"ФС.2.5.0083.18. Фармакопейная статья. Марены корневища и корни"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV")

Собранные весной в начале вегетации или осенью в период плодоношения, тщательно очищенные от земли и высушенные корневища и корни дикорастущих и культивируемых многолетних травянистых растений марены красильной - Rubia tinctorum L. и марены грузинской - Rubia iberica (Fish. ex DC). C. Koch, сем. мареновых - Rubiaceae.

Внешние признаки. Цельное сырье. Корневища и корни продольно-морщинистые, цилиндрические, различной длины, толщиной 2 - 18 мм, обычно с отслаивающейся шелушащейся пробкой. У корневищ в центре обычно имеется полость.

Цвет корневищ и корней снаружи красновато-коричневый, на изломе видна красновато-коричневая кора и оранжево-красная древесина. Запах слабый, характерный. Вкус водного извлечения сладковатый, затем слегка вяжущий и горький.

Измельченное сырье. Смесь кусочков корневищ и корней различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет красновато-коричневый, оранжево-красный. Запах слабый, характерный. Вкус водного извлечения сладковатый, затем слегка вяжущий и горький.

Микроскопические признаки. Цельное сырье. На поперечном срезе корня или корневища должны быть видны несколько слоев клеток пробки представленных прямоугольными клетками с очень тонкими стенками. Наружные слои клеток пробки полуразрушены и отслаиваются. Сердцевинные лучи не выражены. Кора состоит из тонкостенных клеток, клетки лубяной паренхимы располагаются радиальными рядами. В клетках паренхимы встречаются рафиды оксалата кальция. Линия камбия узкая. Древесина имеет извилистый контур. Сосуды лежат небольшими группами. В полости сосудов часто встречаются тиллы. Паренхимные клетки древесины утолщены и одревесневшие, расположены радиальными рядами.

В корневище центральная часть занята сердцевиной, состоящей из крупных овальных клеток с утолщенными оболочками, пронизанными овальными порами, иногда сердцевина частично разрушена. Изредка в клетках сердцевины встречаются рафиды оксалата кальция.

Измельченное сырье. При рассмотрении "давленого" микропрепарата должны быть видны фрагменты пробковой ткани, состоящей из многоугольных или прямоугольных клеток, фрагменты сетчатых сосудов, фрагменты паренхимных клеток с рафидами оксалата кальция, одиночные игольчатые кристаллы.

Люминесцентная микроскопия. При рассмотрении поперечного среза корня (без включающей жидкости) в УФ-свете должна быть видна тусклая, почти черная пробка. Кора должна иметь интенсивное желтовато-оранжевое или красновато-оранжевое свечение (антраценпроизводные). Оболочки древесных сосудов и трахеид яркие зеленовато-голубые, содержимое клеток древесной паренхимы желтовато-оранжевое или красновато-оранжевое. В отдельных сосудах, на месте тиллов, встречаются сростки кристаллов с очень яркой желтовато-оранжевой или красновато-оранжевой люминесценцией (руберитриновая кислота).

В корневище сердцевина имеет такое же свечение, как и кора.

Раствор магния ацетат спиртового 2%. 2 г магния ацетата растворяют в спирте 96% в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают. Срок годности раствора 1 месяц.

0,2 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,25 мм, помещают в плоскодонную колбу вместимостью 50 мл и прибавляют 20 мл воды. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры, прибавляют 1 мл уксусной кислоты ледяной, перемешивают. 5 мл полученного раствора помещают в делительную воронку вместимостью 50 мл прибавляют 5 мл хлороформа и взбалтывают в течение 1 мин. После разделения слоев хлороформное извлечение (нижний слой) сливают в колбу вместимостью 30 мл. Извлечение хлороформом повторяют еще два раза порциями по 5 мл. К объединенному хлороформному извлечению прибавляют 10 мл натрия гидроксида раствора 10% и встряхивают в течение 1 мин; должно наблюдаться фиолетовое или фиолетово-красное окрашивание верхнего слоя (свободные антрахиноны).

Оставшийся водный слой после извлечения хлороформом (3 раза по 5 мл) фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).

На линию старта хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором наносят в виде полосы длиной 10 мм и шириной не более 2 см 15 мкл (0,015 мл) испытуемого раствора. Пластинку с нанесенной пробой сушат при температуре около 100 °C в течение 7 мин и помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 30 мин смесью растворителей спирт 96%-хлороформ-толуол-уксусная кислота ледяная (15:15:10:10), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта ее вынимают из камеры, сушат при температуре около 100 °C в течение 3 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме испытуемого раствора в нижней половине должны обнаруживаться 2 зоны адсорбции с флуоресценцией оранжевого цвета (антраценпроизводные); допускается обнаружение других зон адсорбции.

Затем пластинку опрыскивают магния ацетата раствором спиртовым 2% и выдерживают при температуре 100 °C в течение 3 мин и просматривают в УФ-свете при 365 нм.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией желтого цвета (нижняя из двух зон адсорбции с флуоресценцией оранжевого цвета); допускается обнаружение других зон адсорбции.

При взаимодействии эфирных извлечений с раствором натрия гидроксида 30% и щелочно-аммиачным раствором (раздел "Количественное определение") должно наблюдаться красно-фиолетовое окрашивание (антраценпроизводные).

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 13%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 10%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 4%.

Измельченность сырья. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, - не более 5%; измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,25 мм, - не более 5%.

Других частей растения (стеблей, листьев и др.). Цельное сырье - не более 1,5%.

Органической примеси. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1%.

Минеральной примеси. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Связанные производные антрацена. Цельное сырье, измельченное сырье: связанных производных антрацена - не менее 3%.

Щелочно-аммиачный раствор. 50 г натрия гидроксида растворяют при перемешивании в 870 мл воды. После охлаждения раствора прибавляют 80 мл аммиака раствора концентрированного 25% и перемешивают. Раствор годен в течение суток.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,25 мм.

Около 0,1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 200 мл, приливают 7,5 мл ледяной уксусной кислоты, 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и нагревают с обратным холодильником на кипящей водяной бане при слабом кипении в течение 15 мин; при этом колбу периодически встряхивают вращательным движением, смывая появляющийся на ее стенках осадок. Затем колбу охлаждают холодной водой и проводят экстракцию эфиром 3 раза по 30 мл при нагревании на водяной бане с обратным холодильником (температура не выше 35 °C) в течение 15 мин с момента закипания эфира. После охлаждения колбы объединенное эфирное извлечение фильтруют через вату в делительную воронку вместимостью 250 мл.

Эфирное извлечение промывают 2 раза по 20 мл воды. При непрерывном охлаждении к эфирному извлечению приливают малыми порциями сначала 15 мл натрия гидроксида раствора 30%, затем 25 мл щелочно-аммиачного раствора. Затем, не переставая охлаждать, смесь встряхивают в течение 5 мин, окрашенный раствор собирают в мерную колбу вместимостью 500 мл. Экстракцию щелочно-аммиачным раствором повторяют несколько раз до прекращения окрашивания щелочного раствора.

К объединенному извлечению прибавляют 3 капли пергидроля, тщательно перемешивают, доводят объем раствора щелочно-аммиачным раствором до метки и перемешивают. Через 10 мин измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 530 нм в кювете с толщиной слоя 5 мм, используя в качестве раствора сравнения щелочно-аммиачный раствор.

По калибровочному графику находят содержание производных антрацена в граммах в 1 мл раствора.

Содержание суммы производных антрацена в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где C - содержание свободных производных антрацена в 1 мл раствора, найденное по калибровочному графику, в граммах;

a - навеска сырья в граммах;

W - влажность сырья в процентах.

Около 0,1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 300 мл, прибавляют 50 мл эфира и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 10 мин с момента закипания эфира. Экстракцию повторяют трижды, затем колбу охлаждают и эфирные извлечения фильтруют через вату в делительную воронку вместимостью 20 мл. Воронку с эфирным извлечением охлаждают и производные антрацена извлекают 4 раза по 20 мл щелочно-аммиачным раствором, каждый раз встряхивая в течение 5 мин. Щелочной раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 каплю пергидроля, объем раствора доводят щелочно-аммиачным раствором до метки и перемешивают.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора как указано при определении суммы производных антрацена ("1").

Содержание свободных производных антрацена в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (X₁) вычисляют по формуле:

где C - содержание свободных производных антрацена в 1 мл раствора, найденное по калибровочному графику, в граммах;

a - навеска сырья, в граммах;

W - влажность сырья, в процентах.

Содержание связанных производных антрацена в пересчете на абсолютно сухое сырье (в процентах X₂) вычисляют по формуле:

Построение калибровочного графика. 50 г кобальта хлорида (CoCl₂·6H₂O), высушенного до постоянной массы, помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл, растворяют в 250 мл воды, прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты 25%, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Полученный раствор является исходным (N 10). Из этого раствора готовят серию разбавленных растворов (N 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9), содержащих кобальта хлорида соответственно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 и 90 мг в 1 мл, и измеряют их оптические плотности на спектрофотометре при длине волны 530 нм. Для построения калибровочного графика на оси абсцисс откладывают концентрацию растворов, а на оси ординат - их оптическую плотность.

При этом концентрации растворов кобальта хлорида выражают в соответствующих концентрациях свободных производных антрацена, пользуясь таблицей.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья".

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".