"ФС.2.5.0065.18. Фармакопейная статья. Вахты трехлистной листья"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV")

Собранные после цветения и высушенные листья дикорастущего многолетнего травянистого растения вахты трехлистной - Menyanthes trifoliata L., сем. вахтовых - Menyanthaceae.

Внешние признаки. Цельное сырье. Цельные или частично измельченные, тонкие, голые тройчатые листья с остатками черешка длиной до 3 см. Отдельные листочки эллиптические или продолговато-обратнояйцевидные цельнокрайние или со слегка извилистым краем длиной 4 - 10 см, шириной 2,5 - 7 см. Листья с коричневатыми или красноватыми водяными устьицами (гидатодами), хорошо заметными под лупой.

Цвет с верхней стороны листовых пластинок зеленый или темно-зеленый, с нижней стороны зеленый или светло-зеленый; цвет черешков зеленый. Запах слабый характерный, вкус водного извлечения очень горький.

Измельченное сырье. Смесь кусочков различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм.

Цвет от светло-зеленого до темно-зеленого. Запах слабый характерный, вкус водного извлечения очень горький.

Микроскопические признаки. Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепарата листа с поверхности должны быть видны клетки верхнего эпидермиса, которые имеют многоугольную форму; клетки нижнего эпидермиса со слабоизвилистыми стенками. На обеих сторонах листа, преимущественно на нижней, имеются погруженные устьица, окруженные 4 - 7 клетками эпидермиса (аномоцитный тип). Вокруг устьиц заметна лучистая складчатость кутикулы. С нижней стороны листа под эпидермисом видна аэренхима с большими воздухоносными полостями. Клетки эпидермиса черешка прозенхимной формы. Проводящая система представлена открытыми коллатеральными пучками.

Ванилина раствор 3%. 3,0 г ванилина растворяют в 100 мл спирта 96% и осторожно по каплям добавляют 0,5 мл серной кислоты концентрированной. Раствор используют свежеприготовленным.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 1,0 г измельченного сырья помещают в колбу со шлифом, прибавляют 10 мл спирта 96% и нагревают при перемешивании на водяной бане при температуре 60 °C в течение 5 мин. Охлаждают и выпаривают при температуре 60 °C на роторном испарителе при пониженном давлении досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл спирта 96% (испытуемый раствор).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором наносят 30 мкл (0,03 мл) испытуемого раствора. Пластинку с нанесенной пробой помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 2 ч смесью растворителей: вода-спирт 96%-этилацетат (2:10:85,5), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают ванилина раствором 3%, выдерживают при температуре 100 - 105 °C в течение 10 мин и просматривают при дневном свете.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться доминирующая зона адсорбции сероватого или серовато-фиолетового цвета; допускается обнаружение других зон адсорбции синего цвета, серовато-синего цвета, коричневого цвета (иридоиды).

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 14%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 10%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2%.

Измельченность сырья. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, - не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, - не более 5%.

Листья, изменившие окраску (пожелтевшие, потемневшие и почерневшие). Цельное сырье - не более 5%.

Кусочки листьев, изменивших окраску (потемневшие и почерневшие). Измельченное сырье - не более 5%.

Листьев с черешками длиннее 3 см. Цельное сырье - не более 8%.

Отдельных черешков. Цельное сырье - не более 3%.

Органическая примесь. Цельное сырье - не более 1%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье: суммы флавонолов в пересчете на рутин - не менее 1%.

Раствор стандартного образца (СО) рутина. Около 0,1 г (точная навеска) СО рутина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в спирте 70%, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора 1 мес.

5,0 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в пакет из фильтровальной бумаги и экстрагируют хлороформом в аппарате Сокслета в течение 14 ч до обесцвечивания (20 сливов). Пакет сушат на воздухе до удаления следов хлороформа. Навеску количественно переносят в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл спирта 70% и нагревают с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Извлечение фильтруют в колбу вместимостью 50 мл, избегая попадания частиц сырья на фильтр. Экстракцию в указанных выше условиях повторяют дважды порциями по 10 мл спирта 70%. Полученные извлечения объединяют, упаривают на водяной бане при температуре 70 °C на роторном испарителе при пониженном давлении до объема 6 - 7 мл, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (испытуемый раствор А).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл стрептоцида раствора 0,5% в серной кислоты растворе 10%, прибавляют 2 мл натрия нитрита раствора 0,2%, перемешивают в течение 2 мин, прибавляют 1,0 мл раствора А и 1 мл натрия гидроксида раствора 10%, перемешивают в течение 1 мин, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (испытуемый раствор Б).

Через 15 мин измеряют оптическую плотность испытуемого раствора Б на спектрофотометре при длине волны 432 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения. В качестве раствора сравнения используют испытуемый раствор А, разбавленный спиртом 96% в 25 раз (без добавления реактивов).

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО рутина, полученного аналогично испытуемому раствору, на спектрофотометре при длине волны 432 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения. В качестве раствора сравнения используют раствор СО рутина, разбавленный спиртом 96% в 25 раз (без добавления реактивов).

Содержание суммы флавонолов в пересчете на рутин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где А - оптическая плотность испытуемого раствора Б;

А_о - оптическая плотность раствора СО рутина;

а_о - навеска СО рутина, г;

а - навеска сырья, г;

Р - содержание основного вещества в СО рутина, %;

W - влажность сырья, %.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".