"ФС.2.1.0491. Фармакопейная статья. Третиноин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

(2E,4E,6E,8E)-3,7-Диметил-9-(2,6,6-триметилциклогек-1-ен-1-ил)нона-2,4,6,8-тетраеновая кислота.

Содержит не менее 98,0% и не более 102,0% третиноина C₂₀H₂₈O₂ в пересчете на сухое вещество.

Описание. Желтый или светло-оранжевый кристаллический порошок.

<*> Субстанция чувствительна к воздействию воздуха, тепла и света, особенно в растворе. Все испытания выполняют в месте, защищенном от прямого света, используя свежеприготовленные растворы.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Умеренно растворим в метиленхлориде, мало растворим в спирте 96%, практически нерастворим в воде.

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца третиноина.

2. Спектрофотометрия (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Все растворы используют свежеприготовленными.

Растворитель. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,0 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,01 М и доводят объем раствора 2-пропанолом до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор стандартного образца третиноина. В мерную колбу вместимость 50 мл помещают 2 мг фармакопейного стандартного образца третиноина, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 200 до 400 нм должен соответствовать спектру раствора стандартного образца третиноина.

3. Тонкослойная хроматография (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля GF₂₅₄.

Подвижная фаза (ПФ). Уксусная кислота ледяная - ацетон - трет-бутилметиловый эфир - циклогексан 2:4:40:54.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в метиленхлориде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца третиноина. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца третиноина, растворяют в метиленхлориде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора (5 мкг) и раствора стандартного образца третиноина (5 мкг). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и степени подавления флуоресценции должна соответствовать зоне адсорбции третиноина на хроматограмме раствора стандартного образца третиноина.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза (ПФ). Уксусная кислота ледяная - вода - метанол 5:225:770.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 г субстанции, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора метанолом до метки.

Раствор стандартного образца примеси A. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 20 мг фармакопейного стандартного образца изотретиноина ((2Z,4E,6E,8E)-3,7-Диметил-9-(2,6,6-триметилциклогек-1-ен-1-ил)нона-2,4,6,8-тетраеновая кислота [4759-48-2], растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 мл раствора стандартного образца примеси A [4759-48-2], прибавляют 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора метанолом до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора сравнения и доводят объем раствора метанолом до метки.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор стандартного образца примеси A, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Третиноин - 1 (около 35 мин); примесь A - около 0,75.

Идентификация примесей. Хроматограмма раствора стандартного образца примеси A используется для идентификации пика примеси A.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R) между пиками примеси A и третиноина должно быть не менее 5,0.

На хроматограмме раствора сравнения:

- фактор асимметрии пика (A_S) третиноина должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика третиноина должно быть не более 2,0% (6 введений);

- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику третиноина, должна составлять не менее 1000 теоретических тарелок.

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика третиноина должно быть не менее 10.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси A не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать 0,4-кратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2%);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать двукратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%);

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%).

Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 1). Сушат в вакууме до постоянной массы 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002% (ОФС "Тяжелые металлы", метод 12).

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят методом титриметрии (ОФС "Титриметрия (титриметрические методы анализа)").

Растворяют 0,2 г (точная навеска) субстанции в 70 мл ацетона и титруют 0,1 М раствором тетрабутиламмония гидроксида в 2-пропаноле. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС "Потенциометрическое титрование").

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора тетрабутиламмония гидроксида в 2-пропаноле соответствует 30,04 мг третиноина C₂₀H₂₈O₂.

В герметично укупоренной упаковке, под инертным газом в защищенном от света месте.

Содержимое открытой упаковки рекомендуется использовать как можно скорее, а неиспользованную часть необходимо хранить под инертным газом.