количественного определения 10 УФ-фильтров используют метод обращенно-фазовой ВЭЖХ с УФ-детектированием. Данный метод может также применяться для количественной оценки других УФ-фильтров после соответствующей валидации.

Для количественного анализа продукции, содержащей следующие УФ-фильтры, необходимо дополнительно провести экстрагирование и определение:

- терефталилидин дикамфорную сульфокислоту (TDSA) и динатрий фенил дибензимидазол тетрасульфонат (DPDT) дополнительно экстрагируют раствором гидроксида натрия в смеси метанола и воды;

- метилен бис-бензотриазолил тетраметилбутилфенол (MBBT) и бис-этилгексилоксифенол метоксифенил триазин (BEMT) дополнительно экстрагируют смесью тетрагидрофурана и ацетона.

В случае получения неудовлетворительной формы пика бутил метоксидибензоилметан (BMDM) дополнительно экстрагируют смесью ацетона, метанола и этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA).

Количественное определение проводят посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ с УФ-детектором. УФ-спектры сравнивают со спектрами в базе данных.

Содержание каждого УФ-фильтра, полученное согласно данному методу, в протоколе испытания записывают в граммах на 100 г.

Данный метод был протестирован при проведении межлабораторных испытаний на конкретных матрицах косметической продукции (см. приложение A). Пользователь должен проверить показатели прецизионности метода в своей лаборатории для каждой другой матрицы и обратить особое внимание на рекомендации по контролю качества.

Если не указано иное, используют только реактивы с аналитической или более высокой степенью чистоты. Используемая вода должна быть дистиллированной или соответствующей ей по чистоте. Под "раствором" следует понимать водный раствор, если не указано иное.

4.2 Метанол (MeOH) для ВЭЖХ.

4.3 Ацетон для ВЭЖХ.

4.4 Тетрагидрофуран (THF) для ВЭЖХ.

4.5 Раствор аммиака с массовой долей w = 25 г/100 г.

4.6 Раствор гидроксида натрия молярной концентрации c = 1 моль/дм³.

4.7 Этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA) динатриевой соли дигидрат (Na₂EDTA·2H₂O), номер CAS: 6381-92-6, содержание основного вещества > 99%.

4.8 Раствор EDTA

Взвешивают 1,8 г Na₂EDTA·2H₂O (4.7) в мерную колбу вместимостью 100 см³ и добавляют воду до метки.

4.9 Этанол для ВЭЖХ.

4.10 Лаурилтриметил аммония бромид (LTAB, синоним: додецилтриметил аммония бромид. CAS 1119-94-4), при возможности для ВЭЖХ (содержание основного вещества >= 98%).

4.11 Бромид аммония (CAS 12124-97-9) (содержание основного вещества >= 99%).

4.12 Калибровочные вещества

Примечание - На следующие УФ-фильтры, указанные в Регламенте (EC) N 1223/2009 (приложение VI) [ТР ТС 009/2011 (приложение 5)], метод настоящего стандарта не распространяется:

- A9: 3-(4'-сульфо)-бензилиден-борнан-2-он, CAS 56039-58-8;

- A11: полимер N-(2(и 4)-(2-оксоборн-3-илиденметил)бензил)акриламида, CAS 113783-61-2 (отсутствует в продаже);

- A13: этоксилированный этил-4-аминобензоат, CAS 116242-27-4 (может быть определен только качественно);

- A26: диметикодиэтилбензалмалонат, CAS 207574-74-1 (не может быть определен по методу настоящего стандарта).

4.13.1 Смесь ацетона и метанола (для приготовления калибровочных растворов и растворов для экстракции).

Смешивают 500 см³ ацетона (4.3) и 500 см³ метанола (4.2) в конической колбе вместимостью 1000 см³.

4.13.2 Смесь ацетона и тетрагидрофурана (для экстракции неполярных УФ-фильтров).

Смешивают 500 см³ ацетона (4.3) и 500 см³ тетрагидрофурана (4.2) в конической колбе вместимостью 1000 см³.

4.13.3 Раствор гидроксида натрия в смеси метанола и воды (для экстракции полярных УФ-фильтров).

Смешивают 800 см³ метанола (4.2), 200 см³ воды и 10 см³ раствора гидроксида натрия (4.6) в конической колбе вместимостью 1000 см³.

4.13.4 Смесь ацетона, метанола и раствора EDTA для экстракции из продукции, содержащей BMDM, в случае получения неудовлетворительной формы пика.

Добавляют 1,0 см³ раствора EDTA (4.8) к 200 см³ смеси ацетона и метанола (4.13.1) в конической колбе вместимостью 200 см³. Так как раствор является перенасыщенным в отношении EDTA, его следует использовать в день приготовления.

Основные калибровочные растворы приготавливают в соответствии с таблицами 5, 6 и 7. Взвешивают навеску каждого вещества с точностью до 0,1 мг и доводят соответствующим растворителем до указанного объема. Для каждого вещества готовят один основной калибровочный раствор. При определении исходной массы навески следует учитывать чистоту веществ и (при необходимости) доводить концентрацию "активного вещества" до 4 мг/см³ в каждом случае. Основные калибровочные растворы хранят в течение одного месяца в темном месте в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C.

Основные калибровочные растворы УФ-фильтров B-1, B-2, B-6, B-8, B-10, MA и DPLT можно приготовить, используя в качестве растворителя смесь ацетона и метанола (4.13.1). Растворы PABA и SA готовят с использованием метанола в качестве растворителя. Раствор B-9 готовят в соответствии с процедурой для PBSA (4.12.2). Раствор B-9 имеет желтую окраску, но эксперименты показали, что разрушение вещества не происходит и окраска раствора на результат испытания не влияет.

Калибровочные растворы готовят по схеме, указанной в таблице 8. Основные калибровочные растворы определенного объема для каждого УФ-фильтра (полярного) (см. таблицу 5), среднеполярного (см. таблицу 6) и неполярного (см. таблицу 7), используют для приготовления калибровочного раствора 1 (Cal 1) и доводят до метки либо метанолом (MeOH), либо смесью ацетона и метанола (MeOH/ацетон), либо тетрагидрофураном (THF). Следующие калибровочные растворы готовят из калибровочного раствора 1 (Cal 1). Их используют в калибровочном диапазоне от 10 до 400 нг. Для испытания вводят пробу объемом 1 мм³. Калибровочные растворы хранят в течение недели в темном месте в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C.

Во время проведения испытания калибровочные растворы должны быть защищены от воздействия света.

Взвешивают 3,0 г лаурил триметил аммония бромида (LTAB) (4.10), 1,0 г бромида аммония (4.11) и 2,5 см³ раствора EDTA (4.8) в мерную колбу вместимостью 1000 см³ и добавляют воду до метки.

Взвешивают 3,0 г лаурил триметил бромида аммония (LTAB) (4.10), 1,0 г бромида аммония (4.11) в мерную колбу вместимостью 1000 см³ и добавляют этанол (4.9) до метки.

В дополнение к обычному лабораторному оборудованию требуется следующее:

5.1 Аналитические весы с точностью взвешивания до 0,1 мг.

5.2 Колба Эрленмейера - коническая колба со стеклянной пробкой вместимостью 50 см³.

5.3 Лабораторный встряхиватель (шейкер).

5.4 Ультразвуковая баня с нагревателем, имеющим устройство контроля температуры.

5.5 Центрифуга (не менее 2500g).

5.6 Мембранный фильтр для фильтрования пробы, например из PTFE, с размером отверстий 0,2 мм³ <1>.

--------------------------------

<1> Для кольцевого испытания используют фильтры диаметром 0,2 м, которые могут использоваться в течение длительного времени.

5.7 Высокоэффективный жидкостный хроматограф, состоящий из:

- устройства ввода пробы;

- насосной системы с градиентной функцией;

- дегазатора;

- колоночного термостата;

- фотодиодно-матричного детектора;

- системы обработки информации.

Колонка Kromasil C18, зернением 5 мкм, длиной 125 мм, с внутренним диаметром, например, 2, 3 или 4 мм.

Используют предколонку с неподвижной фазой, аналогичную аналитической разделительной колонке.

Методика отбора проб не является частью метода настоящего стандарта.

Взвешивают 90 - 120 мг пробы с точностью до 0,1 мг в коническую колбу вместимостью 50 см³ (5.2), добавляют 25 см³ смеси ацетона и метанола (4.13.1) с помощью градуированной пипетки и энергично встряхивают. Закрывают коническую колбу притертой пробкой и подвергают пробу экстрагированию в течение 15 мин при температуре 50 °C в ультразвуковой бане. После охлаждения (по истечении 20 мин) центрифугируют суспензию в течение 5 мин, если возможно - при ускорении 2500g. Фильтруют около 1 см³ надосадочной жидкости через мембранный фильтр из PTFE (5.6). Вводят фильтрат в систему высокоэффективной жидкостной хроматографии.

При необходимости массу пробы можно изменять в зависимости от концентрации УФ-фильтра в пробе.

Необходимо следить за тем, чтобы растворитель не испарялся во время экстракции. Для обнаружения потерь растворителя к экстракту пробы добавляют УФ-фильтр бензофенон-10 (4.12.30) в концентрации w = 0,1 мг/см³ в качестве внутреннего стандарта.

Экстракцию проводят согласно 7.1.1; однако для некоторых анализируемых веществ необходимо использовать растворители для экстракции, указанные в таблице 9.

Во время испытания все растворы проб должны быть защищены от воздействия света.

Качественный и количественный анализ проводят посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ. Примером наиболее оптимальных рабочих условий ВЭЖХ являются условия, указанные ниже. Условия должны быть адаптированы для используемой аппаратуры, колонок и подвижных фаз:

- объем вводимой пробы: например, 1 мм³;

- температура колонки: (30 +/- 1) °C;

- обнаружение: на длинах волн 300, 350 нм.

УФ-спектральный диапазон: 220 - 420 нм.

Примечание - При промывании системы ввода пробы смесь ацетона и метанола в соотношении по объему 1:1 (4.13.1) является пригодной для удаления остатков пробы, которые могут наблюдаться, в частности, в случае неполярных УФ-фильтров (MBBT и BEMT).

При использовании систем ВЭЖХ с различным объемом задержки градиент должен быть соответствующим образом скорректирован. Особое внимание должно быть уделено тому, чтобы вещество не вымывалось во время изменения градиента. Это привело бы к недостоверным результатам. В следующих таблицах приведены примеры трех альтернативных градиентных программ (в зависимости от внутренних диаметров колонки).

Время от времени колонку можно отсоединять для обратной промывки ацетоном или THF. Если эффективность разделения не является удовлетворительной, предколонку следует заменить.

Площади пиков определяют при длине волны 300 или 350 нм соответственно (см. приложение B).

При необходимости калибровку можно проводить при любой наиболее подходящей длине волны и/или по высоте пика. Распределение пиков на хроматограмме осуществляется в зависимости от времени удерживания и УФ-спектра.

Если форма пика BMDM (4.12.15) не является удовлетворительной, проводят дополнительное экстрагирование смесью ацетона, метанола и EDTA (4.13.4) (см. приложение C).

Количественную оценку выполняют с помощью калибровочной кривой, построенной с использованием значений площади или высоты пика внешних стандартов

где y - площадь или высота пика внешнего стандарта;

x - концентрация внешнего стандарта;

m - наклон калибровочной кривой;

b - калибровочной кривой.

Количество определяемого вещества x, нг, вычисляют по линии регрессии по площади или высоте пика.

Содержание УФ-фильтра в пробе, г/100 г, вычисляют по формуле

где - содержание УФ-фильтра, г/100 г;

x - масса определяемого вещества, полученная по калибровочной кривой, нг;

InjV - объем вводимой пробы, мм³ (например, 1 мм³);

m - масса навески пробы, мг;

V - объем экстракта, см³ (в данном случае 25 см³);

VF - коэффициент разбавления (применяется только в случае, если проба разбавлена);

10 - коэффициент преобразования (мг/г в г/100 г).

В случае УФ-фильтра октокрилена (OC - A10) определяют содержание эфира, которое пересчитывают в содержание соответствующей кислоты. Молекулярная масса эфира 361,48 г/моль, молекулярная масса свободной кислоты 249,27 г/моль. Коэффициент пересчета 0,69.

Содержание в протоколе испытаний записывают в граммах на 100 г с округлением до третьего десятичного знака.

Протокол испытания должен содержать:

a) сведения, необходимые для идентификации образца (вид, состав и наименование продукции);

b) ссылку на настоящий стандарт;

c) наименование лаборатории, проводившей испытание;

d) дату и метод отбора образца (если это известно);

e) дату поступления образца и выдачи результатов испытания;

f) дату проведения испытания;

g) результаты испытания и единицы измерений, в которых они выражены;

h) обоснование отклонений от метода данного стандарта;

i) операции, не указанные в методе или рассматриваемые как дополнительные, которые могли бы повлиять на результаты.

Метод настоящего стандарта разработан рабочей группой "Косметика" Немецкой федеральной организации по защите потребителей и безопасности пищевой продукции (BVL) с целью реализации требований раздела 64 Кодекса по пищевым продуктам и кормам (LFGB). Он был протестирован в межлабораторных испытаниях, в которых приняли участие 10 лабораторий.

Показатели прецизионности метода были проверены для следующих УФ-фильтров:

- бис-этилгексилофенол метоксилфенил триазин (BEMT, 4.12.21);

- бутил метоксидибензоилметан (BMDM, 4.12.15);

- диэтилгексил бутамидо триазон (DEBT, 4.12.18);

- дрометризол трисилоксан (DTS, 4.12.17);

- этилгексил метоксициннамат (EHMC, 4.12.9);

- этилгексил триазон (EHT, 4.12.16);

- изоамил p-метоксициннамат (IMC, 4.12.10);

- метилен бис-бензотриазол тетраметилбутилфенол (MBBT, 4.12.20);

- октокрилен (OC, 4.12.8);

- терефталиден дикамфор сульфоновая кислота (TDSA, 4.12.3).

Образец 1: солнцезащитное молочко, солнцезащитный фактор 40.

Образец 2: солнцезащитный спрей, солнцезащитный фактор 50.

Образец 3: солнцезащитная продукция (эмульсия типа масло в воде), солнцезащитный фактор неизвестен.

Образцы 1 и 2 имеются в продаже, а образец 3 был приготовлен специально для межлабораторных испытаний.

Любые торговые наименования, упомянутые в настоящем стандарте, или любые описания продукта, касающиеся конкретных поставщиков, приведены только в качестве информации для пользователей настоящим методом, но это не означает, что CEN рекомендует именно этот продукт. Аналогичные продукты могут использоваться при условии, что при испытании будут получены такие же результаты.