"ОФС.1.2.2.2.0018. Общая фармакопейная статья. 4-Аминофенол"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

Метод определения 4-аминофенола в лекарственных средствах, содержащих парацетамол, основан на использовании ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы, содержащие парацетамол или 4-аминофенол, защищают от света и используют свежеприготовленными.

Буферный раствор. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 4,0 г натрия цитрата и 1,5 г лимонной кислоты безводной, растворяют в воде и доводят объем тем же растворителем до метки.

Подвижная фаза А (ПФА). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 0,60 г калия дигидрофосфата и 0,82 г динатрия гидрофосфата безводного.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Вода.

Подвижная фаза В (ПФВ). Ацетонитрил.

Растворитель. Ацетонитрил - буферный раствор 10:90.

Испытуемый раствор А. Готовят раствор субстанции или препарата в растворителе с концентрацией парацетамола 10 мг/мл и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мл испытуемого раствора А, доводят объем раствора растворителем до метки и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор стандартного образца 4-аминофенола. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают около 5 мг (точная навеска) стандартного образца 4-аминофенола, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мл раствора стандартного образца 4-аминофенола и доводят объем раствора растворителем до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мл испытуемого раствора А и 15 мл раствора стандартного образца 4-аминофенола, доводят объем раствора растворителем до метки.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор Б.

Время удерживания 4-аминофенола - около 5 мин.

На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика 4-аминофенола должно быть не менее 20.

На хроматограмме стандартного раствора:

- разрешение (R_S) между пиками 4-аминофенола и ближайшим к нему должно быть не менее 1;

- фактор асимметрии пика (A_S) 4-аминофенола должен быть не более 1,5;

- относительное стандартное отклонение площади пика 4-аминофенола должно быть не более 5,0% (6 введений).

Содержание 4-аминофенола C₆H₇NO в субстанции или препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме стандартного раствора;

a₀ - навеска стандартного образца 4-аминофенола, мг;

P - содержание 4-аминофенола в стандартном образце 4-аминофенола, %.

Допустимое содержание 4-аминофенола: Не более 0,15% по отношению к парацетамолу, если в фармакопейной статье не указано иначе.

Настройка хроматографической системы. При необходимости, время удерживания 4-аминофенола может быть уменьшено или увеличено в соответствии с таблицей:

Подвижная фаза. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,6 г натрия бутансульфоната, растворяют в смеси муравьиная кислота - метанол - вода 4:150:850 и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Растворитель. Метанол - вода 15:85.

Испытуемый раствор. Готовят раствор субстанции или препарата в растворителе с концентрацией парацетамола 10 мг/мл и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор стандартного образца 4-аминофенола. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают около 10 мг (точная навеска) стандартного образца 4-аминофенола, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,1 г стандартного образца парацетамола и доводят объем раствором стандартного образца 4-аминофенола до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора для проверки пригодности хроматографической системы и доводят объем растворителем до метки.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца 4-аминофенола.

Время удерживания соединений. Парацетамол - около 6 мин; 4-аминофенол - около 3 мин.

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика 4-аминофенола должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

- разрешение (R_S) между пиками 4-аминофенола и парацетамола должно быть не менее 5;

- фактор асимметрии пика (A_S) 4-аминофенола должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика 4-аминофенола должно быть не более 5,0% (6 введений);

- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику 4-аминофенола, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.

Содержание 4-аминофенола C₆H₇NO в субстанции или препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика 4-аминофенола на хроматограмме раствора стандартного образца 4-аминофенола;

a₀ - навеска стандартного образца 4-аминофенола, мг;

P - содержание 4-аминофенола в стандартном образце 4-аминофенола, %.

Допустимое содержание 4-аминофенола: Не более 0,01% по отношению к парацетамолу, если в фармакопейной статье не указано иначе.