"ФС.2.1.0027.15. Фармакопейная статья. Натриевая соль никотиноил гамма-аминомасляной кислоты. Никотиноил гамма-аминомасляная кислота"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III")

4-(Пиридин-3-карбоксамидо)бутаноат натрия

Содержит не менее 98,0% натриевой соли никотиноил-гамма-аминомасляной кислоты C₁₀H₁₁N₂NaO₃ в пересчете на сухое вещество.

Описание. Белый кристаллический порошок; гигроскопичен.

Растворимость. Легко растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96%, практически нерастворим в хлороформе.

1. ИК-спектрометрия. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца натриевой соли никотиноил-гамма-аминомасляной кислоты.

2. Спектрофотометрия. Спектр поглощения 0,002% раствора субстанции в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты в области длин волн от 230 нм до 300 нм должен иметь максимум при 262 нм.

3. Качественная реакция. К 20 мг субстанции прибавляют 10 мг лимонной кислоты, 0,5 мл уксусного ангидрида и нагревают на водяной бане в течение 2 мин; должно появиться интенсивное фиолетово-красное окрашивание.

4. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию Б на натрий (ОФС "Общие реакции на подлинность").

<*> Прозрачность раствора. Раствор 0,25 г субстанции в 5 мл воды должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей").

<*> Цветность раствора. Окраска раствора, полученного в испытании на "Прозрачность раствора", не должна превышать эталон Y₇ (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

--------------------------------

<*> Контроль по показателям качества "Прозрачность раствора", "Цветность раствора", "Бактериальные эндотоксины" проводят в субстанциях, предназначенных для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

pH. От 7,3 до 8,5 (5% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Испытание проводят методом ТСХ (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F₂₅₄.

Подвижная фаза (ПФ). Углерода тетрахлорид - метанол - уксусная кислота ледяная 30:7:4.

Испытуемый раствор. 0,2 г субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в спирте 96% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения А (0,02% раствор стандартного образца никотиновой кислоты в спирте). 20 мг стандартного образца никотиновой кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 70 мл спирта 96% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Срок годности раствора 1 мес.

Раствор сравнения Б (0,01% водно-спиртовой раствор стандартного образца кислоты). 10 мг гамма-аминомасляной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 5 мл воды и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Срок годности раствора 1 мес.

Раствор сравнения В. 5 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют по 20 мл растворов сравнения А и Б и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Раствор для опрыскивания (0,2% раствор нингидрина в спирте 96%). 50 мг нингидрина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 20 мл спирта 96% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Срок годности раствора 1 мес.

На линию старта пластинки наносят 5 мкл (100 мкг) испытуемого раствора, 2 мкл (0,4 мкг) раствора сравнения А, 1 мкл (0,1 мкг) раствора сравнения Б и 5 мкл раствора сравнения В. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 10 мин и просматривают в УФ-свете при 254 нм.

Зона адсорбции примеси на хроматограмме испытуемого раствора, находящаяся на уровне зоны адсорбции никотиновой кислоты, по совокупности величины и интенсивности поглощения не должна превышать зону адсорбции на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,4%).

Допускается контур зоны адсорбции (ион натрия) с R_f < 1 по основному веществу.

Затем пластинку опрыскивают 0,2% раствором нингидрина в спирте 96% и нагревают в течение 15 мин при температуре от 110 °C до 120 °C.

Красно-фиолетовая зона адсорбции примеси на хроматограмме испытуемого раствора, находящаяся на уровне зоны адсорбции гамма-аминомасляной кислоты, не должна превышать по совокупности величины и интенсивности окраски зону адсорбции на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,1%).

Допускается желтая зона адсорбции (ион натрия), расположенная между основной зоной адсорбции, поглощающей в УФ-свете, и зоной адсорбции гамма-аминомасляной кислоты.

Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме сравнения В четко видны 2 зоны адсорбции, проявляющиеся при просматривании пластинки в УФ-свете, и 1 зона адсорбции, проявляющаяся после опрыскивания пластинки 0,2% раствором нингидрина в спирте 96%.

Потеря в массе при высушивании. Не более 3,0% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 1). Для определения используют около 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 1,7 ЕЭ на 1 мг натриевой соли никотиноил-гамма-аминомасляной кислоты (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции с концентрацией 50 мг/мл, а затем разводят его не менее чем в 400 раз.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Определение проводят методом титриметрии.

Около 0,15 г (точная навеска) субстанции помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 20 мл уксусной кислоты ледяной, прибавляют 1 мл уксусного ангидрида и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты до зеленого окрашивания (индикатор - 0,3 мл 0,1% раствора кристаллического фиолетового).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлорной кислоты соответствует 11,51 мг натриевой соли никотиноил-гамма-аминомасляной кислоты C₁₀H₁₁N₂NaO₃.

Хранение. В хорошо укупоренной упаковке, в защищенном от света месте.