"ГОСТ 34658-2020. Межгосударственный стандарт. Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Оценка раздражающего/разъедающего воздействия на глаза"
(введен в действие Приказом Росстандарта от 21.10.2020 N 892-ст)

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Российский научно-технический центр информации по стандартизации, метрологии и оценке соответствия" (ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июня 2020 г. N 131-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 21 октября 2020 г. N 892-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31658-2020 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2021 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD Test N 405:2017 "Руководство по испытанию химических веществ. Острое раздражающее/разъедающее действие на слизистые оболочки глаз" ("Guideline for testing of chemicals. Acute eye irritation/corrosion", MOD) путем:

- включения дополнительного раздела 1 и подраздела 2.2, фраз, которые выделены в тексте курсивом;

- изменения его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного документа приведено в дополнительном приложении ДА.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Руководства Организации экономического сотрудничества и развития (OECD) по испытаниям химических веществ периодически пересматриваются для приведения в соответствие с имеющимися научными данными. В предыдущих версиях данного руководства особое внимание уделялось возможности оценки всей имеющейся информации об исследуемом веществе, чтобы избежать проведения ненужных испытаний на лабораторных животных и решить проблемы гуманного обращения с животными. Настоящее руководство, принятое в 1981 г. и обновленное в 1987, 2002 и 2012 гг., включает рекомендацию о необходимости проведения анализа имеющихся весомых доказательств <1> для прогнозирования токсической опасности перед проведением испытаний in vivo на острое раздражающее/разъедающее действие на глаза. При недостаточном количестве данных рекомендуется следовать руководству <2> по комплексным подходам к исследованию и по оценке серьезных повреждений и раздражений слизистых оболочек глаз. Исследования на животных следует проводить только в случае установления их необходимости после рассмотрения доступных альтернативных методов, использование которых признано соответствующим. На момент разработки данного обновленного руководства были случаи, когда его использование все еще признавалось необходимым или требовалось некоторыми регулирующими органами.

--------------------------------

<1> См. [1].

<2> См. [21].

Последнее обновление касалось в основном использования анальгетиков и анестезирующих веществ без изменения основной концепции и структуры руководства по испытанию. Межведомственный координационный комитет по официальному утверждению альтернативных методов (ICCVAM) и независимая международная научная экспертная комиссия рассмотрели пользу и ограничения регулярного использования местных анестетиков, системных анальгетиков, а также гуманных конечных точек во время испытания in vivo для безопасности и снижения раздражения слизистой оболочки глаз <3>. В обзоре был сделан вывод о том, что использование местных анестетиков и системных анальгетиков позволит избежать большинства или всех болей и дистресса без влияния на результаты испытания, поэтому было рекомендовано всегда использовать эти вещества. В настоящем руководстве учтены данные этого обзора. Местные анестезирующие препараты, системные анальгетики и гуманные конечные точки следует регулярно использовать во время испытаний in vivo острого раздражения и разъедания слизистой оболочки глаз. Исключение их использования должно быть обосновано. Усовершенствования, приведенные в этом руководстве, позволят существенно уменьшить или избежать боли и дистресса у животных в большинстве ситуаций при испытании, где необходимо исследование безопасности глаз in vivo.

--------------------------------

<3> См. [12].

Сбалансированное упреждающее применение обезболивающих средств должно включать:

i - обычную предварительную обработку местным анестетиком (например, пропаракаином или тетракаином) и системным анальгетиком (например, бупренорфином);

ii - обычную схему послеоперационной системной анальгезии (например, бупренорфином и мелоксикамом);

iii - плановое наблюдение, мониторинг и регистрацию животных с клиническими признаками боли и/или дистресса и

iv - плановое наблюдение, мониторинг и регистрацию характера, тяжести и прогрессирования всех повреждений глаз.

Более подробная информация представлена в обновленных процедурах, приведенных ниже. После применения исследуемого химического вещества не следует использовать дополнительные местные анестетики или анальгетики с целью предотвращения вмешательства в исследование. Не следует наносить местно противовоспалительные анальгетики (например, мелоксикам), а системно применяемые дозы не должны мешать офтальмологическим эффектам.

2.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1.1 кислотно-щелочной резерв (acid/alkali reserve): Для препаратов на основе кислот это количество граммов гидроксида натрия на 100 г препарата, необходимое для получения определенного значения pH. Для щелочных препаратов это количество граммов гидроксида натрия, эквивалентное количеству серной кислоты в граммах на 100 г препарата, необходимое для получения определенного значения pH <1>.

--------------------------------

<1> См. [4].

2.1.2 нераздражители (non irritants): Вещества, которые не классифицируют как раздражители глаз, категории I, II или III по EPA, или вещества, не раздражающие слизистые оболочки глаз, - категории 1, 2, 2A или 2B по GHS или категории 1 или 2 по EU <2>.

2.1.3 разъедающее глаза (ocular corrosive): (a) Вещество, вызывающее необратимое повреждение тканей глаза; (b) вещество, которое классифицируют как раздражитель глаз категории 1 по GHS, или категории I по EPA, или категории 1 по EU <2>.

2.1.4 раздражитель глаз (ocular irritant): (a) Вещество, вызывающее обратимые изменения в глазах; (b) вещество, которое классифицируется как раздражитель глаз категории II или III по EPA, или категории 2, 2A или 2B по GHS, или категории 2 по EU <2>.

2.1.5 сильный раздражитель глаз (ocular severe irritant): (a) Вещество, которое вызывает повреждение тканей глаза, не устраняющееся в течение 21 дня после нанесения, или вызывает серьезное физическое ухудшение зрения; (b) вещество, которое классифицируют как раздражитель глаз категории 1 по GHS или категории 1 по EPA, или категории 1 по EU <2>.

--------------------------------

<2> См. [18] - [20].

2.1.6 многоуровневый подход (tiered approach): Поэтапный принцип испытания, при котором на каждом уровне вся имеющаяся информация об исследуемом веществе рассматривается в определенном порядке с использованием процедуры оценки весомости доказательств с целью определения наличия достаточной информации для принятия решения о классификации опасности перед началом продвижения на следующий уровень.

Примечание - Если на основе имеющейся информации может быть установлена потенциальная раздражающая способность исследуемого вещества, дополнительных испытаний проводить не следует. Если потенциальная раздражающая способность исследуемого вещества не может быть установлена на основе имеющейся информации, выполняют последовательно пошаговую процедуру испытания на животных до тех пор, пока не будет разработана однозначная классификация.

2.1.7 весомость доказательств (процесс) [weight-of-the-evidence (process)]: Использование сильных и слабых сторон собранной информации в качестве основы для заключения, которое может быть неочевидным из отдельных данных.

3.1 В интересах научных исследований и в целях гуманного обращения с животными исследование in vivo не следует проводить до тех пор, пока все имеющиеся данные, относящиеся к потенциально раздражающим/разъедающим слизистые оболочки глаз веществам, не будут оценены в анализе весомости доказательств. Такие данные включают имеющиеся результаты исследований на людях и/или лабораторных животных, свидетельства раздражающего/разъедающего действия на слизистые оболочки глаз одного или нескольких структурно родственных веществ или смесей таких веществ, данные, демонстрирующие высокую кислотность или щелочность веществ <1>, и результаты проверенных и принятых испытаний in vitro или ex vivo на разъедание кожи и раздражение/разъедание слизистых оболочек глаз <2>. Исследования могли проводиться до или после оценки весомости доказательств.

--------------------------------

<1> См. [4], [5].

<2> См. [6], [13] - [17].

3.2 Для некоторых веществ такой анализ может указывать на необходимость изучения in vivo потенциала раздражения/разъедания слизистых оболочек глаз. В таких случаях перед рассмотрением вопроса об испытании на глазах in vivo предпочтительно сначала провести исследование воздействия вещества на кожу в условиях in vitro и/или in vivo и оценить его в соответствии с процедурой последовательного испытания по нормативному документу <3>.

--------------------------------

<3> См. [7]. В Российской Федерации действует ГОСТ 32436-2013 "Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Испытания по оценке острого раздражающего/разъедающего (коррозионного) действия на кожу" (IDT OECD, Test N 404:2002).

3.3 Предпочтительный принцип последовательного испытания, предусматривающий проведение проверенных испытаний на раздражение/разъедание слизистых оболочек глаз in vitro или ex vivo, приведен в приложении А. Рекомендуется придерживаться этого принципа до проведения испытаний in vivo. Для новых веществ рекомендуется использовать метод поэтапного испытания с целью получения научно обоснованных данных о его раздражающей/разъедающей способности. Для веществ с недостаточным количеством данных о раздражающем/разъедающем воздействии на кожу и слизистые оболочки глаз данный принцип может быть использован для восполнения недостающих данных. Использование другого принципа, или процедуры испытания, или решения не использовать поэтапный подход к испытанию должны быть обоснованы.

4.1 После предварительной обработки системным анальгетиком и индукции соответствующей местной анестезии исследуемое вещество наносят однократно на один глаз подопытного животного. Необработанный глаз служит для контроля. Степень раздражения/разъедания глаза оценивают путем балльной оценки повреждений конъюнктивы, роговицы и радужной оболочки через определенные промежутки времени. Для обеспечения полноты оценки эффектов описывают также другие офтальмологические и неблагоприятные системные эффекты. Продолжительность исследования должна быть достаточной для оценки обратимости или необратимости эффектов.

4.2 Животные с признаками сильного дистресса и/или боли на любой стадии испытания или с наличием повреждений, соответствующих гуманным конечным точкам, описанным в настоящем стандарте (6.8.2), должны быть гуманно умерщвлены, и вещество должно быть оценено соответствующим образом. Критерии для принятия решения о гуманном умерщвлении животных в состоянии агонии и испытывающих страдания приведены в руководстве <1>.

--------------------------------

<1> См. [8].

Предпочтительными лабораторными животными являются кролики-альбиносы. Используют здоровых, молодых, половозрелых животных. Для использования животных других линий или видов необходимо предоставить обоснование.

Оба глаза каждого подопытного животного, предварительно отобранного для испытания, должны быть исследованы в течение 24 ч до начала испытания. Не используют животных, у которых имеются раздражения глаз, дефекты глаз или повреждения роговицы.

Животные должны быть размещены индивидуально. Температура помещения для подопытных кроликов должна быть (20 +/- 3) °C. Относительная влажность воздуха должна быть не менее 30% и не превышать 70%, за исключением времени уборки помещения. Оптимальное значение влажности - от 50% до 60%. Освещение должно быть искусственным, с чередованием периодов света (12 ч) и темноты (12 ч). Следует избегать чрезмерной интенсивности света. Для кормления можно использовать обычные лабораторные рационы с неограниченным доступом к питьевой воде.

Для предотвращения или сведения к минимуму боли и дистресса в процедурах испытаний безопасности вещества для глаз рекомендуются нижеприведенные процедуры. Могут быть использованы альтернативные процедуры, для которых установлено, что они обеспечивают хорошее или лучшее предотвращение или облегчение боли и дистресса.

6.1.1 За 60 мин до TSA вводят подкожной инъекцией (SCL) 0,01 мг/кг бупренорфина для обеспечения терапевтического уровня системной анальгезии. Не известно о других подобных опиодных анальгетиках, вводимых системно, кроме бупренорфина, или предполагают, что они изменят офтальмологические реакции <2>.

--------------------------------

<2> См. [12].

6.1.2 За 5 мин до нанесения исследуемого вещества (TSA) на каждый глаз наносят одну или две капли местного глазного анестетика (например, 0,5%-ного гидрохлорида пропаракаина или 0,5%-ного гидрохлорида тетракаина). Для предотвращения возможного влияния на результаты исследования рекомендуется использовать местное обезболивающее средство, не содержащее консервантов. Глаз животного, который не обрабатывают исследуемым веществом, но обрабатывают местным анестетиком, служит в качестве контроля. Если предполагают, что исследуемое вещество вызывает выраженную боль и дистресс, его обычно не следует испытывать in vivo. Однако при сомнениях или при необходимости проведения испытания следует рассмотреть возможность дополнительного применения местной анестезии с пятиминутными интервалами до TSA. Пользователи стандарта должны знать, что многократное применение местных анестетиков потенциально может привести к незначительному увеличению степени тяжести воздействия и/или времени, необходимого для восстановления химически индуцированных поражений.

6.1.3 Через 8 ч после TSA вводят SC 0,01 мг/кг бупренорфина и 0,5 мг/кг мелоксикама для обеспечения постоянного терапевтического уровня системной анальгезии. Несмотря на отсутствие данных, позволяющих предположить, что мелоксикам оказывает противовоспалительное действие на глаза при введении SC один раз в день, его следует вводить не ранее чем через 8 ч после TSA для предотвращения возможного влияния на результаты исследования [12].

6.1.4 Через 8 ч после TSA и первоначального введения 0,01 мг/кг бупренорфина следует каждые 12 ч вводить SC 0,01 мг/кг бупренорфина и каждые 24 ч 0,01 мг/кг бупренорфина в сочетании с SC 0,5 мг/кг мелоксикама для определения офтальмологических поражений и устранения проявления клинических признаков боли и дистресса. Имеются препараты с пролонгированным анестезирующим действием, которые могут снизить частоту введения анальгетиков.

6.1.5 Если превентивной анальгезии и местной анестезии недостаточно, должно быть применено экстренное обезболивание сразу после TSA. Если во время исследования у животного проявляются признаки боли и дистресса, немедленно назначают SC экстренной дозы бупренорфина 0,03 мг/кг, которую при необходимости повторяют каждые 8 ч вместо SC 0,01 мг/кг каждые 12 ч. Каждые 24 ч вводят SC 0,5 мг/кг мелоксикама в сочетании с экстренной дозой бупренорфина 0,03 мг/кг, но не ранее чем через 8 ч после TSA.

Исследуемое вещество вносят в конъюнктивальный мешок одного глаза каждого животного, аккуратно оттянув нижнее веко от глазного яблока. Затем веки осторожно удерживают вместе в течение примерно 1 с, чтобы предотвратить потерю вещества. Другой глаз, в который не вводят исследуемое вещество, служит для контроля.

6.3.1 Глаза подопытных животных не промывают в течение не менее 24 ч после введения исследуемого вещества, за исключением твердых веществ (6.4.2) и в случае мгновенного раздражающего или разъедающего действия. Через 24 ч можно промыть глаз, если это целесообразно.

6.3.2 Для исследования влияния промывания не рекомендуется использовать дополнительную (контрольную) группу животных, если это не обосновано научно. При необходимости наличия дополнительной группы используют двух кроликов. Должны быть тщательно задокументированы условия промывания, например: время, состав и температура раствора, продолжительность, объем и скорость промывания.

Для испытания жидкостей используют дозу 0,1 см³. Для введения вещества в глаз не следует использовать пульверизатор. Жидкий аэрозоль должен быть выдут и собран в контейнер для введения 0,1 см³ в глаз.

При испытании твердых веществ, паст и твердых частиц исследуемое вещество должно иметь объем 0,1 см³ или массу не более 100 мг. Исследуемое вещество должно быть измельчено до мелкой пыли. Объем твердого вещества измеряют после его осторожного уплотнения, например постукиванием в измерительном контейнере. Если твердое исследуемое вещество не было удалено из глаза подопытного животного физиологическим способом в первый момент наблюдения через 1 ч после введения, глаз промывают физиологическим раствором или дистиллированной водой.

6.4.3.1 Все аэрозоли перед введением в глаз рекомендуется собрать в жидком виде. Единственным исключением являются вещества в аэрозольных баллонах под давлением, которые невозможно собрать из-за испарения. В таких случаях глаз следует удерживать открытым, а исследуемое вещество вводить в глаз простым впрыскиванием продолжительностью примерно 1 с с расстояния 10 см от глаза. Это расстояние может изменяться в зависимости от давления спрея и его содержания. Следует соблюдать осторожность для предотвращения повреждения глаза от давления спрея. В некоторых случаях может возникнуть необходимость оценки вероятности "механического" повреждения глаза от силы распыления.

6.4.3.2 Оценка дозы аэрозоля может быть проведена путем моделирования испытания следующим образом: вещество распыляют на взвешенную бумагу через отверстие размером с глаз кролика, помещенное непосредственно перед бумагой. Увеличение массы бумаги используют для приблизительного определения количества вещества, распыленного в глаз. Для летучих веществ доза может быть оценена путем взвешивания контейнера до и после удаления исследуемого вещества.

6.5 Предварительное испытание (in vivo раздражение/разъедание с использованием одного животного)

6.5.1 Сначала рекомендуется провести испытание in vivo с использованием одного животного <1>. Наблюдения должны позволить определить степень тяжести и обратимость, прежде чем перейти к контрольному испытанию на втором животном.

--------------------------------

<1> См. [21].

6.5.2 Если результаты указывают на то, что вещество вызывает сильное раздражение или разъедание глаз с использованием вышеописанной процедуры, дальнейшее испытание на раздражение глаз проводить не следует.

6.6 Контрольное испытание (испытание на раздражение глаз in vivo с дополнительными животными)

Если в предварительном испытании не наблюдалось сильного раздражающего или разъедающего эффекта, раздражающий или отрицательный ответ должен быть подтвержден с использованием двух дополнительных животных. Если в предварительном испытании наблюдают раздражающее действие, рекомендуется контрольное испытание проводить последовательно на одном животном, а не воздействовать на двух животных одновременно. Если у второго животного обнаруживают сильное раздражение или разъедание, испытание не продолжают. Если результаты испытания на втором животном достаточны для определения класса опасности, дальнейшие испытания проводить не следует.

Длительность периода наблюдения должна быть достаточной для полной оценки степени и обратимости наблюдаемых эффектов. Однако и испытание следует прекратить в любое время, если у животного появляются признаки сильной боли или дистресса <2>. Для определения обратимости эффектов за животными следует наблюдать в течение 21 дня после введения исследуемого вещества. Если обратимость наблюдают до 21 дня, испытание прекращают в этот момент.

--------------------------------

<2> См. [8].

6.8.1 Через 1 ч после TSA глаза следует тщательно исследовать на наличие или отсутствие офтальмологических поражений. Последующие оценки проводят не менее одного раза в день. В течение первых трех дней животных следует осматривать несколько раз в день для обеспечения своевременного принятия решения о прекращении испытаний. Подопытных животных следует регулярно на протяжении всего исследования оценивать на наличие клинических признаков боли и/или дистресса (например, повторяющееся прикасание или потирание глаза лапой, чрезмерное моргание, чрезмерное слезотечение) <3> не менее двух раз в день с интервалом между наблюдениями 6 ч или чаще, при необходимости. Это необходимо: 1) для адекватной оценки животных на наличие признаков боли и дистресса для принятия обоснованного решения о необходимости увеличения дозировки анальгетиков и 2) для оценки состояния животных на предмет наличия установленных гуманных конечных точек для принятия обоснованного решения о целесообразности гуманного умерщвления животных и обеспечения своевременного принятия таких решений. В качестве помощи в обнаружении и измерении повреждения глаз следует регулярно использовать окрашивание флуоресцеином и биомикроскоп с щелевой лампой, когда это считается целесообразным (например, для оценки глубины повреждения при наличии изъязвления роговицы), а также для оценки, если они установлены, критериев конечных точек для гуманной эвтаназии. Следует сохранять цифровые фотографии наблюдаемых повреждений для справки и постоянной регистрации степени повреждения глаз. После получения окончательной информации животные должны проходить испытание не дольше, чем это необходимо. Животных, испытывающих сильную боль или страдания, следует без промедления умерщвлять гуманным способом. Вещество следует оценивать в соответствии с полученными результатами.

--------------------------------

<3> См. [9] - [11].

6.8.2 Животных после инстилляции с поражениями глаз, приведенными ниже, следует гуманно умерщвлять (описание степеней поражения приведено в таблице 1): перфорация или значительное изъязвление роговицы, включая стафилому; кровь в передней камере глаза; 4-я степень непрозрачности роговицы; отсутствие зрачкового рефлекса (степень ответа радужной оболочки глаза 2), сохраняющегося в течение 72 ч изъязвление конъюнктивальной мембраны; некроз конъюнктивы или мигательной перепонки или отслаивание. Это связано с тем, что такие поражения, как правило, необратимы.

Кроме того, рекомендуется использовать в качестве гуманных конечных точек для прекращения исследований до окончания запланированного 21-дневного периода наблюдения следующие поражения глаз. Эти поражения считают предикторами серьезных раздражающих или разъедающих повреждений и поражений, полное восстановление которых не предполагается к окончанию 21-дневного периода наблюдений: сильно выраженные повреждения (например, изъязвление роговицы, выходящее за пределы поверхностных слоев стромы), разрушение более 50% лимба (о чем свидетельствует побеление конъюнктивальной ткани) и тяжелая глазная инфекция (гнойные выделения). Сочетание васкуляризации поверхности роговицы (т.е. паннус), отсутствия уменьшения со временем площади окрашивания флуоресцеином на основании ежедневной оценки и/или отсутствия реэпителизации через 5 дней после нанесения исследуемого вещества также может рассматриваться как потенциально полезный критерий для принятия клинического решения о досрочном завершении исследования. Однако этих данных по отдельности недостаточно для обоснования досрочного прекращения исследования. После выявления серьезных глазных изменений следует проконсультироваться с лечащим или квалифицированным ветеринаром лабораторных животных или персоналом, обученным идентификации клинических поражений, клиническому обследованию и определению, служит ли комбинация этих эффектов основанием для досрочного прекращения исследования. Степени глазной реакции (конъюнктивы, роговицы и радужной оболочки) должны быть получены и зарегистрированы через 1, 24, 48 и 72 ч после нанесения исследуемого вещества (см. таблицу 1). Животные, у которых отсутствуют повреждения глаз, могут быть умерщвлены не ранее, чем через 3 дня после нанесения исследуемого вещества. Животных с поражениями глаз, которые не являются тяжелыми, следует наблюдать до исчезновения поражения или в течение 21 дня, после чего исследование прекращают. Наблюдения следует проводить и регистрировать минимум через 1, 24, 48, 72 ч, 7, 14 дней и 21 день для определения состояния поражений и их обратимости или необратимости. При необходимости проводят более частые наблюдения для принятия решения об эвтаназии подопытного животного по соображениям гуманности или удаления из исследования в связи с отрицательными результатами.

6.8.3 При каждом обследовании регистрируют степень поражения глаз (см. таблицу 1). Также следует сообщать о других повреждениях глаза (например, паннус, окрашивание, изменение передней камеры) или неблагоприятных системных эффектах.

6.8.4 Изучение реакций можно облегчить с использованием бинокулярной лупы, ручной щелевой лампы, биомикроскопа или другого подходящего устройства. После регистрации наблюдений через 24 ч глаза могут быть дополнительно обследованы с использованием флуоресцеина.

6.8.5 Оценка глазных ответов обычно субъективна. Для обеспечения согласованности оценки реакции глаз, чтобы помочь испытательным лабораториям и тем, кто участвует в проведении наблюдений и их интерпретации, персонал, выполняющий наблюдения, должен быть обучен используемой системе оценки.

Показатели раздражения слизистой оболочки глаз следует оценивать в совокупности со степенью тяжести поражений и их обратимостью или отсутствием обратимости. Отдельные показатели не являются абсолютным критерием для оценки раздражающих свойств, так как проводят оценку и других эффектов исследуемого вещества. На самом деле отдельные оценки следует рассматривать как справочные значения, которые имеют смысл только в том случае, если они подтверждены полным описанием и оценкой результатов всех наблюдений по симптомам, приведенным в таблице 1.

Отчет об исследовании должен содержать:

7.2.1 Обоснование испытания in vivo: весомость доказательств достоверности данных предшествующих испытаний, включая результаты стратегии последовательного испытания:

- описание соответствующих данных, полученных в ходе предыдущих испытаний;

- данные, полученные на каждом этапе стратегии испытания;

- описание проведенных испытаний in vitro, включая детали процедур и результаты, полученные с исследуемыми/эталонными веществами;

- описание проведенного in vivo исследования раздражения/разъедания кожи, включая полученные результаты;

- анализ весомости доказательств для проведения исследования in vivo.

7.2.2 Исследуемое вещество:

- идентификационные данные [например, химическое наименование и номер CAS (при наличии), чистота, известные примеси, источник получения, номер партии];

- физическую природу и физико-химические свойства (например, значение pH, летучесть, растворимость, стабильность, реакция с водой);

- в случае смеси: должны быть идентифицированы компоненты, включая идентификационные данные составляющих веществ [например, химические наименования и номера CAS (при наличии)] и их концентрации;

- использованную дозу (количество наносимого исследуемого вещества).

7.2.3 Растворитель:

- идентификацию, концентрацию (если использовали), использованный объем;

- обоснование выбора растворителя.

7.2.4 Подопытные животные:

- использованный вид/линию, обоснование использования других животных, отличных от кроликов-альбиносов;

- возраст каждого животного в начале исследования;

- число животных каждого пола в подопытной и дополнительной (контрольной) группах (при необходимости);

- массу тела каждого животного в начале и в конце испытания;

- источник, условия содержания, корм и т.д.

7.2.5 Анестетики и анальгетики:

- дозы и время применения местных анестетиков и системных анальгетиков;

- при использовании местной анестезии: идентификацию, чистоту, тип и возможность взаимодействия с исследуемым веществом.

7.2.6 Результаты:

- описание метода оценки раздражения при каждом наблюдении (например, ручная щелевая лампа, биомикроскоп, флуоресцеин);

- сведение в таблицы данных по раздражающему/разъедающему ответу для каждого животного за каждый период наблюдения вплоть до удаления каждого животного из испытания;

- подробное описание степени и характера наблюдаемого раздражения или разъедания;

- описание других поражений, наблюдаемых в глазу (например, васкуляризация, образование паннуса, спайки, окрашивание);

- описание локальных и системных побочных эффектов, не являющихся офтальмологическими, регистрацию клинических признаков боли и дистресса, цифровые фотографии и результаты гистопатологических исследований, при наличии.

7.2.7 Обсуждение результатов.

7.3.1 Экстраполяция результатов исследований раздражения глаз на лабораторных животных по отношению к людям действительна только в ограниченной степени. Во многих случаях кролики-альбиносы более чувствительны, чем человек, к глазным раздражителям или едким веществам.

7.3.2 Следует соблюдать осторожность при интерпретации полученных данных для исключения раздражений, вызванных вторичной инфекцией.

А.1.1 В интересах достоверных научных данных и благополучия животных следует избегать неоправданного использования животных и сводить к минимуму испытания, которые могут вызвать тяжелые реакции у животных. Вся информация о веществе, имеющая отношение к его потенциальному раздражению/разъеданию глаз, должна быть оценена до рассмотрения in vivo. Уже может быть достаточное количество доказательств для классификации исследуемого вещества по раздражающему или разъедающему воздействию на глаза без необходимости проведения испытаний на лабораторных животных. Таким образом, использование анализа весомости доказательств и стратегии последовательного испытания (см. схему А.2.1) сведет к минимуму необходимость испытаний in vivo, особенно если вещество может вызывать тяжелые реакции.

А.1.2 Рекомендуется использовать анализ весомости доказательств при оценке имеющейся информации о раздражении и разъедании глаз веществом и для определения необходимости проведения дополнительных исследований, не являющихся исследованием глаз in vivo, для характеристики такого потенциала. При необходимости дальнейших исследований рекомендуется использовать стратегию последовательного испытания для получения соответствующих экспериментальных данных. Для веществ, которые не имеют истории испытаний, следует использовать стратегию последовательных испытаний для получения данных, необходимых для оценки раздражения/разъедания глаз. Первоначально стратегия испытания была разработана рабочей группой OECD в 1996 г. и приведена в отчетном документе <1>. Впоследствии она была подтверждена и расширена в Согласованной комплексной системе классификации опасностей для здоровья человека и воздействия химических веществ на окружающую среду, одобренной 28-м совместным совещанием Комитета по химическим веществам и Рабочей группы по химическим веществам в ноябре 1998 г. <2> и пересмотрена экспертной группой OECD в 2011 г.

--------------------------------

<1> См. [22].

<2> См. [23].

А.1.3 Несмотря на то что эта стратегия испытания не является неотъемлемой частью настоящего стандарта, она отражает рекомендуемый подход при определении характеристик раздражения/разъедания глаз. Такой подход представляет собой как лучшую практику, так и этический критерий для проведения испытаний in vivo на раздражение/разъедание глаз. Он содержит руководство по проведению испытаний in vivo и обобщает факторы, которые следует учитывать перед планированием такого испытания. Стратегия последовательного испытания обеспечивает подход, основанный на весомости доказательств при анализе имеющихся данных о веществах, вызывающих раздражение/разъедание, и многоуровневый подход к получению соответствующих данных о веществах, для которых необходимо проведение дополнительных исследований или исследования которых не проводились. Стратегия, приведенная в документе <3>, включает в себя выполнение сначала валидированных и общепринятых испытаний in vitro или ex vivo и затем исследование раздражения/разъедания кожи при необходимости в соответствии с документами <4>.

--------------------------------

<3> См. [4].

<4> См. [24], [25].

А.2.1 Перед проведением испытаний в рамках стратегии последовательного испытания (см. схему А.2.1) должна быть изучена вся доступная информация для определения необходимости испытания на глазах in vivo. Несмотря на то, что значимая информация может быть получена в результате оценки отдельных параметров (например, предельного значения pH), следует оценить всю совокупность имеющейся информации. Все соответствующие данные о воздействии рассматриваемого вещества и его структурных аналогов должны быть оценены при принятии решения по весомости доказательств и должно быть представлено обоснование этого решения. В первую очередь следует уделить внимание имеющимся данным о воздействии вещества на человека и животных по результатам испытаний in vitro или ex vivo. По возможности следует избегать исследований агрессивных веществ in vivo. Факторы, учитываемые в стратегии испытания, включают в себя:

Схема А.2.1 - Стратегия испытаний и оценки раздражения/разъедания глаз

А.2.2 Оценка имеющихся данных in vitro для человека и/или животных и/или данных с использованием валидированных и международно признанных методов (этап 1)

В первую очередь следует рассматривать имеющиеся данные для человека, например, данные клинических и профессиональных исследований, а также клинических случаев и/или испытаний на животных при исследованиях на глазах, и/или данные валидированных и международно признанных методов in vitro раздражения/разъедания глаз, поскольку они предоставляют информацию, непосредственно связанную с воздействием на глаза.

После этого следует оценить имеющиеся данные исследований на людях и/или животных по изучению раздражения/разъедания кожи и/или исследований in vitro на основе проверенных и международно признанных методов оценки разъедания кожи. Вещества с известной разъедающей активностью или сильным раздражением глаз не следует вводить в глаза животным, а вещества, оказывающие разъедающее или сильное раздражающее воздействие на кожу, также следует рассматривать как вызывающие разъедающее и/или раздражающее воздействие на глаза. Вещества с достаточным доказательством отсутствия разъедающего и раздражающего действия по результатам ранее проведенных исследований на глазах также не следует использовать в испытаниях на глазах in vivo.

Должны быть рассмотрены результаты испытаний структурно родственных химических веществ (при наличии). При наличии достаточного количества данных о воздействии структурно родственных веществ или смесей таких веществ на человека и/или животных, чтобы показать их потенциальную возможность раздражения/разъедания глаз, можно предположить, что исследуемое вещество будет вызывать такие же реакции. В таких случаях можно не проводить испытания вещества. Отрицательные данные результатов исследований структурно родственных веществ или их смесей не являются достаточным доказательством отсутствия раздражающей/разъедающей способности вещества в рамках стратегии последовательных испытаний. Следует использовать проверенные и принятые подходы SAR для определения потенциального разъедающего и раздражающего воздействий как на кожу, так и на глаза.

Вещества, имеющие экстремальные значения pH, такие как не более 2,0 или не менее 11,5, могут оказывать сильное локальное воздействие. Если экстремальное значение pH является основанием для идентификации вещества как вызывающего разъедание или раздражение глаз, то его кислотно-щелочной резерв (буферная емкость) также может быть принят во внимание <1>. Если буферная емкость свидетельствует о том, что вещество может не вызывать коррозию глаз (т.е. вещество имеет экстремальное значение pH и низкий кислотно-щелочной резерв), то для подтверждения этого необходимо провести дальнейшие испытания, предпочтительно с использованием валидированных и принятых в исследованиях методов in vitro или ex vivo (см. А.2.7).

--------------------------------

<1> См. [26] - [28].

На этой стадии должна быть оценена вся доступная информация о системной токсичности при нанесении на кожу. Также следует учитывать острую кожную токсичность исследуемого вещества. Если было показано, что исследуемое вещество является высокотоксичным при нанесении на кожу, возможно, нет необходимости проверять его воздействие на глаза. Несмотря на отсутствие обязательной связи между острой кожной токсичностью и раздражением/разъеданием глаз, можно предположить, что вещество, являющееся высокотоксичным при нанесении на кожу, также будет проявлять высокую токсичность при введении в глаза. Такие данные также могут быть рассмотрены между этапами 2 и 3.

Сначала следует оценить потенциал разъедающего воздействия и сильного раздражения при нанесении на кожу в соответствии с <2>, включая использование проверенных и международно признанных методов испытаний разъедающего воздействия на кожу in vitro <3>. Если установлено, что вещество вызывает сильное раздражение или разъедание кожи, его можно рассматривать как вызывающее сильное раздражение или разъедание глаз. Таким образом, проведение дальнейших испытаний не требуется. Если вещество не оказывает сильного раздражающего воздействия на кожу и не вызывает ее разъедания, следует провести испытания на глазах in vitro или ex vivo.

--------------------------------

<2> См. [25] и [29].

<3> См. [30] - [32].

А.2.7 Испытания in vitro или ex vivo (этап 6)

Вещества, продемонстрировавшие разъедающие или сильные раздражающие свойства в испытаниях in vitro или ex vivo <4>, которые были валидированы и приняты на международном уровне, не должны испытываться на животных для оценки раздражающих/разъедающих глаза эффектов. Можно предположить, что такие вещества будут оказывать аналогичное серьезное воздействие in vivo. Если валидированные и признанные испытания in vitro/ex vivo недоступны, следует пропустить этап 6 и перейти к этапу 7.

--------------------------------

<4> См. [33], [34].

А.2.8 Испытание in vivo на кроликах (этапы 7 и 8)

Испытание на глазах in vivo следует начинать с предварительного испытания с использованием одного животного. Если результаты этого испытания указывают, что вещество является сильным раздражителем или вызывает разъедание глаз, дальнейшее испытание проводить не следует. Если это испытание не выявило разъедающих или сильных раздражающих эффектов, проводят подтверждающее испытание с двумя дополнительными животными. В зависимости от результатов подтверждающего испытания может потребоваться проведение дополнительных испытаний по настоящему стандарту.