"ФС.2.6.0005.18. Фармакопейная статья. Анемоне немороза. Настойка гомеопатическая матричная"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV")

Настоящая фармакопейная статья распространяется на Анемоне немороза - Anemone nemorosa настойку гомеопатическую матричную, получаемую из свежей травы ветреницы дубравной - Anemone nemorosa L., сем. лютиковых - Ranunculaceae, применяемую для производства/изготовления гомеопатических лекарственных препаратов.

Получение настойки гомеопатической матричной осуществляется по способу 3б ОФС "Настойки гомеопатические матричные".

Жидкость зеленовато-желтого цвета, со слабым своеобразным запахом, однородная по внешнему виду.

Ванилина раствор 0,35% в серной кислоте. 0,16 г ванилина растворяют в смеси 16 мл воды и 30 мл серной кислоты концентрированной. Раствор используется свежеприготовленным.

Нингидрина раствор 1% в ацетоне. 1,0 г нингидрина растворяют в 100 мл ацетона. Срок годности раствора 60 сут.

а) На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят 10 мкл настойки. Пластинку с нанесенной пробой помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 30 мин смесью растворителей ацетон - гексан (1:2) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин, затем пластинку обрабатывают ванилина раствором 0,35% в серной кислоте и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100 - 105 °C в течение 5 мин.

На хроматограмме настойки должна обнаруживаться зона адсорбции красно-коричневого цвета (терпеноиды).

б) На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят 10 мкл настойки. Пластинку с нанесенной пробой помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 30 мин смесью растворителей спирт н-бутиловый - уксусная кислота ледяная - вода (4:1:5) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин, затем пластинку обрабатывают нингидрина раствором 1% в ацетоне и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 105 °C в течение 5 мин.

На хроматограмме настойки должны обнаруживаться 5 зон адсорбции розового или фиолетового цвета (аминокислоты).

2. К 3 - 5 мл настойки добавляют 3 - 5 капель реактива Фолина-Дениса и небольшое количество натрия карбоната безводного, перемешивают; должно наблюдаться фиолетово-синее окрашивание (дубильные вещества).

3. К 0,5 мл настойки прибавляют 10 мл воды и интенсивно встряхивают, образуется устойчивая пена (сапонины).

Сухой остаток. Не менее 0,3% (ОФС "Настойки").

Плотность. От 0,870 до 0,889 (ОФС "Плотность").

Тяжелые металлы. Не более 0,001% (ОФС "Настойки").

<*> Метанол и 2-пропанол. Не более 0,05% метанола и не более 0,05% 2-пропанола. В соответствии с требованиями ОФС "Определение метанола и 2-пропанола".

--------------------------------

<*> Контролируется в течение технологического процесса.

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Содержание суммы терпеноидов в пересчете на валтрат в настойке должно быть не менее 2,0%.

Приготовление смеси уксусной кислоты ледяной и хлористоводородной кислоты концентрированной. К 36 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, отмеренной цилиндром, приливают 25 мл уксусной кислоты ледяной и встряхивают в течение 1 мин. Раствор используют свежеприготовленным.

Около 10,0 г (точная навеска) настойки помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавляют 200 мл хлороформа, взбалтывают в течение 5 мин и фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 250 мл. Остаток на фильтре промывают два раза хлороформом по 20 мл. Отделяют хлороформную вытяжку и доводят объем раствора в колбе хлороформом до метки и перемешивают. 50 мл полученного хлороформного извлечения переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 мл и выпаривают при температуре не выше 45 °C под вакуумом досуха. Сухой остаток растворяют в 50 мл смеси уксусной кислоты ледяной и хлористоводородной кислоты концентрированной, встряхивают в течение 20 мин и отстаивают 18 часов, после чего содержимое колбы фильтруют через стеклянный фильтр (ПОР 160).

Оптическую плотность полученного фильтрата измеряют на спектрофотометре при длине волны 595 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь уксусной кислоты ледяной и хлористоводородной кислоты концентрированной.

Содержание суммы терпеноидов в пересчете на валтрат в процентах (X) вычисляют по формуле, используя калибровочный график:

где C - содержание суммы терпеноидов в 1 мл испытуемого раствора, найденное по калибровочному графику, мг;

a - навеска испытуемой настойки, г.

Около 32,42 мг (точная навеска) 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, предварительно высушенного в течение 2 час при температуре 60 °C, растворяют в 2 мл фосфатного буферного раствора pH 8 - 9, тщательно растирая стеклянной палочкой. Затем раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл с помощью фосфатного буферного раствора pH 8 - 9 и доводят до метки этим же буфером (раствор А).

1 мл раствора А содержит 0,1297 мг 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, что соответствует 0,5 мг валтрата.

Из раствора А мерной колбой готовят растворы, разбавленные фосфатным буфером pH 8 - 9 в 2, 4, 8 раз, что соответствует содержанию валтрата 0,25; 0,125; 0,0625 мг в 1 мл.

Оптическую плотность полученных растворов измеряют на спектрофотометре при длине волны 595 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм. Калибровочный график строят, откладывая по оси абсцисс показатели содержания валтрата (мг в 1 мл), а на оси ординат - соответствующие величины оптической плотности.

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Настойки гомеопатические матричные".