"ФС.2.1.0325. Фармакопейная статья. Эмтрицитабин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

4-Амино-1-[(2R,5S)-2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]-5-фторпиримидин-2(1H)-он.

Содержит не менее 98,0% и не более 102,0% эмтрицитабина C₈H₁₀FN₃O₃S в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Описание. Белый или почти белый, кристаллический порошок. <*> Проявляет полиморфизм.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в воде и в метаноле, практически нерастворим в метиленхлориде.

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца эмтрицитабина.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания основного пика на хроматограмме раствора стандартного образца ("Родственные примеси").

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Подвижная фаза (ПФ). Диэтиламин - трифторуксусная кислота - метанол - этанол - гексан 1:1:50:150:800.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в 5 мл метанола и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор стандартного образца 1. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эмтрицитабина, растворяют в 5 мл метанола и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор стандартного образца 2. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца 1 и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 3,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 1 мг 5-эпимера эмтрицитабина, растворяют в 1 мл метанола и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора раствором стандартного образца 1 до метки.

Раствор для проверки чувствительности. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл раствора стандартного образца 2 и доводят объем раствора ПФ до метки.

Примечание

Энантиомер эмтрицитабина: 4-амино-1-[(2S,5R)-2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]-5-фторпиримидин-2(1H)-он [137530-41-7].

Транс-изомеры эмтрицитабина:

5-эпимер - 4-амино-1-[(2R,5R)-2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]-5-фторпиримидин-2(1H)-он [145986-26-1].

2-эпимер - 4-амино-1-[(2S,5S)-2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]-5-фторпиримидин-2(1H)-он [145416-34-8].

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности, раствор стандартного образца 2, испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Эмтрицитабин - 1 (около 20 мин); энантиомер эмтрицитабина - около 0,54; 5-эпимер эмтрицитабина - около 1,23 и около 1,33.

Пригодность хроматографической системы определяют в соответствии с ОФС "Хроматография" со следующим уточнением. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

- разрешение (R) между пиками эмтрицитабина и 5-эпимера эмтрицитабина должно быть не менее 2,0.

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности:

- отношение сигнал/шум (S/N) для пика эмтрицитабина должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора стандартного образца 2:

- фактор асимметрии пика (A_S) эмтрицитабина должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика эмтрицитабина должно быть не более 5,0% (6 определений);

- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику эмтрицитабина, должна составлять не менее 3000 теоретических тарелок.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: эмтрицитабина энантиомер - 1,1; 5-эпимер эмтрицитабина - 1,35.

Содержание примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика примеси эмтрицитабина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика эмтрицитабина на хроматограмме стандартного раствора;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца эмтрицитабина, мг;

P - содержание эмтрицитабина в фармакопейном стандартном образце эмтрицитабина, %.

Допустимое содержание примесей. Эмтрицитабина энантиомер - не более 0,3%, эмтрицитабина 5-эпимер - не более 0,2%.

2. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Буферный раствор. Растворяют 1,54 г ацетата аммония в 800 мл воды и доводят значение pH ледяной уксусной до 4,0, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 75 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в 50 мл буферного раствора и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца эмтрицитабина. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эмтрицитабина, растворяют в буферном растворе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 30 мг (точная навеска) стандартного образца эмтрицитабина и 30 мг (точная навеска) стандартного образца салициловой кислоты, растворяют в 5 мл ацетонитрила и доводят объем раствора буферным раствором до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл переносят 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора буферным раствором до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 3 мг эмтрицитабина 5-фторурацил-аналога, растворяют в буферном растворе и доводят объем раствора буферным раствором до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствором стандартного образца эмтрицитабина до метки. Раствор используют свежеприготовленным.

Раствор для проверки чувствительности. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл стандартного раствора и доводят объем раствора буферным раствором до метки.

Примечание

Эмтрицитабиновая кислота: rac-(2R,5S)-5-[4-амино-2-оксо-5-фторпиримидин-1(2H)-ил]-1,3-оксатиолан-2-карбоновая кислота [1238210-10-0].

Фторцитозин: 4-амино-5-фторпиримидин-2(1H)-он [2022-85-7].

Эмтрицитабина сульфоксид: 4-амино-1-[(2R,3RS,5S)-2-(гидроксиметил)-3-оксо--оксатиолан-5-ил]-5-фторпиримидин-2(1H)-он [152128-77-3].

Ламивудин: 4-амино-1-[(2R,5S)-2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]пиримидин-2(1H)-он [134678-17-4].

Эмтрицитабина 5-фторурацил-аналог: rel-1-[(2R,5S)-2-(Гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]-5-фторпиримидин-2,4(1H,3H)-дион [143790-05-0].

Салициловая кислота: 2-гидроксибензойная кислота [69-72-7].

Эмтрицитабина ментиловый эфир: [(1R,2S,5R)-5-метил-2-(пропан-2-ил)циклогексан-1-ил][(2R,5S)-5-[4-амино-2-оксо-5-фторпиримидин-1(2H)-ил]-1,3-оксатиолан-2-карбоксилат] [764659-72-5].

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Эмтрицитабин - 1 (около 5 - 10 мин); фторцитазин - 0,45; эмтрицитабиновая кислота - 0,63; эмтрицитабина сульфоксид - 0,68; ламивудин - 0,87; эмтрицитабина 5-фторурацил-аналог - 1,13; салициловая кислота - 1,44; эмтрицитабина ментиловый эфир - 2,96.

Пригодность хроматографической системы определяют в соответствии с ОФС "Хроматография" со следующим уточнением. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

- разрешение между пиками эмтрицитабина и эмтрицитабина 5-фторурацил-аналога должно быть не менее 3,0;

- фактор асимметрии пика эмтрицитабина должен быть не более 2,0.

На хроматограмме стандартного раствора:

- относительное стандартное отклонение площади пика эмтрицитабина и площади пика салициловой кислоты должно быть не более 5,0% (6 определений).

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: фторцитазин - 0,79; эмтрицитабиновая кислота - 1,02; эмтрицитабина сульфоксид - 1,19; ламивудин - 0,80; эмтрицитабина 5-фторурацил-аналог - 1,18; эмтрицитабина ментиловый эфир - 1,92.

Содержание любой примеси, кроме салициловой кислоты, в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика соответствующей примеси на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика эмтрицитабина на хроматограмме стандартного раствора;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца эмтрицитабина, мг;

P - содержание эмтрицитабина в фармакопейном стандартном образце эмтрицитабина, %.

Содержание салициловой кислоты в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика соответствующей примеси на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика эмтрицитабина на хроматограмме стандартного раствора;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца салициловой кислоты, мг;

P - содержание салициловой кислоты в фармакопейном стандартном образце салициловой кислоты, %.

Допустимое содержание примесей:

- фторцитозин - не более 0,1%;

- эмтрицитабиновая кислота - не более 0,3%;

- эмтрицитабина сульфоксид - не более 0,15%;

- ламивудин - не более 0,2%;

- эмтрицитабина 5-фторурацил-аналог - не более 0,2%;

- эмтрицитабина ментиловый эфир - не более 0,1%;

- салициловая кислота - не более 0,1%;

- любая неидентифицированная примесь - не более 0,10%;

- сумма всех примесей - не более 0,6%.

Не учитывают пики примесей, содержание которых составляет менее 0,05%.

Вода. Не более 0,5% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции и платиновый тигель.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 1) в зольном остатке, полученном после сжигания 0,5 г субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят методом титриметрии (ОФС "Титриметрия (титриметрические методы анализа)").

В коническую колбу вместимостью 100 мл помещают 0,15 г (точная навеска) субстанции, растворяют в 40 мл уксусной кислоты безводной и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты.

Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС "Потенциометрическое титрование").

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М хлорной кислоты соответствует 24,73 мг эмтрицитабина C₈H₁₀FN₃O₃S.

В защищенном от света месте.