"ФС.2.1.0057.18. Фармакопейная статья. Ампициллина тригидрат. Ампициллин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III")

(2S,5R,6R)-6-[(2R)-2-Амино-2-фенилацетамидо]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота тригидрат

Содержит не менее 96,0% и не более 102,0% ампициллина C₁₆H₁₉N₃O₄S в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Мало растворим в воде, практически нерастворим в спирте 96%.

1. ИК-спектрометрия. Инфракрасный спектр ампициллина тригидрата, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца ампициллина тригидрата.

2. Тонкослойная хроматография (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля силанизированного.

Подвижная фаза (ПФ). Пиридин - вода - хлороформ - метанол 10:30:80:90.

Испытуемый раствор. Растворяют 20 мг субстанции в 5,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты.

Раствор сравнения А. 20 мг стандартного образца ампициллина тригидрата растворяют в 5,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты.

Раствор сравнения Б. Растворяют 20 мг стандартного образца амоксициллина тригидрата и 20 мг стандартного образца ампициллина тригидрата в 5,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (4 мкг), раствора сравнения А (4 мкг) и раствора сравнения Б (по 4 мкг стандартных образцов амоксициллина тригидрата и ампициллина тригидрата). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт подвижной фазы пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и опрыскивают нингидрина раствором 0,25% в спирте 96%, нагревают при температуре 130 °C в течение 10 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения Б должны наблюдаться две четко разделенных зоны адсорбции.

Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и интенсивности окрашивания должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора сравнения А.

Удельное вращение. От +280 до +305 в пересчете на безводное вещество (0,25% раствор субстанции в воде, ОФС "Поляриметрия").

pH. От 3,5 до 5,5 (0,25% раствор, ОФС "Ионометрия").

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Растворы, содержащие ампициллин и его примеси, используют свежеприготовленными или хранят при температуре 4 °C не более 1 сут.

4% раствор фосфорной кислоты. К 50 мл воды прибавляют 4 мл фосфорной кислоты концентрированной и доводят объем раствора водой до 100,0 мл.

Подвижная фаза А (ПФА). Смешивают 0,5 мл 4% раствора фосфорной кислоты, 50 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата и 50 мл ацетонитрила и доводят водой до 1 л.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Смешивают 0,5 мл 4% раствора фосфорной кислоты, 50 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата и 400 мл ацетонитрила и доводят водой до 1 л.

Испытуемый раствор. Около 30 мг (точная навеска) субстанции растворяют в ПФА и доводят тем же растворителем до объема 50,0 мл.

Раствор стандартного образца ампициллина. Около 30 мг (точная навеска) стандартного образца безводного ампициллина растворяют в ПФА и доводят тем же растворителем до объема 50,0 мл.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Растворяют 2 мг стандартного образца цефрадина ((6R,7R)-7-[(2R)-2-амино-2-(циклогекса-1,4-диен-1-ил)ацетамидо]-3-метил-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2-карбоновая кислота) в ПФА и доводят объем тем же растворителем до 50,0 мл. Смешивают 5,0 мл полученного раствора с 5,0 мл раствора стандартного образца ампициллина.

Раствор сравнения. Доводят 1,0 мл испытуемого раствора ПФА до объема 100,0 мл.

Хроматографируют испытуемый раствор, раствор сравнения и раствор для проверки пригодности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы: на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы при ПФА - ПФБ 85:15 разрешение (R) между пиками ампициллина и цефрадина должно быть не менее 2,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика любой примеси должна быть не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%);

- суммарная площадь пиков всех примесей не должна более чем в 5 раз превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 5,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,1 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,1%).

N,N-Диметиланилин. Не более 0,002%. Определение проводят методом газовой хроматографии (ОФС "Газовая хроматография").

Раствор внутреннего стандарта. Растворяют 50 мг нафталина в 50 мл циклогексана. 5 мл полученного раствора доводят циклогексаном до 100 мл.

Испытуемый раствор. В пробирку с притертой стеклянной пробкой помещают 1,00 г субстанции, прибавляют 5,0 мл 1 М раствора натрия гидроксида и 1,0 мл раствора внутреннего стандарта. Пробирку закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 1 мин. При необходимости центрифугируют и используют надосадочный слой.

Раствор сравнения. Смешивают 50,0 мг N,N-диметиланилина с 2,0 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и 20,0 мл воды, встряхивают до растворения и доводят водой до 50,0 мл. 5,0 мл полученного раствора доводят водой до 250,0 мл. В пробирку с притертой стеклянной пробкой помещают 1,0 мл полученного раствора, прибавляют 5,0 мл 1 М раствора гидроксида натрия и 1,0 мл раствора внутреннего стандарта. Пробирку закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 1 мин. При необходимости центрифугируют и используют надосадочный слой.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор сравнения.

Отношение площади пика N,N-диметиланилина к площади пика нафталина на хроматограмме испытуемого раствора не должно быть более соответствующего отношения на хроматограмме раствора сравнения.

Вода. Не менее 12,0% и не более 15,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют около 0,1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,5% (ОФС "Сульфатная зола). Для определения используют около 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС "Тяжелые металлы", метод 2, в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции (ОФС "Сульфатная зола"), с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Испытание проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Подвижная фаза. ПФА - ПФБ 85:15.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор стандартного образца ампициллина.

Пригодность хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина относительное стандартное отклонение площади пика ампициллина не превышает 2,0% (6 определений).

Содержание ампициллина C₁₆H₁₉N₃O₄S в субстанции (X) в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика ампициллина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика ампициллина на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска стандартного образца ампициллина безводного, мг;

W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;

P - содержание ампициллина в стандартном образце ампициллина безводного, %.

Хранение. В плотно закрытой упаковке в защищенном от света месте при температуре не выше 25 °C.