"ФС.3.1.0149.22. Фармакопейная статья. Кальция пантотенат + Кератин + пара-Аминобензойная кислота + Тиамина мононитрат + Цистин, капсулы"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 11.04.2022 N 246)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание")

Настоящая фармакопейная статья распространяется на Кальция пантотенат + Кератин + пара-Аминобензойная кислота + Тиамина мононитрат + Цистин, капсулы.

Препарат должен соответствовать требованиям ОФС "Капсулы". Препарат содержит от заявленного количества не менее 95% и не более 120% Кальция пантотенат, не менее 80% и не более 120% Кератина, не менее 95% и не более 115% пара-Аминобензойной кислоты, не менее 95% и не более 115% Тиамина мононитрата и не менее 95% и не более 120% Цистина.

Содержание раздела приводится в соответствии с ОФС "Капсулы".

Метод ВЭЖХ. Время удерживания пиков: кальция пантотената, пара-аминобензойная кислоты, тиамина мононитрата и цистина на хроматограмме испытуемого раствора должны соответствовать временам удерживания соответствующих пиков на хроматограмме стандартного раствора.

Хроматографический профиль аминокислотного гидролизата испытуемого препарата и CO кератина и медицинских дрожжей должен совпадать.

Однородность массы. Определение проводят в соответствии с ОФС "Однородность массы дозированных лекарственных форм".

Распадаемость. Не более 30 мин. Определение проводят с использованием дисков в соответствии с ОФС "Распадаемость таблеток и капсул".

Микробиологическая чистота. Должен соответствовать требованиям ОФС "Микробиологическая чистота". Категория 3А.

Не менее 70% (Q) от содержания каждого определяемого компонента в капсуле должно перейти в раствор за 60 мин. Определение проводят методом ВЭЖХ.

Градиент

Детектирование

В мерную колбу вместимостью 500 мл помещают около 10,0 мг (точная навеска) стандарта Цистина, около 10,0 мг (точная навеска) стандарта пара-Аминобензойной кислоты, около 30,0 мг (точная навеска) стандарта Кальция пантотената, около 30,0 мг (точная навеска) стандарта Тиамина мононитрата, добавляют 100 мл хлористоводородной кислоты раствор 0,1 М, смесь нагревают на водяной бане при температуре 40 °C, перемешивая в течение 40 мин при 200 об/мин. Затем колбу помещают на ультразвуковую баню на 20 мин. После охлаждения объем раствора в колбе доводят до метки хлористоводородной кислотой раствором 0,1 М.

680 мг гептансульфоната растворяют примерно в 500 мл воды в мерной колбе вместимостью 2000 мл. Добавляют 100 мл метанола и 400 мкл фосфорной кислоты раствора 85%, затем доводят объем раствор водой до метки и перемешивают.

340 мг натрия гептансульфоната растворяют примерно в 100 мл воды в мерной колбе вместимостью 1000 мл. Добавляют 600 мл метанола, затем объем раствора в колбе доводят до метки метанолом и перемешивают. Значение pH устанавливают до 3,00 фосфорной кислоты раствором 85%.

Объем среды растворения: 900 мл (среда растворения: хлористоводородная кислота раствор 0,1 М);

Температура: 37 +/- 0,5 °C;

Скорость вращения: 50 об/мин;

Метод перемешивания: Лопастная мешалка

Отбор проб: 60 мин

Объем пробы: 5 мл

В сосуд аппарата для растворения помещают 900 мл среды для растворения. Доводят температуру среды для растворения до 37 °C +/- 0,5 °C. По одной капсуле помещают в каждый из 6-ти сосудов со средой для растворения до начала вращения мешалки.

Общее время хроматографирования - 40 мин, при этом продолжительность непосредственного хроматографирования составляет 23 мин, далее до 40 мин длится стадия промывки колонки.

Процентное содержание каждого активного компонента (X), перешедшего в среду растворения через 60 мин, вычисляют по формуле:

где:

S1. - площадь пика определяемого компонента на хроматограмме раствора испытуемого образца;

Sо. - площадь пика определяемого компонента на хроматограмме раствора соответствующего стандартного образца;

aо. - навеска соответствующего стандартного образца;

Т - теоретическое содержание определяемого компонента

Хроматографическую систему считают пригодной, если выполняются следующие условия:

- разрешение между пиками определяемых компонентов должно быть не менее 1,5;

- коэффициент асимметрии пика определяемого вещества должен быть не более 2.

Тиамин мононитрат, Кальция пантотенат, Цистин, пара-Аминобензойная кислота

Определение проводят методом ВЭЖХ в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография"

Подвижная фаза: метанол + вода + 1 М раствор фосфорной кислоты + гексансульфоновая кислота (270 мл + 730 мл + 10 мл + 1,0 г).

Буферный раствор pH 2,0. 6,57 г калия хлорида растворяют в воде, добавляют 119,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты, затем раствор разводят водой до 1000,0 мл.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают около 84,0 мг (точная навеска) гомогенизированного вещества, добавляют 90 мл буферного раствора с pH 2,0, смесь обрабатывают на ультразвуковой бане в течение 30 мин при температуре около 47 °C. После охлаждения объем раствора в колбе доводят до 100,0 мл буферным раствором с pH 2,0, затем фильтруют через мембранный фильтр (0,45 мкм), отбрасывая первый 1 мл фильтрата.

Раствор стандартного образца. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают около 5 мг (точная навеска) цистина стандарта, около 5,0 мг (точная навеска) кислоты пара-аминобензойной стандарта, около 15,0 мг (точная навеска) кальция пантотената и около 15,0 мг (точная навеска) тиамина мононитрата стандарта, добавляют 90 мл буферного раствора pH 2,0, смесь подвергают ультразвуковой обработке в течение 30 мин при температуре около 47 °C. После охлаждения объем раствора в колбе доводят до метки буферным раствором pH 2,0, затем фильтруют через мембранный фильтр (0,45 мкм).

Определяют площади пиков цистина, кальция пантотената, кислоты пара-аминобензойной и тиамина мононитрата для испытуемого и стандартного растворов.

Время удерживания:

Цистин: около 3 мин

Кальция пантотенат: около 3,6 мин

Кислота пара-аминобензойная: около 5,5 мин

Тиамина мононитрат: около 14 мин

- коэффициент разделения между всеми определяемыми компонентами должен быть не менее 1,5;

- коэффициент симметрии пиков: цистина, кальция пантотената и кислоты пара-аминобензойной должен быть не менее 2,0;

- коэффициент симметрии пика тиамина мононитрата должен быть не менее 3,5;

- эффективность хроматографической колонки должна быть не менее 5000 теоретических тарелок.

Количественное содержание каждого компонента (G) в мг/капсуле вычисляют по формуле:

где: Ap - площадь пика определяемого вещества в испытуемом растворе;

Aг - площадь пика определяемого вещества в стандартном растворе;

Ep - навеска содержимого капсул, мг;

Eг - навеска стандарта, мг;

Gr - количественное содержание компонентов в стандартном образце, %;

K - средняя масса содержимого капсул (мг).

Кератин - количественное содержание протеина - не менее 80%;

Дрожжи медицинские - количественное содержание протеина - не менее 45%.

Определение проводят методом аминокислотного анализа.

Предварительно проводят гидролиз.

Взвешивают 100,0 мг дрожжей, 100,0 мг кератина и 400,0 мг содержимого капсул в отдельные круглодонные колбы вместимостью по 250 мл. После добавления 50 мл хлористоводородной кислоты раствора 6 М, содержимое колбы перемешивают и добавляют кипятильные камни. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 23 ч под током азота.

После охлаждения до температуры от 15 до 25 °C обратный холодильник промывают 5 мл цитратного буфера. Гидролизат доводят до pH 2,2 натрия гидроксида раствором 7,5 М. Температура должна быть не выше 40 °C. Гидролизат количественно переносят в мерную колбу вместимостью 200 мл, доводят объем раствора до метки цитратным буфером и перемешивают. Раствор хранят при температуре ниже 5 °C.

510 мл хлористоводородной кислоты концентрированной (плотность 1,19) помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой до метки и тщательно перемешивают.

22,2 мл лимонной кислоты раствора 0,1 М и 27,8 мл натрия дигидрофосфата раствора 0,2 М, доводят водой до метки; pH 5,4.

600 мл исходного раствора натрия гидроксида (ГФ XI, вып. 2, стр. 65) помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Раствор после гидролиза фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм. Аминокислоты определяют в стандартном аминокислотном анализаторе (нингидриновая дериватизация).

Основаны на результатах определения индивидуальных аминокислот в дрожжах и в кератине. Содержание дрожжей и кератина в препарате определяют по формуле:

P·Api = Y·Ayi + K·Aki,

где: P - масса капсулы (мг);

K - содержание кератина в капсуле (мг);

Y - содержание дрожжей в капсуле (мг);

Api - концентрация аминокислоты "i" в капсуле (%);

Ayi - концентрация аминокислоты "Ь> в дрожжах (%);

Aki - концентрация аминокислоты "i" в кератине (%);

При температуре не выше 25 °C в сухом, защищенном от света месте в соответствии с ОФС "Хранение лекарственных средств".