"ГОСТ EN 15452-2013. Межгосударственный стандарт. Удобрения. Определение хелатированных агентов. Определение железа, хелатированного o,p-EDDHA посредством реверсивной фазы HPLC. Определение железа, хелатированного EDDHSA, ион-парной хроматографией"
(введен в действие Приказом Росстандарта от 08.11.2013 N 1435-ст)

Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ") на основе собственного аутентичного перевода на русский язык стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 527 "Химия"

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по переписке (протокол N 59-П от 27 сентября 2013 г.)

За принятие проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 15452:2008 Fertilizers - Determination of chelating agents - Determination of iron chelated by o,p-EDDHA by reversed phase HPLC (Удобрения. Определение хелатированных агентов. Определение железа, хелатированного o,p-EDDHA, посредством реверсивной фазы HPLC).

Европейский стандарт разработан Европейским комитетом по стандартизации CEN/TC 260 "Удобрения и известковые материалы".

Перевод с английского языка (en).

Официальные экземпляры европейского стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным стандартам приведены в дополнительном приложении Д.А.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 08 ноября 2013 г. N 1435-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15452-201 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 01 января 2015 г.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт устанавливает метод хроматографического определения количества железа в хелатной форме каждого из отдельных изомеров хелатообразователя орто-пара EDDHA (o,p-EDDHA) в удобрениях. Метод позволяет идентифицировать этот хелатирующий агент и определить количество водорастворимой части железа, хелатированного этим хелатирующим агентом. Метод неприменим для определения количества свободного хелатообразователя.

Примечания

1 Было показано, что данный метод подходит для определения количества железа, хелатированного каждым из отдельных изомеров хелатирующего агента орто-орто EDDHA (o,o-EDDHA) в удобрениях.

2 o,o-EDDHA и o,p-EDDHA являются сокращениями, используемыми в настоящем стандарте. Полные наименования приведены в приложении C.

3 Вещества o,o-EDDHA и o,p-EDDHA существуют как разные стереоизомеры. Для o,o-EDDHA существуют мезоформа и d/I пара (рацемические изомеры), для o,p-EDDHA существуют две разные d/I пары. В этом методе все четыре стереоизомера наблюдаются отдельно.

4 В настоящее время аналитически чистый стандартный образец существует только для o,o-EDDHA. Метод для o,p-EDDHA был разработан со стандартным образцом o,p-EDDHA, содержащим неопределенную концентрацию o,p-EDDHA.

Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный документ. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).

EN 1482-2 Fertilizers and liming materials - Sampling and sample preparation - Part 2: Sample preparation (Удобрения и известковые материалы. Отбор проб и подготовка проб. Часть 2. Подготовка проб)

Используют обратную высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) с УФ-детектором при 277 нм. Образец разделяют на колонке для обращенно-фазовой хроматографии на основе диоксида кремния с использованием формиата натрия (молярная концентрация c = 0,015 моль/дм³, pH 3,0), и ацетонитрила в качестве подвижной фазы. Для o,p-EDDHA и o,o-EDDHA наблюдают два пика стереоизомера. Концентрацию железа, хелатированного o,p-EDDHA (o,p-Fe) определяют в соответствии с методом внешнего стандарта.

Влияющих факторов не выявлено. Хелаты железа с EDTA, HEDTA, DTPA и EDDHMA не интерферируют.

a) Все реактивы должны быть аналитической степени чистоты.

b) Вода, используемая для приготовления элюентов, стандартных растворов и растворов образцов, должна соответствовать степени чистоты 1 по стандарту [4].

c) При использовании для приготовления стандартных растворов реактивов с заявленной чистотой (P) менее чем 99% необходимо сделать поправку для получения требуемой концентрации раствора.

5.2 Натрия гидроксид, раствор c(NaOH) = 0,1 моль/дм³: растворяют в воде, не содержащей диоксид углерода, 4 г гранулированного NaOH в мерной колбе вместимостью 1 дм³, доводят до метки и гомогенизируют.

5.3 Кислота соляная, раствор c(HCl) = 4 моль/дм³: разбавляют 395 г концентрированной соляной кислоты (37%) до 1000 см³ водой.

5.4 Кислота соляная, раствор c(HCl) = 0,1 моль/дм³: разбавляют 25 см³ соляной кислоты (5.3) до 1000 см³ водой.

5.5 Железа (III) нитрат, раствор : растворяют 3,04 г нонагидрата нитрата железа (III) [Fe(NO₃)₃·9H₂O] в 80 см³ воды, добавляют 1 см³ соляной кислоты (5.3), переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят до метки водой и гомогенизируют. Проверяют, что концентрация Fe этого раствора - (4200 +/- 100) мг/дм³ (например, AAS или йодометрическим титрованием). Этот раствор является стабильным примерно в течение одной недели.

5.6 o,p-Fe-EDDHA, стандартный раствор : в стакане вместимостью 100 см³ взвешивают с точностью до 0,1 мг (64,5 +/- 1,0) мг·100/P [где P - комплексонометрическая чистота стандартного образца в процентах кислотной формы o,p-H₄-EDDHA, полученного ручным или автоматическим фотометрическим титрованием со стандартным раствором Fe (III) при постоянном pH 6 (непрерывная система контроля pH)], o,p-H₄-EDDHA ( - см. 5.1). Добавляют 5 см³ NaOH (5.2) и тщательно растворяют образец путем перемешивания. После полного растворения добавляют 35 см³ воды и 2,5 см³ раствора нитрата железа (III) (5.5). Доводят pH раствора до 3,0, используя NaOH (5.2) или HCl (5.4). Количественно переносят раствор в мерную колбу вместимостью 100 см³. Доводят до метки водой и гомогенизируют.

5.7 Элюент раствор: растворяют 1,0 г формиата натрия в 800 см³ воды. Доводят значение pH до 3,0, используя HCl (5.3 или 5.4). Переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 см³. Разбавляют до метки водой и гомогенизируют. Фильтруют раствор через мембранный фильтр пористостью 0,45 мкм. Смешивают 915 см³ раствора формиата натрия (pH 3,0) с 85 см³ ацетонитрила. Гомогенизируют и дегазируют раствор.

Примечание - Качество и состояние колонки может влиять на время удерживания. Чтобы настроить время удержания, варьируют соотношение раствора формиата натрия и ацетонитрила.

Используют обычное лабораторное оборудование, посуду и:

6.2 Магнитную мешалку с магнитами.

6.3 Хроматограф, оборудованный:

a) изократическим насосом, доставляющим элюент при скорости потока 1,0 мл/мин;

b) нагнетательным клапаном с петлевым дозатором 20 мкл;

c) модифицированной капиллярной кварцевой колонкой C18 (ODS-2); 250 x 4,6 мм ID; d^p = 5 мкм <*>;

d) защитной колонкой C18 (ODS-2) (рекомендуется использовать);

e) UV/VIS-детектором с фильтром пористостью 277 нм;

f) интегратором.

--------------------------------

<*> Spherisorb ODS-2 от Waters или Allsphere ODS-2 от Alltech являются примерами подходящих продуктов, доступных на коммерческой основе. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не свидетельствует о поддержке CEN данного продукта.

6.4 Фильтры микромембранные, устойчивые к водным растворам, пористостью 0,45 мкм.

Отбор пробы не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Рекомендованный метод отбора пробы приведен в стандарте [1].

Подготовку пробы проводят в соответствии с EN 1482-2.

Примечание - Для уменьшения размера образцов с большим количеством хелатирующих агентов не рекомендуется использовать высокоскоростную лабораторную мельницу. Более удобно измельчать образец в ступке до размера частиц менее чем 1 мм.

Взвешивают с точностью до 0,1 мг примерно (250 +/- 10) мг образца (m_s) в химическом стакане вместимостью 250 см³. Добавляют 200 см³ воды и растворяют образец перемешиванием в течение 30 мин. Количественно переносят раствор в мерную колбу вместимостью 250 см³. Доводят до метки водой и гомогенизируют.

Примечание - Если концентрация o,p-Fe менее 0,5% или более 5%, то концентрация этих хелатов железа будет находиться за пределами диапазона градуировки. Для более точного определения ввод должен быть соответственно увеличен или уменьшен.

Отбирают пипеткой объем стандартного раствора o,p-Fe-EDDHA V (см³) (5.6) (см. таблицу 1) в шесть мерных колб вместимостью 50 см³. Доводят до метки водой и гомогенизируют. Эти растворы содержат хелатированное o,p-EDDHA железо в апроксимированных концентрациях, приведенных в таблице 1.

Точную массовую концентрацию хелатированного o,p-EDDHA железа, мг/дм³, рассчитывают по формуле

где

где V - количество использованного стандартного раствора, см³;

- количество o,p-H₄-EDDHA, использованного для подготовки стандартного раствора, мг;

P - чистота стандартного образца для градуировки, %.

Примечание - Предполагается, что стандартный образец o,p-EDDHA кислоты содержит равное количество двух стереоизомеров.

Непосредственно перед введением все растворы должны быть отфильтрованы через мембранный фильтр (6.4) пористостью 0,45 мкм. Вводят стандартные растворы (8.2) в хроматографическую систему (6.3). Измеряют время удерживания и площади двух изомеров o,p-Fe-EDDHA (d/I-1 и d/I-2) для всех растворов. Проводят разную линию калибровки для каждого из двух изомеров со значениями площадей пиков стандартных растворов в сопоставлении с точной концентрацией Fe (мг/дм³), хелатированного каждым изомером хелатирующего агента.

Вводят раствор образца (8.1). Идентифицируют различные изомеры по времени удерживания полученных пиков (рисунок A.1, приложение A). Измеряют площадь пика для каждого изомера. Определяют концентрацию железа в хелатной форме (мг/дм³) для каждого изомера, используя соответствующую линию калибровки.

Рассчитывают массовую долю железа Fe, хелатированного o,p-EDDHA, w, %, в удобрении по формуле

где - массовая концентрация Fe, хелатированного первой группой стереоизомеров (d/I-1) o,p-EDDHA, мг/дм³;

- массовая концентрация Fe, хелатированного второй группой стереоизомеров (d/I-2) o,p-EDDHA, мг/дм³;

m_s - масса образца, взятого для анализа, мг.

В 2005 г. 12 лабораториями было проведено межлабораторное испытание 4 разных товарных проб. Результаты этого межлабораторного испытания приведены в приложении B. Повторяемость и воспроизводимость были рассчитаны в соответствии со стандартом [2].

Абсолютное расхождение двух результатов независимых единичных испытаний, полученных одним и тем же методом на идентичном анализируемом материале в одной лаборатории одним и тем же лаборантом, с использованием одного и того же оборудования в течение короткого интервала времени, будет не более чем в 5% случаев превышать значения r, приведенные в таблице 2.

Абсолютное расхождение двух результатов независимых единичных испытаний, полученных одним и тем же методом на идентичном анализируемом материале в различных лабораториях разными лаборантами с использованием разного оборудования, будет не более чем в 5% случаев превышать значения R, приведенные в таблице 2.

Примечание - Пределы воспроизводимости, полученные для более низких концентраций Fe, хелатированного o,p-EDDHA, выше, чем допустимые значения, принятые регламентом [3] для содержания микроэлементов.

Протокол испытаний должен содержать:

a) всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;

b) используемый метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;

c) результаты испытания вместе с единицами измерения;

d) дату окончания испытания;

e) информацию о том, выполнены ли требования по пределу воспроизводимости;

f) все этапы методики, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, а также данные о любых отклонениях от метода настоящего стандарта, которые могут повлиять на результаты испытания.

Статистические результаты межлабораторных испытаний приведены в таблице B.1.