"ГОСТ 7702.2.6-93. Межгосударственный стандарт. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридий"
(введен в действие Постановлением Госстандарта России от 02.06.1994 N 160)

Ссылочные нормативно-технические документы

1. Разработан Госстандартом России.

Внесен Техническим секретариатом Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации.

2. Принят Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г.

За принятие проголосовали:

3. Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 02.06.94 N 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 7702.2.6-93 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 01.01.95.

4. Взамен ГОСТ 7702.2-74 в части методов определения анаэробов (Cl. botulinum, Cl. perfringens).

5. Переиздание.

Настоящий стандарт распространяется на предназначенные для реализации и промышленной переработки:

мясо птицы в виде потрошеных, полупотрошеных и потрошеных с комплектом потрохов и шеей тушек, частей, полученных при их разделке, а также обваленное и измельченное;

субпродукты и полуфабрикаты птичьи.

Стандарт устанавливает методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридий.

Методы основаны на высеве определенного количества продукта или смывов с него, их разведении в питательные среды, подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов к сульфитредуцирующим клостридиям, определении их количества в 1 г продукта или в 1 см3 смыва.

2.1. Выявление вегетативных клеток сульфитредуцирующих клостридий включает в себя два этапа:

обнаружение сульфитредуцирующей способности микроорганизмов;

определение принадлежности выделенных микроорганизмов к клостридиям.

В зависимости от последовательности этапов используют один из двух методов проведения исследования.

2.1.1. При первом методе исследования сначала определяют сульфитредуцирующую способность микроорганизмов. Для этого 1 г (см3) исходного материала или его разведения, приготовленного по ГОСТ 26669, высевают в чашки Петри глубинным способом по ГОСТ 26670, с заливкой одной из агаризованных сред по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.36, 2.4.37 или в стерильные пробирки с заливкой посевного материала одной из названных сред столбиком 10 - 12 см. Посевы помещают в анаэростат и инкубируют. При отсутствии анаэростата на поверхность затвердевшей среды в чашки или пробирки наливают слой не менее 0,2 см голодного агара, приготовленного по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.4. После его затвердения посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 - 72 ч.

2.1.2. Темно-серые или черные колонии, вызвавшие потемнение среды, испытывают на принадлежность к клостридиям. Из каждой колонии (не менее 5) пересевают культуру в пробирки со средой Китт-Тароцци по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.38, инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 - 72 ч. При появлении признаков роста (помутнение среды, выделение газа, появление постороннего запаха) проводят микроскопирование с окрашиванием мазков по Граму и окрашивание для выявления спор по ГОСТ 36425, определение каталазной активности. При этом культуру для мазков и исследований отбирают со дна пробирки.

2.1.3. Сульфитредуцирующие клостридии представляют собой грамположительные палочки, располагающиеся в одиночку, попарно, в виде цепочек или скопления параллельных клеток. При спорообразовании споры сульфитредуцирующих клостридий овальные или сферические, центральные, субтерминальные или терминальные.

2.1.4. Для определения каталазной активности на предметном стекле в каплю культуральной жидкости добавляют каплю перекиси водорода массовой концентрации 30 г/дм3. Выделение пузырьков газа свидетельствует о каталазной активности.

Сульфитредуцирующие клостридии каталазы не образуют.

2.1.5. Для подтверждения анаэробного роста культуру из среды Китт-Тароцци пересевают в стерильные чашки Петри глубинным способом по ГОСТ 26670 с заливкой одной из агаризованных сред, приготовленных по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.1 - 2.4.5. Затвердевшую среду накрывают стерильным предметным стеклом, чашки переворачивают, посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 - 48 ч. Появление колоний в глубине агара на 2 - 3 мм от края стекла свидетельствует о принадлежности микроорганизмов к клостридиям.

2.1.6. При втором методе исследования сначала исследуемый материал высевают в среду Китт-Тароцци, инкубируют, проводят микроскопирование, определение каталазы, пересев под стекло, как указано в 2.1.2 - 2.1.5. Установив принадлежность микроорганизмов к клостридиям, проводят пересев на железосульфитсодержащие среды. Определяют сульфитредуцирующую способность выделенных клостридий по 2.1.1.

2.1.7. Выделение спор сульфитредуцирующих клостридий проводят после прогревания исследуемого материала. Пробирки с исследуемой навеской продукта или смывов и (или) их разведений помещают в водяную баню температурой (50 +/- 1) °C. Воду в бане греют до достижения внутри продукта или смыва температуры (80 +/- 1) °C, которую определяют в контрольной параллельной пробирке со средой без посева. Прогрев проводят (20 +/- 1) мин. Затем пробирки с исследуемым материалом охлаждают водопроводной водой. Далее исследование проводят по 2.1.1 - 2.1.6.

2.2. При определении количества сульфитредуцирующих клостридий используют метод посева в железосульфитсодержащие агаризованные среды или в жидкие среды по методу НВЧ.

2.2.1. При определении количества сульфитредуцирующих клостридий методом посева в агаризованные среды по 1 см3 разведений продукта или смыва вносят в две чашки Петри. Посевы заливают одной из железосульфитсодержащих агаризованных сред. Проводят инкубирование в анаэробных условиях по 2.1.1 с последующим подсчетом и подтверждением принадлежности выросших колоний к сульфитредуцирующим клостридиям по 2.1.2 - 2.1.5.

2.2.2. При определении количества сульфитредуцирующих клостридий по методу НВЧ высевают три последовательных 10-кратных разведения в регенерированную среду Китт-Тароцци. Каждое разведение в трехкратной повторности, соотношение высеваемого материала к питательной среде 1:9. Инкубирование посевов и подтверждение принадлежности выделенной культуры к сульфитредуцирующим клостридиям проводят по 2.1.6.

3.1. Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

3.2. При подтверждении принадлежности выделенных микроорганизмов к клостридиям с сульфитредуцирующими свойствами дают заключение.

3.3. Результаты выявления сульфитредуцирующих клостридий в исследуемой пробе записывают: сульфитредуцирующие клостридии обнаружены или не обнаружены, при этом указывается масса продукта в граммах или объем смывной жидкости в кубических сантиметрах, или поверхность в квадратных сантиметрах.

3.4. При определении количества сульфитредуцирующих клостридий при посеве на агаризованные среды проводят подсчет по ГОСТ 7702.2.1/ГОСТ Р 50396.0, 3.2.2, при определении количества по методу НВЧ подсчет проводят по ГОСТ 36425.

Результаты количественного определения сульфитредуцирующих клостридий записывают по ГОСТ 7702.2.1/ГОСТ Р 50396.0, 3.3.