"ФС.3.1.0006.18. Фармакопейная статья. Ампициллин натрия, порошок для приготовления раствора для внутривенного и внутримышечного введения"

Настоящая фармакопейная статья распространяется на лекарственный препарат ампициллин натрия, порошок для приготовления раствора для внутривенного и внутримышечного введения. Препарат должен соответствовать требованиям ОФС "Порошки", ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения" и нижеприведенным требованиям.

Содержит не менее 90,0% и не более 110,0% от заявленного количества ампициллина C₁₆H₁₉N₃O₄S.

Описание. Пористая масса белого цвета.

<*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

1. ВЭЖХ. Время удерживания пика основного вещества на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика ампициллина на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина (раздел "Количественное определение").

2. Тонкослойная хроматография (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля силанизированного на стеклянной подложке.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол-хлороформ-вода-пиридин 90:80:30:1.

Испытуемый раствор. Навеску порошка, соответствующую 20 мг ампициллина, растворяют в 5 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М.

Раствор стандартного образца ампициллина. В 5 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М растворяют 20 мг стандартного образца ампициллина тригидрата.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В 5 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М растворяют 20 мг стандартного образца амоксициллина тригидрата и 20 мг стандартного образца ампициллина тригидрата.

На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (4 мкг), раствора стандартного образца ампициллина (4 мкг) и раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (по 4 мкг стандартных образцов амоксициллина тригидрата и ампициллина тригидрата). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают нингидрина раствором 0,2% и выдерживают в течение 10 мин при температуре 130 °C.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы должны наблюдаться две четко разделенных зоны адсорбции.

Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и интенсивности окраски должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина.

3. Качественная реакция. Препарат должен давать характерную реакцию А или Б на натрий (ОФС "Общие реакции на подлинность").

Прозрачность раствора. Опалесценция испытуемого раствора А и испытуемого раствора Б не должна превышать эталон сравнения II (ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей").

Испытуемый раствор А. В 10 мл воды для инъекций растворяют 1 г препарата.

Испытуемый раствор Б. В 10 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М растворяют 1 г препарата.

Цветность раствора. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Испытуемый раствор. В 10 мл воды для инъекций растворяют 1 г препарата.

Раствор сравнения. Вода для инъекций.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 430 +/- 1 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.

Оптическая плотность испытуемого раствора не должна превышать 0,15.

pH. От 8,0 до 10,0 (10% водный раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Время растворения. Не более 2 мин (ОФС "Время растворения").

К содержимому флакона прибавляют указанное в прилагаемой инструкции по медицинскому применению препарата количество растворителя и непрерывно встряхивают до полного растворения. Визуально определяют время, за которое произошло полное растворение содержимого флакона.

Светопоглощающие примеси. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Испытуемый раствор. Около 10 мг (точная навеска) препарата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 70 мл воды для инъекций, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и фильтруют.

Раствор сравнения. Вода для инъекций.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 325 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.

Оптическая плотность испытуемого раствора не должна превышать 0,3.

Механические включения. Видимые. В соответствии с ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах".

Невидимые. В соответствии с ОФС "Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения".

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы используют свежеприготовленными или хранят при температуре 4 °C не более суток.

Подвижная фаза А (ПФА). В мерную колбу вместимостью 1 л помещают 0,5 мл уксусной кислоты раствора 2 М, 50 мл калия дигидрофосфата раствора 0,2 М, 50 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). В мерную колбу вместимостью 1 л помещают 0,5 мл уксусной кислоты раствора 2 М, 50 мл калия дигидрофосфата раствора 0,2 М, 400 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают навеску порошка, соответствующую 30 мг ампициллина, растворяют в ПФА и доводят объем тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца ампициллина (А). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 30 мг стандартного образца ампициллина безводного, растворяют в ПФА и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца ампициллина (Б). В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца ампициллина (А) и доводят объем раствора ПФА до метки.

Раствор для идентификации пиков. Навеску препарата, соответствующую 0,2 г ампициллина, растворяют в 1 мл воды. Выдерживают раствор в течение 1 ч при 60 °C и охлаждают до комнатной температуры. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФА до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2 мг стандартного образца цефрадина, растворяют в ПФА и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. К 5 мл полученного раствора прибавляют 5 мл раствора стандартного образца ампициллина (А).

Примечание.

Цефрадин: (6R,7R)-7-[(2R)-2-амино-2-(циклогекса-1,4-диен-1-ил)ацет-амидо]-3-метил-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2-карбоновая кислота, CAS 66592-87-8.

--------------------------------

t_R - время удерживания ампициллина

Хроматографируют раствор стандартного образца ампициллина (Б), раствор для идентификации пиков, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы и испытуемый раствор.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей используют хроматограмму раствора для идентификации пиков.

Относительные времена удерживания соединений. Ампициллин - 1, димер ампициллина - около 2,8.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R) между пиками ампициллина и цефрадина должно быть не менее 3,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика димера ампициллина не должна превышать 4,5-кратную площадь основного пика на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина (Б) (не более 4,5%);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать двукратную площадь основного пика на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина (Б) (не более 2,0%);

- суммарная площадь пиков всех примесей не должна превышать пятикратную площадь основного пика на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина (Б) (не более 5,0%).

Не учитывают пики с площадью менее 0,1 площади основного пика на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина (Б) (менее 0,1%).

Однородность дозирования. Определение проводят в соответствии с ОФС "Однородность дозирования".

Вода. Не более 2,0% (ОФС "Определение воды", метод 1).

Бактериальные эндотоксины. Не более 0,1 ЕЭ на 1 мг ампициллина (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным (ОФС "Аномальная токсичность"). Тест-доза - 40 мг ампициллина в 0,5 мл воды для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения 48 ч.

Стерильность. Препарат должен быть стерильным (ОФС "Стерильность").

Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Подвижная фаза (ПФ). ПФА-ПФБ 85:15.

Испытуемый раствор. Точную навеску порошка, соответствующую около 30 мг ампициллина безводного, помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл ПФА, доводят объем тем же растворителем до метки и фильтруют.

Раствор стандартного образца ампициллина. Около 30 мг (точная навеска) стандартного образца ампициллина безводного помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ПФА и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор стандартного образца ампициллина.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина относительное стандартное отклонение площади пика ампициллина должно быть не более 1,0% (6 определений).

Содержание ампициллина C₁₆H₁₉N₃O₄S в одном флаконе в процентах от заявленного количества (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика ампициллина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика ампициллина на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина;

a₁ - навеска препарата, мг;

a₀ - навеска стандартного образца ампициллина безводного, мг;

P - содержание ампициллина в стандартном образце ампициллина безводного, %;

G - средняя масса содержимого одного флакона, мг;

L - заявленное количество ампициллина в одном флаконе, мг.

Хранение. В защищенном от света месте.