"ФС.2.1.0339. Фармакопейная статья. Эритромицин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

Смесь антибиотиков-макролидов, продуцируемых штаммом Streptomyces erythreus, основным компонентом является эритромицин A: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-7,12,13-Тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил--рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)--D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион.

Содержит не менее 93,0% и не более 102,0% суммы эритромицинов A, B и C, из них эритромицинов B и C не более 5% каждого в пересчете на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество. Содержит не менее 930 мкг/мг и не более 1020 мкг/мг в пересчете на безводное вещество.

Описание. Белый или светло-желтый порошок или бесцветные или светло-желтые кристаллы.

<*> Гигроскопичен, проявляет полиморфизм.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в этаноле 96%, растворим в метаноле, мало растворим в воде.

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области").

Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца эритромицина A.

Если спектры различаются, по 50 мг субстанции и фармакопейного стандартного образца эритромицина A растворяют отдельно в 1 мл метиленхлорида, упаривают и сушат при температуре 60 °C в течение 3 ч при остаточном давлении не более 0,67 кПа (5 мм. рт. ст.).

Не учитывают полосы поглощения в области от 1980 до 2050 см^-1.

2. Тонкослойная хроматография (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза. Тщательно перемешивают 4 объема 2-пропанола, 8 объемов раствора ацетата аммония раствора 15%, предварительно доведенного до pH 9,6 аммиака раствором концентрированным 25%, и 9 объемов этилацетата. После расслаивания смеси используют верхний слой.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10,0 мг субстанции, растворяют в метаноле и доводят объем раствора до метки тем же растворителем.

Раствор стандартного образца эритромицина A. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца эритромицина A, растворяют в метаноле и доводят объем раствора до метки тем же растворителем.

Раствор стандартного образца спирамицина. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца спирамицина, растворяют в метаноле и доводят объем раствора до метки тем же растворителем.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора (10 мкг) и растворов стандартных образцов эритромицина A (10 мкг) и спирамицина (5 мкг). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают спиртовым сернокислым раствором анисового альдегида, сушат при температуре 110 °C в течение 5 мин и просматривают в видимом свете.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и интенсивности окраски должна соответствовать основной зоне адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца эритромицина A и отличаться по положению и окраске от основной зоны адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца спирамицина.

3. Качественная реакция. К 5,0 мг субстанции прибавляют 5 мл раствора ксантгидрола и нагревают на водяной бане; появляется красное окрашивание.

4. Качественная реакция. Растворяют 10 мг субстанции в 5 мл 25% хлористоводородной кислоты; через 10 - 20 мин появляется желтое окрашивание.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы используют свежеприготовленными.

Смесь растворителей. Метанол - фосфатный буферный раствор pH 7,0 1:3.

Буферный раствор. 35,0 г дикалия гидрофосфата растворяют в 900 мл воды, при необходимости доводят pH до 9,0 2 М фосфорной кислотой, и доводят объем раствора водой до 1000 мл.

Подвижная фаза (ПФ). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 50 мл буферного раствора, 400 мл воды, 165 мл 2-метил-2-пропанола, 30 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 40 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в смеси растворителей и доводят объем раствора той же смесью до метки.

Раствор стандартного образца эритромицина A. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 40 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эритромицина A, растворяют в смеси растворителей и доводят объем раствора той же смесью до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эритромицина B и 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эритромицина C, растворяют в смеси растворителей и доводят объем раствора той же смесью до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси B, растворяют в 20 мл стандартного раствора, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного образца эритромицина A и доводят объем раствора стандартным раствором до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 3,0 мл раствора стандартного образца эритромицина A и доводят объем смесью растворителей до метки.

Раствор для идентификации пиков. Распределяют 40 мг фармакопейного стандартного образца эритромицина A по дну бюкса тонким (не более 1 мм) слоем, нагревают при температуре 130 °C в течение 4 ч, охлаждают и растворяют в 10,0 мл смеси растворителей.

Примечание

Эритромицин B: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12S,13R,14R)-7,12-дигидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил--рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)--D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион [527-75-3].

Эритромицин C: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-7,12,13-тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил--рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[(3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)--D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион [1675-02-1].

Примесь B: (3R,4S,5S,6R,7R,9R,11R,12R,13S,14R)-7,12,13-тригидрокси-4-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил--рибо-L-гексопиранозил)окси]-3,5,7,9,11,13-гексаметил-6-{[3,4,6-тридезокси-3-(метиламино)--D-ксило-гексопиранозил]окси}-14-этил-1-оксациклотетрадекан-2,10-дион [992-62-1].

Примесь E: (2R,3R,4S,5R,8R,9S,10S,11R,12R)-3,4-дигидрокси-9-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил--L-рибо-гексопиранозил)окси]-2,4,8,10,12,14-гексаметил-11-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)--D-ксило-гексопиранозил]oxy}-5-этил-6,15-диоксабицикло[10.2.1]пентадец-1(14)-ен-7-он [33396-29-1].

Примесь F: (2R,3R,6R,7S,8S,9R,10R)-3-[(2R,3R)-2,3-Дигидроксипентан-2-ил]-7-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил--L-рибо-гексопиранозил)окси]-2,6,8,10,12-пентаметил-9-{[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)--D-ксило-гексопиранозил]окси}-4,13-диоксабицикло[8.2.1]тридец-1(12)-ен-5-он [105882-69-7].

Хроматографируют раствор для идентификации пиков, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца эритромицина A, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Эритромицин A - 1 (около 15 мин); примесь E - около 4.3; эритромицин B - около 1,8; примесь F - около 1,5; эритромицин C - около 0,5; примесь B - около 0,45.

Идентификация примесей. Для идентификации эритромицинов B и C и примеси B используют хроматограммы растворов для проверки разделительной способности хроматографической системы и стандартного раствора, примесей E и F - по хроматограмме раствора для идентификации и относительным временам удерживания соединений.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы:

- разрешение (R) между пиками примеси B и эритромицина C должно быть не менее 0,8;

- разрешение (R) между пиками примеси B и эритромицина A должно быть не менее 5,5.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания следующих примесей площади пиков умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь E - 0,09; примесь F - 0,15.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика любой примеси не должна превышать площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (не более 3%);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна более чем в 2,3 раза превышать площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (не более 7%).

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,02 площади пика эритромицина A на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,06%), и пики эритромицинов B и C.

Тиоцианат-ионы. Не более 0,3%. Определяют методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Все растворы готовят непосредственно перед использованием и защищают от света.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 г субстанции, растворяют в 20 мл метанола, прибавляют 1,0 мл железа(III) хлорида раствора 9% и доводят объем раствора метанолом до метки.

Эталонный раствор (готовят в двух повторностях). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 г предварительно высушенного при температуре 105 °C в течение 1 ч калия тиоцианата, растворяют в метаноле и доводят объем раствора до метки тем же растворителем. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора, прибавляют 1,0 мл 9% раствора хлорида железа(III) и доводят объем раствора метанолом до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл железа(III) хлорида раствора 9% и доводят объем раствора метанолом до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого и эталонных растворов при длине волны 492 нм относительно раствора сравнения.

Пригодность системы. Система считается пригодной, если отношение S находится в пределах от 0,985 до 1,015:

где A₁ и A₂ - оптическая плотность эталонных растворов первой и второй повторности, соответственно;

a₁ и a₂ - навески калия тиоцианата при приготовлении эталонных растворов первой и второй повторности, соответственно, г.

Содержание тиоцианат-ионов в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где A - оптическая плотность испытуемого раствора;

a - навеска субстанции, г;

58,08 - относительная молекулярная масса тиоцианат-иона;

97,18 - относительная молекулярная масса тиоцианата калия.

Вода. Не более 6,5% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 0,2 г (точная навеска) субстанции и в качестве растворителя раствор имидазола в метаноле 0,1 г/мл.

Сульфатная зола. Не более 0,2% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

1. ВЭЖХ. Определение проводят в условиях испытания "Родственные примеси".

Содержание эритромицина A C₃₇H₆₇NO₁₃ в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика эритромицина A на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика эритромицина A на хроматограмме раствора стандартного образца эритромицина A;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца эритромицина A, мг;

W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей, %;

P - содержание эритромицина A в фармакопейном стандартном образце эритромицина A, %.

Содержание эритромицина B C₃₇H₆₇NO₁₂ и эритромицина C C₃₆H₆₅NO₁₃ в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика эритромицина B или эритромицина C, соответственно, на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика эритромицина B или эритромицина C, соответственно, на хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца эритромицина B или эритромицина C, соответственно, мг;

W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей, %;

P - содержание эритромицина B или эритромицина C в фармакопейном стандартном образце эритромицина B или эритромицина C, соответственно, %.

2. Микробиологический метод. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар".

В герметично укупоренной упаковке, в защищенном от света месте.