Фармакопейная статья "Вакцина чумная живая, таблетки для рассасывания. ФС.3.3.1.0021.15"
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том III")

Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину чумную живую, таблетки для рассасывания, представляющую собой лиофилизированную живую культуру вакцинного штамма чумного микроба Yersinia pestis EV линии НИИЭГ. Вакцина предназначена для профилактики чумы и вызывает развитие специфического иммунитета длительностью до 1 года.

Все этапы производства вакцины должны гарантировать соблюдение установленных надлежащих правил, а также качество лекарственного препарата, гарантирующее его безопасность для человека.

Вакцинный штамм Y. pestis EV линии НИИЭГ должен обладать типичными морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами; содержать плазмиды pFra, пестициногенности (pPst) и кальций зависимости (pCad) с молекулярными массами 60, и MDa соответственно; не должен вызывать гибели морских свинок и потери их массы при введении им дозы 15 · 10⁹ микробных клеток (м.к.). Иммуногенность штамма по величине ED₅₀ при подкожном введении не должна превышать для морских свинок 1 · 10³ м.к., для белых мышей - 1 · 10⁴ м.к.

Перед приготовлением очередной серии вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ проводят его пассаж через организм морской свинки с последующим отбором типичных колоний, выросших на чашках Петри из посевов селезенки или регионарных лимфатических узлов.

Технология изготовления вакцины предусматривает получение посевных культур Y. pestis EV линии НИИЭГ I, II и III генераций; процесса накопления биомассы, необходимой для приготовления микробной взвеси определенной концентрации; последующий розлив, замораживание, сублимационное высушивание; приготовление гранулята и таблеток; фасовку и упаковку препарата.

В зависимости от технологии приготовления вакцины в процессе производства используются вспомогательные вещества, разрешенные для использования в иммунобиологической промышленности: лактоза, декстрин, тиомочевина, аскорбиновая кислота, глюкоза, ментол, крахмал картофельный, какао-порошок, ванилин, кальция стеарат.

На стадиях приготовления посевных культур определяют pH, концентрацию микробных клеток и отсутствие посторонней микрофлоры.

Описание. Таблетка светло-коричневого цвета правильной круглой формы с цельными краями, ровной и плоской поверхностью. Имеет запах какао, ванилина и ментола. Определение проводят визуально.

Подлинность. Должна содержать чистую культуру вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ. Определение проводят иммунофлуоресцентным методом. Таблетку вакцины растирают в ступке, добавляют 49 мл 0,9% раствора натрия хлорида и тщательно перемешивают. Из полученной суспензии готовят три мазка, которые окрашивают иммуноглобулинами чумными диагностическими флуоресцирующими и просматривают под фазовоконтрастным и люминесцентным микроскопами не менее 50 полей зрения в каждом. В мазках из препарата микробные клетки должны светиться по периферии ярко-зеленым цветом. Допускается наличие не более 1 неокрашенной микробной клетки в 50 полях зрения.

Распадаемость. Таблетка должна распадаться в течение 15 мин. Определение проводят в соответствии с ОФС "Распадаемость таблеток и капсул".

Средняя масса. От 0,6 до 1,0 г. Определение проводят в соответствии с ОФС "Однородность массы дозированных лекарственных форм".

pH растворенного препарата. От 6,8 до 7,4. Таблетку растворяют в 50 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия".

Потеря в массе при высушивании. Не более 10,0%. Определение проводят гравиметрическим методом в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании". На каждый из двух параллельных анализов используют навеску из 3 измельченных таблеток.

Микробиологическая чистота. Таблетка может содержать не более 1 · 10³ микробных клеток (м.к.) бактерий непатогенных микроорганизмов.

Таблетку берут стерильным пинцетом, помещают во флакон вместимостью 100 мл, содержащий 49 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида. Флакон закрывают стерильной пробкой, устанавливают на платформу шуттель-аппарата и тщательно перемешивают до полного растворения таблетки и по 0,5 мл засевают на 5 чашек Петри с агаром Хоттингера, pH (). Посевы инкубируют при температуре () °С в течение 5 сут., после чего подсчитывают число выросших колоний.

Количество живых микробных клеток (N) непатогенных микроорганизмов в таблетке рассчитывают по формуле:

где: - суммарное количество колоний, выросших на чашках Петри;

49 - объем 0,9% раствора натрия хлорида, использованного для растворения таблетки, мл;

m - количество чашек Петри, использованных для посева; шт.;

0,5 - объем суспензии, высеваемой на 1 чашку, мл.

При обнаружении хотя бы в одной таблетке более 1 · 10³ живых м.к. испытание повторяют на удвоенном количестве таблеток. Если при повторном испытании число посторонних микроорганизмов в таблетке превышает 1x10 м.к., препарат считают не выдержавшим испытание.

Специфическая безопасность. Вакцина должна быть специфически безопасной. Испытание проводят на морской свинке массой () г.

Таблетку вакцины растирают в ступке, добавляют 49 мл 0,9% раствора натрия хлорида и тщательно перемешивают., Полученную суспензию разводят до концентрации 15 · 10⁹ м.к./мл и вводят подкожно 1 мл одной морской свинке в область внутренней поверхности бедра.

На 6-е сутки морскую свинку взвешивают, подвергают эвтаназии, отмечают патологоанатомические изменения, обнаруживаемые при вскрытии. Печень, селезенку, легкие, регионарные лимфатические узлы, кровь и ткани из места введения высевают методом отпечатков на чашку Петри с агаром Хоттингера, pH (), с добавлением натрия сернистокислого в количестве 0,25 г на 1 л среды, и чашку Петри с агаром Хоттингера, pH (), с добавлением генцианвиолета в количестве 0,05 г на 1 л среды. Посевы инкубируют при температуре () °С в течение 3 сут.

Вакцина не должна вызывать у морской свинки потери массы к 6 сут. после введения больше, чем на 20%, не должна вызывать видимых патологоанатомических изменений в легких - кровоизлияний, очагов воспаления, гранулем, абсцессов; в посевах крови и легких не должно быть роста чумного микроба. В месте введения допускается развитие кровоизлияния и инфильтрата подкожной клетчатки, переходящих в некроз. Во внутренних органах (селезенка и печень) допустимо развитие ограниченной узелковой реакции.

Специфическая активность.

1. Содержание живых микробных клеток. Таблетка должна содержать от 30 · 10⁹ до 50 · 10⁹ живых микробных клеток вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ.

При определении количества живых микробных клеток в вакцине используют концевые химически чистые пипетки, пробирки с 0,9% раствором натрия хлорида должны быть охлаждены до температуры 2 до 8 °С.

Таблетку растирают в ступке, добавляют 49 мл 0,9% раствора натрия хлорида и тщательно перемешивают. Полученную суспензию вакцины разводят в 0,9% растворе натрия хлорида последовательно десятикратно от 10^-1 до 10^-7, используя для каждого разведения отдельную пипетку. Из разведения 10^-7 высевают по 0,1 мл на 5 чашек Петри с агаром Хоттингера с добавлением стимулятора роста (кровь гемолизированная до 1% концентрации или натрий сернистокислый (0,25 г на 1 л среды).

Посевы инкубируют в течение 3 сут. при температуре () °С, затем подсчитывают общее количество колоний на 5 чашках Петри. Количество живых микробных клеток (N) в таблетке рассчитывают по формуле:

где: - суммарное количество колоний, выросших на чашках;

10⁸ - степень разведения;

49 - объем 0,9% раствора натрия хлорида, использованного для растворения таблетки, мл;

m - количество чашек Петри, используемых для посева.

2. Иммуногенность. ED₅₀ для морских свинок не должна превышать 1 · 10⁴, для белых мышей - 4 · 10⁴ живых микробных клеток.

Испытания проводят на морских свинках массой () г и на белых нелинейных мышах массой () г 3 таблетки вакцины чумной живой растирают в ступке и растворяют в 0,9% растворе натрия хлорида. Объем растворителя определяют, исходя из заранее определенного количества живых клеток в таблетке, с таким расчетом, чтобы 1 мл вакцины содержал 1 · 10⁹ живых м.к. Далее определение проводят в соответствии с методикой, изложенной в ФС "Вакцина чумная живая".

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты".

Хранение и транспортирование. При температуре от 2 до 8 °С.