"Фармакопейная статья. Желатин. ФС.2.1.0099.18"
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III")

Желатин представляет собой очищенный белок, получаемый неполным щелочным или неполным кислотным, или ферментативным гидролизом животного коллагена (включая рыбий и птичий). В результате гидролиза получают гелеобразующий или негелеобразующий желатин. Требования данной статьи распространяются на оба сорта желатина.

<*> Изоэлектрическая точка для желатина, полученного неполным кислотным гидролизом, при pH 6,0 и 9,5. Изоэлектрическая точка для желатина, полученного неполным щелочным гидролизом при pH 4,7 и 5,6.

Описание. Твердое вещество от светло-желтого до желтого цвета, в виде полупрозрачных листков, кусков, гранул или порошка.

Растворимость. Набухает в холодной воде и при нагревании образует коллоидный раствор, переходящий при охлаждении в гель. Растворим в горячей воде. Практически нерастворим в органических растворителях.

Подлинность.

1. Качественная реакция (биуретовая реакция). 1 г субстанции растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, при температуре около 55 °C, доводят водой до 100 мл и выдерживают раствор при этой температуре до испытания.

К 2 мл полученного раствора прибавляют 1 каплю 12,5% раствора меди сульфата. Перемешивают и прибавляют 0,5 мл 8,5% раствора натрия гидроксида; должно появиться фиолетовое окрашивание.

2. Качественная реакция. 0,2 г субстанции растворяют в 20 мл воды при нагревании до температуры 60 - 70 °C. К 2 мл полученного раствора прибавляют 0,5 мл 5% раствора танина; должен образоваться хлопьевидный осадок.

3. Качественная реакция (для не образующего гель желатина). 0,5 г испытуемого образца помещают в колбу вместимостью 250 мл. Прибавляют 10 мл воды и 5 мл концентрированной серной кислоты. Накрывают часовым стеклом и нагревают при температуре 105 °С течение 4 часов. После охлаждения прибавляют 200 мл воды. Доводят 20% раствором натрия гидроксида до pH 6,0 - 8,0. К 2 мл полученного раствора прибавляют 2 мл свежеприготовленного раствора хлорамина 14 г/л в фосфатном буферном растворе pH 6,8. Перемешивают и выдерживают 20 минут. Прибавляют 2 мл свежеприготовленного цветного реагента (готовят непосредственно перед использованием растворяя 1,0 г диметиламинобензальдегида в 3,5 мл хлорной кислоты и медленно добавляя 6,5 мл 2-пропанола). Перемешивают и нагревают на водяной бане в течение 15 минут; должно появиться красное окрашивание.

4. Качественная реакция. 0,5 г испытуемой субстанции помещают в пробирку с внутренним диаметром 15 мм и прибавляют 10 мл воды. Выдерживают 10 минут при комнатной температуре, затем нагревают при 60 °C в течении 15 минут и выдерживают в течение 6 ч при 0 °C. Переворачивают пробирку. Негелеобразующий желатин вытекает сразу, а гелеобразующий желатин удерживается в пробирке.

Посторонний запах. 10 г субстанции растворяют в 100 мл горячей воды. Сразу после приготовления не должно быть гнилостного запаха.

pH. От 3,8 до 7,6 (1% раствор при температуре 55 °C, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Электропроводность. Не более 1 мСм·см^-1 (1% раствор при температуре 30 +/- 1,0 °C, ОФС "Электропроводность", без использования температурного компенсатора).

Серы диоксид. Не более 0,005% (50 ppm). Определение проводят методом титриметрии.

В круглодонную колбу вместимостью 1 л помещают 50 г субстанции, прибавляют 250 мл воды и выдерживают в течение 15 мин для набухания. Прибавляют еще 250 мл воды, 25 мл фосфорной кислоты и подвергают смесь перегонке с водяным паром. Отгон собирают в приемник со 150 мл воды. Перегонку проводят в течение 1 ч, регулируя струю водяного пара таким образом, чтобы получилось около 400 мл отгона.

К отгону прибавляют 1,0 мл 0,1% раствора крахмала и титруют 0,05 М раствором йода до синего окрашивания.

1 мл 0,05 М раствора йода соответствует 3,203 мг серы диоксида SO₂.

Пероксиды. Не более 0,001% (10 ppm). Определение проводят с использованием пероксидных тест-полосок. Используют готовые полоски с соответствующей шкалой от 0 до 25 ppm.

Органический окислительно-восстановительный индикатор тест-полоски при окислении приобретает синее окрашивание. Интенсивность окраски пропорциональна количеству пероксида и для определения его концентрации может сравниваться с цветовой шкалой, прилагаемой к тест-полоскам.

Пригодность испытания. Погружают тест-полоску на 1 с в эталонный раствор водорода пероксида (10 ppm H₂O₂). Вынимают тест-полоску, стряхивают избыток жидкости и через 15 с сравнивают с цветовой шкалой. Цвет тест-полоски должен соответствовать концентрации 10 ppm. В противном случае испытание является недействительным.

Испытание. 20,0 +/- 0,1 г испытуемой субстанции помещают в химический стакан и прибавляют 80,0 +/- 0,2 мл воды, свободной от углерода диоксида. Перемешивают до полного увлажнения желатина и выдерживают образец при комнатной температуре в течение 1 - 3 ч. Накрывают стакан часовым стеклом. Помещают стакан в водяную баню с температурой 65 +/- 2 °C на 20 +/- 5 мин для растворения образца. Перемешивают содержимое стакана стеклянной палочкой до получения однородного раствора. Погружают тест-полоску на 1 с в испытуемый раствор. Вынимают тест-полоску, стряхивают избыток жидкости и через 15 с сравнивают с цветовой шкалой. Для расчета содержания пероксида в испытуемом образце в ppm концентрацию, определенную по цветовой шкале, умножают на 5.

Прочность геля (число Блюм). От 80% до 120% от заявленного. Сила (прочность) студня выражается в массе в граммах, необходимой для такой силы, которая при приложении на плунжер диаметром 12,7 мм дает погружение 4 мм в студень с концентрацией 6,67% (м/м), выдержанный при 10 °C.

Оборудование. Текстурный анализатор, или желометр с цилиндрическим плунжером диаметром 12,7 +/- 0,1 мм с ровной напорной поверхностью с круглыми краями и колбой с внутренним диаметром 59 +/- 1 мм и высотой 85 мм. Прибор регулируют в соответствии с инструкцией к прибору.

Параметры настройки: расстояние 4 мм, скорость 0,5 мм/с.

Методика. По 7,5 г испытуемого образца помещают в каждую колбу. Добавляют 105 мл воды. Каждую колбу накрывают часовым стеклом и оставляют на 1 - 4 ч. Нагревают на водяной бане в течение 15 мин при температуре 65 +/- 2 °C, помешивая стеклянной палочкой. Полученный раствор должен быть однородным, капли конденсата должны отсутствовать. Раствор охлаждают при комнатной температуре в течение 15 мин и переносят в термостат с температурой 10,0 +/- 0,1 °C и горизонтальной платформой для колб. Закрывают колбы резиновыми пробками и оставляют на 17 +/- 1 ч. Затем сосуды вынимают из термостата и быстро протирают насухо. Последовательно устанавливают сосуды на платформу прибора, настроив так, чтобы плунжер соприкасался с поверхностью студня без усилий. Проводят измерение. За результат принимают среднее значение двух измерений.

Железо. Не более 0,003% (30 ppm). Определение проводят методом атомно-абсорбционной спектрометрии с пламенной атомизацией при длине волны 248,3 нм.

Испытуемый раствор. 5,00 г субстанции помещают в коническую колбу, прибавляют 10 мл хлористоводородной кислоты концентрированной. Закрывают колбу и нагревают на водяной бане при температуре от 75 °C до 80 °С в течение 2 ч, охлаждают и доводят содержимое колбы до 100,0 г водой, свободной от диоксида углерода.

Стандартный раствор (8 ppm). 8 мл стандартного образца железа 1 г/л в 0,5 М азотной кислоте помещают в мерную колбу вместимостью 1 л и доводят объем раствора водой до метки. Допускается использование коммерческих стандартов.

Хром. Не более 0,001% (10 ppm). Определение проводят методом атомно-абсорбционной спектрометрии с пламенной атомизацией при длине волны 357,9 нм.

Испытуемый раствор. Готовят, как описано в испытании на железо.

Стандартный раствор (100 ppm Cr). 0,283 г K₂Cr₂O₇, помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяют в 0,5 М растворе азотной кислоты и доводят объем тем же растворителем до метки. Допускается использование коммерческих стандартов.

Цинк. Не более 0,003 (30 ppm). Определение проводят методом атомно-абсорбционной спектрометрии с пламенной атомизацией при длине волны 213,9 нм.

Испытуемый раствор. Готовят, как описано в испытании на железо.

Стандартный раствор. 0,440 г цинка сульфата гептагидрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 0,5 М растворе азотной кислоты и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки. Используют свежеприготовленным. Допускается использование коммерческих стандартов.

Мышьяк. Не более 0,0001%. (1 ppm, ОФС "Мышьяк", метод 1). Для определения используют 0,5 г субстанции.

Потеря в массе при высушивании. Не более 15,0% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 1). Для определения используют около 5,0 г (точная навеска) субстанции.

Общая зола. Не более 2,0%. (ОФС "Зола общая"). Для определения используют около 1,0 г (точная навеска) субстанции.

<**> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС "Аномальная токсичность"). Тест-доза - 40 мг субстанции в 0,5 мл воды для инъекций на мышь, внутривенно со скоростью 0,1 мл/с. Срок наблюдения 48 ч.

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,7 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Хранение. В сухом месте.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

<**> Контроль по показателям качества "Аномальная токсичность" и "Бактериальные эндотоксины" проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.