Фармакопейная статья "Хмеля обыкновенного соплодия. ФС.2.5.0046.15"
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том III")

Собранные в начале созревания и высушенные соплодия многолетнего культивируемого и дикорастущего травянистого растения хмеля обыкновенного - Humulus lupulus L., сем. коноплевых - Cannabaceae.

Внешние признаки. Цельное сырье. Смесь соплодий шаровидных, овально-цилиндрических продолговатых или яйцевидных длиной от 2,5 до 5,0 см и шириной 1,5-2 см. Соплодия состоят из сидячих овальных или яйцевидных прицветных чешуи длиной 1-1,5 см, шириной 0,15-0,9 см, черепитчато-расположенных на коленчатой оси (стерженьке). Жилкование прицветных чешуи дугонервное, переходящее к верхушке в сетчатонервное. Край прицветных чешуи цельный, верхушка заостренная. У основания прицветные чешуи имеют складку, где размещается плод - округлый приплюснутый орешек коричневого или коричнево-фиолетового цвета длиной 2-3 мм, шириной 2 мм. Плод и основание прицветных чешуи покрыты мелкими блестящими смолистыми, легко отделяемыми лупулиновыми железками оранжево-желтого цвета. При рассмотрении сырья под лупой (10^x) или стереомикроскопом (16^x) заметно опушение прицветных чешуи с обеих сторон, с нижней стороны жилки выпуклые, покрыты более длинными волосками, стерженьки также опушены. Плод округлый, с гладкой, блестящей поверхностью или покрыт железками, имеет острую верхушку и 2 ребрышка по бокам. Цвет соплодий желтовато-зеленый, золотисто-зеленый, зеленовато-желтый или желтовато-коричневый, прицветные чешуи могут иметь светло-коричневые кончики. Запах специфический, ароматно-бальзамический. Вкус водного извлечения горький и жгучий.

Измельченное сырье. Смесь частиц соплодий от желтого, желтовато-зеленого, зеленого до желтовато-коричневого цвета, различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм. При рассмотрении измельченного сырья под лупой (10^x) или стереомикроскопом (16^x) видны кусочки опушенных прицветных чешуи, стерженьков, лупулиновые железки, встречающиеся иногда на прицветных чешуях, чаще - отдельно поодиночке или слипшись по несколько штук, изредка плоды. Запах специфический, ароматно-бальзамический. Вкус водного извлечения горький и жгучий.

Порошок. Смесь частиц соплодий от желтого, желтовато-зеленого, зеленого до желтовато-коричневого цвета различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. При рассмотрении порошка под лупой (10^x) или стереомикроскопом (16^x) видны кусочки опушенных прицветных чешуи и стерженьков, изредка плодов с гладкой поверхностью или покрытых железками, отдельно лупулиновые железки, одиночные или слипшиеся в комочки. Запах специфический, ароматно-бальзамический. Вкус водного извлечения горький и жгучий.

Микроскопические признаки. Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепаратов частиц прицветных чешуи с поверхности должны быть видны клетки с извилистыми тонкими стенками и складчатой кутикулой, местами клеточные стенки с неравномерным утолщением (верхний эпидермис), немногочисленные устьица аномоцитного типа (нижний эпидермис). Клетки, расположенные вдоль жилок и по краю прицветных чешуи, несколько вытянуты и имеют утолщенные стенки. Трихомы представлены волосками: головчатыми с 1-2-клеточной ножкой и 1-4-клеточной головкой, часто встречающимися одноклеточными тонкостенными волосками с заостренным концом, реже 3-4-клеточными. По краю прицветных чешуи расположены простые одноклеточные волоски с расширенным основанием.

Железки, часто отделенные от поверхности чешуи, состоят из 1-2-клеточной ножки и головки из большого числа многоугольных тонкостенных клеток. В мезофилле прицветных чешуи находятся друзы оксалата кальция, чаще вблизи жилок, а также клетки губчатой паренхимы с крупными межклетниками (аэренхима). В давленом препарате плода встречаются фрагменты околоплодника с извилистыми клетками экзокарпия.

Порошок. При рассмотрении микропрепаратов должны быть видны фрагменты эпидермиса с устьицами аномоцитного типа, железками, состоящими из 1-2-клеточной ножки и многоклеточной головки, многочисленными простыми одноклеточными и головчатыми волосками с 1-2-клеточной ножкой и 1-4-клеточной головкой, трихомы часто отделены от эпидермиса; фрагменты околоплодника с извилистыми утолщенными стенками экзокарпия.

В фрагментах мезофилла видны друзы оксалата кальция, иногда клетки губчатой паренхимы с крупными межклетниками (аэренхима). В мелкой фракции порошка встречаются фрагменты околоплодника, отдельные железки, фрагменты паренхимы с друзами оксалата кальция, отдельно лежащие простые и головчатые волоски.

1. Тонкослойная хроматография.

Приготовление растворов.

Раствор для детектирования 1. Дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира спиртовой раствор 1%. 1,0 г дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира растворяют в 100 мл спирта 96%. Срок годности раствора не более 3 мес. при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

Раствор для детектирования 2. Полиэтиленгликоля (ПЭГ) 400 спиртовой раствор 5%. 5 мл ПЭГ 400 смешивают со 100 мл спирта 96%. Срок годности раствора не более 6 мес. при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

Раствор стандартного образца (CO) рутина. Около 0,005 г CO рутина растворяют в 10 мл спирта 96% и перемешивают. Срок годности раствора не более 3 мес. при хранении в плотно укупоренной упаковке в защищенном от света месте.

Раствор CO гиперозида. Около 0,001 г CO гиперозида растворяют в 2 мл спирта 96% и перемешивают. Срок годности раствора не более 3 мес. при хранении в плотно укупоренной упаковке в прохладном, защищенном от света месте.

На линию старта хроматографической пластинки со слоем силикагеля на алюминиевой подложке размером 10x10 см в виде полос длиной 10 мм, шириной не более 2 мм наносят 30 мкл испытуемого раствора (см. раздел "Количественное определение. Сумма флавоноидов" приготовление раствора А испытуемого раствора) и параллельно в одну полосу по 1 мкл раствора CO рутина и раствора CO гиперозида. Пластинку с нанесенными пробами сушат при комнатной температуре, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 60 мин смесью растворителей этилацетат-уксусная кислота ледяная-вода (5:1:1), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей. Затем пластинку выдерживают при 100-105 °С в течение 5-10 мин и теплую обрабатывают раствором для детектирования 1, сушат, а затем обрабатывают раствором для детектирования 2, после полного удаления следов растворителей пластинку просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме раствора CO рутина должна обнаруживаться зона адсорбции желтого или желто-зеленого цвета, на хроматограмме раствора CO гиперозида - зона адсорбции желтого или желто-зеленого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться три зоны флуоресценции желтого или желто-зеленого цвета - одна из них на уровне зоны рутина и две выше зоны рутина, зона зеленого цвета выше зоны рутина, допускается обнаружение других зон"

2. К 1 мл раствору (см. раздел "Количественное определение. Сумма флавоноидов" приготовление раствора А испытуемого раствора) прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и нагревают на водяной бане в течение 2 мин; должно наблюдаться красное окрашивание (лейкоантоцианы).

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 13%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 14%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 3%.

Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, - не более 5%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм, - не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, - не более 5%. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, - не более 5%, частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, - не более 5%.

Другие части растения (стебли, черешки и листья). Цельное сырье, измельченное сырье - не более 10%.

Осыпавшиеся прицветные чешуи. Цельное сырье - не более 25%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 0,5%.

Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: сумма флавоноидов в пересчете на рутин - не менее 0,3%; эфирного масла - не менее 0,2%.

Сумма флавоноидов.

Приготовление растворов.

Раствор CO рутина. Около 0,05 г (точная навеска) CO рутина (рутина тригидрата), предварительно высушенного при температуре 130-135 °С в течение 3 ч, растворяют в 85 мл спирта 96% в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А CO рутина). Срок годности раствора не более 30 сут. при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

1,0 мл раствора А CO рутина, 2 мл алюминия хлорида спиртового раствора 2% и 0,1 мл уксусной кислоты концентрированной, доведенного спиртом 96% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл (раствор Б CO рутина).

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 25 мл спирта 70%, колбу взвешивают с погрешностью г, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры и снова взвешивают, при необходимости доводят до первоначальной массы спиртом 70% и фильтруют через бумажный складчатый фильтр (раствор А испытуемого раствора).

1,0 мл раствора А испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл алюминия хлорида спиртового раствора 2% и 0,1 мл уксусной кислоты концентрированной, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (раствор Б испытуемого раствора). Оптическую плотность раствор Б испытуемого раствора измеряют через 40 мин на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора А испытуемого раствора и 0,1 мл уксусной кислоты концентрированной, доведенный спиртом 96% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б CO рутина. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора А CO рутина, 0,1 мл уксусной кислоты концентрированной и доведенный спиртом 96% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) и вычисляют по формуле:

где: A - оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

A₀ - оптическая плотность раствора Б CO рутина;

a - навеска сырья, г;

a₀ - навеска CO рутина, г;

P - содержание основного вещества в CO рутина, %;

W - влажность сырья, %.

Допускается содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин вычислять с использованием удельного показателя поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом по формуле:

где: A - оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

- удельный показатель поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом при длине волны 410 нм, равный 260;

a - навеска сырья, г;

W - влажность сырья, %.

Определение содержания эфирного масла проводят в соответствии с требованиями ОФС "Определение содержания эфирного масла в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах" (метод 1 или 2, из 30,0 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, время перегонки - 3,5 ч).

Примечания:

1. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин определяют в сырье, предназначенном для получения водных, спиртовых, спирто-водных извлечений, экстрактов.

2. Содержание эфирного масла определяют в сырье, предназначенном для получения эфирного масла.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".