"ГОСТ ISO 14156-2015. Межгосударственный стандарт. Молоко и молочная продукция. Методы экстракции липидов и жирорастворимых соединений"
(введен в действие Приказом Росстандарта от 16.06.2016 N 643-ст)

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 февраля 2015 г. N 75-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 июня 2016 г. N 643-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 14156-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 14156/IDF 172:2001 "Молоко и молочные продукты. Методы экстракции липидов и липорастворимых соединений" ("Milk and milk products - Extraction methods for lipids and liposoluble compounds"), включая его изменение Amd. 1:2007.

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 5 "Молоко и молочные продукты" технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO) и Международной молочной федерацией (IDF).

В разделе "Нормативные ссылки" и тексте стандарта ссылки на международный стандарт актуализированы. В стандарт внесено следующее редакционное изменение: текст изменения Amd. 1:2007 внесен в текст стандарта. Обозначения и годы принятия (утверждения) изменения выделены жирным шрифтом в скобках после измененного текста.

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международного стандарта, на который дана ссылка, имеются в национальном органе по стандартизации Российской Федерации.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт устанавливает методы экстракции репрезентативной части жира, содержащей липиды и жирорастворимые соединения, из молока и молочной продукции.

Метод применяют для подготовки образцов, анализируемых методами, установленными в [1], [2], [3], [4].

В соответствии с методами определения содержания жира в молоке, сгущенном молоке, сухих молочных продуктах, сливках и кисломолочных продуктах свободные жирные кислоты не являются частью экстрагированного жира.

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями.

2.1 липиды и жирорастворимые соединения (lipids and liposoluble compounds): Вещества, экстрагируемые или извлекаемые с использованием различных методик, указанных в настоящем стандарте.

Липиды и жирорастворимые соединения экстрагируются или извлекаются из молока и различной молочной продукции для дальнейшего анализа. Из масла или другого продукта с высоким содержанием жира липидная фракция извлекается физическими методами. Из других продуктов липиды и жирорастворимые соединения экстрагируют с помощью растворителей после соответствующей подготовки образца.

В ходе анализа используют реактивы только признанной аналитической чистоты, а также дистиллированную или деминерализованную воду, не содержащую хлоридов, или воду эквивалентной чистоты.

4.1 Раствор аммиака c(NH₃) = 14 моль/дм³ .

4.2 Этанол (C₂H₅OH), объемной долей (96 +/- 2)%.

4.3 Диэтиловый эфир (C₂H₅OC₂H₅), не содержащий перекиси.

4.4 Сульфат натрия безводный (Na₂SO₄).

4.5 Раствор сульфата натрия.

Растворяют в воде 100 г безводного натрия сульфата (Na₂SO₄). Доводят объем водой до 1 дм³.

4.6 Н-пентан.

4.7 Песок, не содержащий органических материалов.

Для проведения измерений используют стандартное лабораторное оборудование и перечисленное ниже.

5.1 Печь, способная поддерживать температуру (50 +/- 5) °C.

5.2 Аппарат Сокслета, оснащенный экстракционной гильзой.

5.3 Водяные бани, способные поддерживать температуру от 40 до 60 °C, от 30 до 40 °C и (50 +/- 2) °C.

5.4 Делительная воронка вместимостью 500 см³.

5.5 Мерные цилиндры вместимостью 100 и 250 см³.

5.6 Лабораторные стаканы вместимостью 100 см³.

5.7 Фильтровальная бумага средней пористости, диаметром примерно 15 см.

5.8 Конические колбы вместимостью 250 см³.

5.9 Круглодонные колбы вместимостью 250 см³.

5.10 Роторный испаритель с аксессуарами.

5.11 Ложка или шпатель.

В лабораторию должна быть доставлена представительная проба. Во время транспортирования и хранения не допускается какое-либо ее изменение или порча.

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора проб приведен в [5] <*>.

--------------------------------

<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 707-2010 "Молоко и молочные продукты. Руководство по отбору проб".

Хранить образец необходимо таким образом, чтобы предотвратить ухудшение или изменение его состава.

Доводят образец для испытания в водяной бане (5.3) до температуры от 35 до 40 °C. Перемешивают многократным переворачиванием емкости с образцом, затем быстро охлаждают до (20 +/- 2) °C.

Доводят образец для испытания до температуры (20 +/- 2) °C. Тщательно перемешивают или встряхивают емкость с образцом.

Встряхивают и переворачивают емкость с образцом. Открывают емкость, медленно выливают образец для испытания во вторую емкость (оснащенную герметичной крышкой) и перемешивают многократным переносом, следят за тем, чтобы образец для испытания вобрал в себя любой жир или иной компонент, налипший на стенки первой емкости. На заключительном этапе переносят молоко в максимально полном объеме во вторую емкость. Закрывают емкость.

Если образцы находятся в герметичных банках, выдерживают невскрытую банку в водяной бане (5.3), установленной на температуру от 40 до 60 °C. Энергично встряхивают банку каждые 15 мин. Через 2 ч достают банку из водяной бани и дают банке и ее содержимому остыть до комнатной температуры. Снимают крышку и тщательно перемешивают содержимое банки, используя ложку или шпатель (5.11).

Открывают емкость для хранения образцов и тщательно перемешивают образец для испытания ложкой или шпателем. Используют вращательные движения вверх и вниз так, чтобы переместить и перемешать верхний слой и содержимое нижних углов емкости. Следят за тем, чтобы образец для испытания вобрал в себя все молоко, налипшее на стенку емкости. Переносят образец для испытания в максимально полном объеме во вторую емкость (оснащенную герметичной крышкой). Закрывают ее.

Если образцы находятся в герметичных банках, выдерживают невскрытую банку в водяной бане (5.3), установленной на температуру от 30 до 40 °C. Открывают емкость и переносят весь объем образца для испытания, соскоблив весь образец, налипший на внутреннюю поверхность банки, в чашку, достаточно большую для тщательного перемешивания. Перемешивают содержимое чашки до получения однородной массы.

Если образец для испытания находится в мягкой тубе, открывают тубу и переносят ее содержимое в чашку. Разрезают тубу, соскабливают весь образец для испытания, налипший на внутреннюю поверхность тубы, и добавляют его к содержимому чашки. Перемешивают содержимое чашки до получения однородной массы.

Тщательно перемешивают образец для испытания, многократно вращая и переворачивая емкость с ним.

Перед проведением анализа удаляют корку, а также грязный или покрытый плесенью поверхностный слой сыра.

В образцах для испытания с относительно высоким содержанием фосфолипидов и относительно низким содержанием простых липидов (например, пахта) выбранная методика экстракции будет влиять на состав жирных кислот в экстрагируемом жире. Для таких образцов для испытания используют методику, описанную в 8.3, с добавлением в навеску приблизительно 1,5 г хлорида натрия. Жир, извлеченный таким образом, будет содержать фосфолипиды. Состав жирных кислот в фосфолипидах значительно отличается от иных жировых компонентов молока.

Растапливают 50 - 100 г образца для испытания в печи (5.1) при температуре 50 °C. Помещают 0,5 - 1,0 г безводного сульфата натрия (4.4) на сложенную фильтровальную бумагу (5.7). Фильтруют жир через фильтровальную бумагу с безводным сульфатом натрия, при этом собирают фильтрат в лабораторный стакан (5.6), который держат в печи (5.1) при температуре 50 °C. При фильтровании растопленного масла через фильтровальную бумагу (5.7) следят, чтобы не просочился водный слой.

Смешивают в делительной воронке (5.4) 100 см³ образца для испытания с 80 см³ этанола (4.2) и 20 см³ раствора аммиака (4.1).

Добавляют 100 см³ диэтилового эфира (4.3) и энергично встряхивают воронку в течение 1 мин. Оставляют в покое до разделения фаз. Затем добавляют к содержимому воронки 100 см³ н-пентана (4.6) и тщательно перемешивают. Оставляют в покое до второго разделения фаз, затем сливают водный слой.

Добавляют к оставшемуся содержимому воронки 100 см³ раствора натрия сульфата (4.5) и снова тщательно перемешивают. Оставляют в покое до третьего разделения фаз и после этого сливают водный слой. Добавляют к оставшемуся содержимому воронки вторые 100 см³ раствора натрия сульфата и энергично встряхивают в течение 1 мин. Оставляют воронку в покое до разделения фаз и снова сливают водный слой. Переносят оставшийся органический слой в коническую колбу (5.8). Добавляют 5 - 10 г безводного сульфата натрия (4.4), закупоривают колбу и перемешивают ее содержимое.

Оставляют колбу в покое на 10 мин и фильтруют ее содержимое в круглодонную колбу (5.9). Используя роторный испаритель (5.10), выпаривают содержимое колбы при пониженном давлении в водяной бане (5.3), установленной на 50 °C, пока не станет видно, что испарение закончилось.

Отсоединяют колбу от роторного испарителя. Промывают содержимое колбы струей азота в течение 1 мин. Снова присоединяют колбу к испарителю и продолжают выпаривание еще 10 мин. Несмотря на двойное выпаривание, растворитель испаряется не полностью. Массовая доля остатка растворителя будет составлять менее 2%.

При проведении некоторых анализов жиров (например, состава жирных кислот) не требуется полное удаление растворителя. Если необходимо полное удаление растворителя, нагревают содержимое колбы в печи при температуре 102 °C до тех пор, пока масса не станет постоянной.

Жир, экстрагированный описанным выше методом, не содержит свободных жирных кислот.

Разводят соответствующее количество образца для испытания таким образом, чтобы получить 100 см³ навески с массовой долей жира приблизительно 4%. Продолжают согласно 8.3.

Для приготовления навески разводят 10 г образца для испытания в 100 см³ дистиллированной воды. Помещают навеску на 30 мин в водяную баню (5.3), установленную на 60 °C, и время от времени встряхивают. Охлаждают до комнатной температуры и продолжают согласно 8.3.

Натирают или разминают сыр в зависимости от его консистенции.

Переносят некоторое количество образца для испытания, содержащее приблизительно 4 г жира в ступку. Тщательно растирают образец со смесью песка (4.7) и сульфата натрия (4.4) в пропорции 1:1 до получения сухого образца для испытания.

Примечание - Необходимое количество смеси из песка и сульфата натрия зависит от уровня содержания влаги в сыре.

Переносят всю навеску в экстракционную гильзу и ставят ее (закрытую, например ватной пробкой) в камеру экстракционного аппарата Сокслета (5.2). Наливают в круглодонную колбу 250 см³ н-пентана (4.6) и экстрагируют образец в течение 6 ч с обратным холодильником.

Используя роторный испаритель (5.10), выпаривают содержимое колбы при пониженном давлении в водяной бане (5.3), установленной на 50 °C до видимого окончания испарения.

Отсоединяют колбу от роторного испарителя. Промывают содержимое колбы струей азота 1 мин. Снова присоединяют колбу к испарителю и продолжают выпаривание еще 10 мин (См. также "ОСТОРОЖНО" в 8.3).

Для определения холестерина в сыре суспендируют некоторое количество образца для испытания, содержащего приблизительно 4 г жира в 100 см³ дистиллированной воды. Продолжают согласно 8.3.

Протокол должен содержать:

- всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

- применяемый метод отбора проб, если он известен;

- применяемый метод экстракции, а также ссылку на настоящий стандарт;

- все технологические особенности, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как дополнительные, а также сведения о любых происшествиях, которые могли повлиять на результат(ы).