"ОФС.1.7.2.0038.18. Общая фармакопейная статья. Определение содержания тритона X-100 методом обращенно-фазовой ВЭЖХ"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II")

Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения содержания тритона X-100 в биологических лекарственных препаратах методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Тритон X-100 (4-(1,1,3,3-тетраметилбутил) фенил-полиэтиленгликоль) - неионное поверхностно-активное вещество, используется в качестве детергента в процессах инактивации вирусов с липидными оболочками биологических лекарственных препаратов.

Принцип метода обращенно-фазовой ВЭЖХ заключается в распределении компонентов исследуемого образца между полярным элюентом и неполярными группами на поверхности сорбента хроматографической колонки. Основные положения метода обращенно-фазовой ВЭЖХ изложены в ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография".

Для проведения хроматографии используют колонку с сорбентом C₁₈.

В качестве подвижной фазы применяют смесь ацетонитрил (или метанол): вода с использованием градиента концентраций или при разделении в изократическом режиме разделения.

Анализ проводят с использованием ультрафиолетового детектора. Выбор длины волны (223 нм или 280 нм) зависит от состава препарата.

Для исключения влияния системных пиков на результаты анализа, хроматографии подвергают растворы подвижной фазы и плацебо.

Условия проведения анализа (тип колонки, состав подвижной фазы, вид элюирования, учет и интерпретация результатов) должны быть указаны в нормативной документации.

Оценку пригодности хроматографической системы проводят по хроматограммам стандартного раствора.

Если в нормативной документации не указано иное, должны выполняться следующие требования пригодности хроматографической системы:

- величина фактора асимметрии пика тритона X-100 должна находиться в пределах от 0,8 до 1,5;

- относительное стандартное отклонение площади пика тритона X-100 не должно превышать 2,0%;

- время удерживания пика тритона X-100 на хроматограмме стандартного раствора должно соответствовать времени удерживания соответствующего пика на хроматограмме стандартного раствора.

Содержание тритона X-100 в препарате должно быть не более 3 мг/мл.

Примечания

Испытуемый раствор. Испытуемый образец разводят по методике, указанной в нормативной документации. Степень разведения испытуемого раствора зависит от исходного содержания тритона X-100 и условий проведения анализа. В качестве растворителя используют воду очищенную или подвижную фазу.

Стандартный раствор. В качестве стандартного раствора используют соответствующие стандартные образцы тритона X-100, разведенные до необходимой концентрации тем же растворителем, что и испытуемый раствор.

Контрольный раствор. Используют серию препарата с известным содержанием тритона X-100. Процедура разведения должна быть аналогична процедуре, предусмотренной для испытуемого раствора, и указана в нормативной документации.