"ФС.3.1.0007.18. Фармакопейная статья. Ампициллин, таблетки"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)

Настоящая фармакопейная статья распространяется на лекарственный препарат ампициллин, таблетки. Препарат должен соответствовать требованиям ОФС "Таблетки" и нижеприведенным требованиям.

Содержит количество ампициллина (ампициллина безводного или ампициллина тригидрата), эквивалентное не менее 90,0% и не более 110,0% от заявленного количества ампициллина C₁₆H₁₉N₃O₄S.

Описание. Содержание раздела приводится в соответствии с требованиями ОФС "Таблетки".

1. Спектрофотометрия. Спектры поглощения испытуемого и стандартного растворов в области длин волн от 230 до 350 нм должны иметь максимум при одной и той же длине волны (испытание "Количественное определение").

2. Тонкослойная хроматография (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля силанизированного.

Подвижная фаза (ПФ). Пиридин-вода-хлороформ-метанол 1:30:80:90.

Испытуемый раствор. Навеску порошка растертых таблеток, эквивалентную 20,0 мг ампициллина, встряхивают с 5,0 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М и фильтруют.

Раствор сравнения А. Около 20,0 мг стандартного образца ампициллина тригидрата растворяют в 5,0 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М.

Раствор сравнения Б. Около 20,0 мг стандартного образца амоксициллина тригидрата и около 20,0 мг стандартного образца ампициллина тригидрата растворяют в 5,0 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М.

На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (4 мкг), раствора сравнения А (4 мкг) и раствора сравнения Б (по 4 мкг стандартных образцов амоксициллина тригидрата и ампициллина тригидрата). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт подвижной фазы пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и опрыскивают 0,2% раствором нингидрина, нагревают при температуре 130 °C в течение 10 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения Б должны наблюдаться две четко разделенные зоны адсорбции.

Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и интенсивности окраски должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора сравнения А.

Растворение. Определение проводят в соответствии с ОФС "Растворение для твердых дозированных лекарственных форм" методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Раствор меди(II) сульфата. В мерную колбу вместимостью 1 л помещают 3,93 г меди(II) сульфата, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Буферный раствор pH 5,2. Смешивают 464 мл лимонной кислоты раствора 0,1 М с 536 мл динатрия гидрофосфата раствора 0,2 М. pH полученного раствора 5,2 +/- 0,05.

Буферный раствор меди(II) сульфата. В мерную колбу вместимостью 1 л помещают 15 мл раствора меди(II) сульфата и доводят объем раствора буферным раствором pH 5,2 до метки.

Испытуемый раствор. Каждую корзинку, в которую помещена одна таблетка, помещают в сосуд для растворения с предварительно нагретой средой растворения. Через 45 мин отбирают пробу раствора и фильтруют, отбрасывая первые порции фильтрата. Полученный раствор разводят буферным раствором меди(II) сульфата до концентрации ампициллина около 0,025 мг/мл. 25 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, плотно закрывают и нагревают на водяной бане при температуре 80 +/- 2 °C в течение 30 мин. Затем быстро охлаждают до комнатной температуры и при необходимости доводят объем раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца ампициллина. Около 50 мг (точная навеска) стандартного образца ампициллина безводного помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора буферным раствором меди(II) сульфата до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мл полученного раствора, плотно закрывают и нагревают на водяной бане при температуре 80 +/- 2 °C в течение 30 мин. Затем быстро охлаждают до комнатной температуры и при необходимости доводят объем раствора водой до метки.

Раствор сравнения. Среда растворения.

Измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 320 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.

Количество ампициллина, перешедшее в раствор, в процентах (X) вычисляют по формуле:

где A₁ - оптическая плотность испытуемого раствора;

A₀ - оптическая плотность раствора стандартного образца ампициллина;

a₀ - навеска стандартного образца ампициллина безводного, мг;

P - содержание ампициллина в стандартном образце ампициллина безводного, %;

L - заявленное количество ампициллина в одной таблетке, мг;

F - фактор разведения испытуемого раствора.

Через 45 мин в раствор должно перейти не менее 75% (Q) ампициллина C₁₆H₁₉N₃O₄S.

Светопоглощающие примеси. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Испытуемый раствор. Точную навеску порошка растертых таблеток, содержащую около 0,15 г ампициллина, количественно помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. Полученный раствор фильтруют, отбрасывая первые порции фильтрата.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 322 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Измерение оптической плотности проводят сразу же после приготовления растворов.

Оптическая плотность должна быть не более 0,2.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Испытуемый раствор и растворы сравнения используют свежеприготовленными или хранят при температуре 4 °C не более суток.

Подвижная фаза А (ПФА). В мерную колбу вместимостью 1 л помещают 0,5 мл уксусной кислоты раствора 2 М, 50 мл калия дигидрофосфата раствора 0,2 М, 50 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). В мерную колбу вместимостью 1 л помещают 0,5 мл уксусной кислоты раствора 2 М, 50 мл калия дигидрофосфата раствора 0,2 М, 400 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. Навеску порошка растертых таблеток, эквивалентную около 31 мг ампициллина, помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, прибавляют 5 мл ПФА, доводят объем тем же растворителем до метки и фильтруют.

Раствор сравнения А. Около 27,0 мг (точная навеска) стандартного образца ампициллина безводного помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ПФА и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения Б. 1,0 мл раствора сравнения А помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл и доводят объем раствора ПФА до метки.

Раствор сравнения В. Навеску порошка растертых таблеток, эквивалентную 0,2 г ампициллина, смешивают с 1 мл воды. Нагревают раствор при 60 °C в течение 1 ч и охлаждают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора ПФА до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. 2 мг стандартного образца цефрадина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ПФА и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. 5 мл полученного раствора смешивают с 5 мл раствора сравнения А.

Примечание.

Цефрадин: (6R,7R)-7-[(2R)-2-амино-2-(циклогекса-1,4-диен-1-ил) ацетамидо]-3-метил-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2-карбоновая кислота, CAS 66592-87-8.

Хроматографируют раствор сравнения Б и испытуемый раствор в изократическом режиме до элюирования пика ампициллина. Хроматографируют ПФА и проводят тот же цикл для получения хроматограммы нулевой линии.

Хроматографируют раствор сравнения В и цикл повторяют.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей используют хроматограмму раствора сравнения В, на которой должны наблюдаться пики ампициллина и димера ампициллина.

Относительное время удерживания соединений. Ампициллин - 1, димер ампициллина - около 2,8.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R) между пиками ампициллина и цефрадина должно быть не менее 3,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика димера ампициллина не должна быть более 4,5-кратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 4,5%);

- площадь любого пика, за исключением основного пика, не должна быть более двукратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 2,0%);

- суммарная площадь пиков примесей не должна быть более пятикратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 5,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,1 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения Б (менее 0,1%).

Вода. Не менее 10,0% и не более 15,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют около 0,1 г препарата.

Однородность дозирования. Определение проводят в соответствии с ОФС "Однородность дозирования", способ 2 или методом спектрофотометрии, способ 1 в условиях испытания "Растворение".

Испытуемый раствор. Одну таблетку помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, прибавляют 2 мл спирта 96%, встряхивают в течение 2 мин, прибавляют 100 мл воды и энергично встряхивают в течение 10 мин. Доводят объем раствора водой до метки и фильтруют, отбрасывая первые порции фильтрата. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 мл фильтрата и доводят объем раствора средой растворения до метки. При необходимости полученный раствор разводят средой растворения до концентрации ампициллина около 25 мкг/мл.

Содержание ампициллина C₁₆H₁₉N₃O₄S в одной таблетке в процентах (X) от заявленного количества вычисляют по формуле:

где A₁ - оптическая плотность испытуемого раствора;

A₀ - оптическая плотность раствора стандартного образца ампициллина;

a₀ - навеска стандартного образца ампициллина безводного, мг;

P - содержание ампициллина в стандартном образце ампициллина безводного, %;

F - фактор разведения испытуемого раствора;

L - заявленное количество ампициллина в одной таблетке, мг.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Определение проводят методом спектрофотометрии в условиях испытания "Растворение".

Испытуемый раствор. Взвешивают 10 таблеток и определяют среднюю массу таблетки (ОФС "Лекарственные формы"). Точную навеску порошка растертых таблеток, эквивалентную около 50 мг ампициллина, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 70 мл воды, встряхивают в течение 30 мин, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и фильтруют, отбрасывая первые порции фильтрата. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора буферным раствором меди(II) сульфата до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мл полученного раствора, плотно закрывают и нагревают на водяной бане при температуре 80 +/- 2 °C в течение 30 мин. Затем быстро охлаждают до комнатной температуры и при необходимости доводят объем раствора водой до метки.

Содержание ампициллина C₁₆H₁₉N₃O₄S в процентах от заявленного количества (X) вычисляют по формуле:

где A₁ - оптическая плотность испытуемого раствора;

A₀ - оптическая плотность раствора стандартного образца ампициллина;

a₁ - навеска порошка таблеток, мг;

a₀ - навеска стандартного образца ампициллина безводного, мг;

P - содержание ампициллина в стандартном образце ампициллина безводного, %;

G - средняя масса одной таблетки, мг;

L - заявленное количество ампициллина в одной таблетке, мг.

Хранение. В защищенном от света месте.