Описание
Источник публикации
Документ опубликован не был
Примечание к документу
Документ утратил силу в связи с изданием
Приказа Роспотребнадзора от 04.12.2020 N 797.
Название документа
"Применение методов ионометрии и пламенной фотометрии для оценки питательных сред на содержание натрия, калия, кальция и хлора. Методические рекомендации"
(утв. Минздравом РСФСР 30.06.1988)
"Применение методов ионометрии и пламенной фотометрии для оценки питательных сред на содержание натрия, калия, кальция и хлора. Методические рекомендации"
(утв. Минздравом РСФСР 30.06.1988)
Утверждаю
Заместитель Министра
В.Г.ПАНОВ
30 июня 1988 года
Согласовано
Заместитель Начальника
Главного управления
научных учреждений
А.М.НАУМЕНКО
30 июня 1988 года
ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДОВ ИОНОМЕТРИИ И ПЛАМЕННОЙ ФОТОМЕТРИИ
ДЛЯ ОЦЕНКИ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД НА СОДЕРЖАНИЕ НАТРИЯ,
КАЛИЯ, КАЛЬЦИЯ И ХЛОРА
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Методы ионометрии и пламенной фотометрии позволяют быстро и точно определить содержание ионов натрия, калия, кальция и хлора в питательных средах. Второй метод определяет содержание макроэлементов, находящихся и в недиссоциированном состоянии, выявляет в средах дополнительные источники этих элементов.
При разработке питательных сред и их контроле необходимы сведения о минеральном составе питательных основ, отдельных ингредиентов ее, самих питательных сред. В действующих "Методических указаниях по применению физико-химических методов контроля питательных сред" МЗ СССР (М., 1977) приводится методика определения хлорида натрия. Настоящее дополнение составлено с целью расширения набора методик для аналитического контроля питательных сред, в частности, определения содержания отдельно натрия, калия, кальция, хлора. Определение этих элементов возможно с помощью методов потенциометрии с ионоселективными электродами и пламенной фотометрии. Применение этих методов в микробиологии мало освоено, в то время как они являются специфичными, информативными, простыми и доступными экспресс-методами.
Настоящие дополнения к методическим указаниям по определению химического состава (ПС) обоснованы результатами сравнительного изучения описанных методов с известным, используемым для определения хлорида натрия в питательных средах с помощью азотнокислого серебра и роданида аммония, выявляющего общее содержание хлорид-ионов в растворе независимо от присутствия одного соединения хлора или нескольких с катионами натрия, калия, магния и др. Возможность применения ионометрии и пламенной фотометрии для определения ионов натрия, калия, хлора и кальция в питательных средах изучена на наборе широко применяемых сред на основе перевара мяса по Хоттингеру и образцах экспериментальных сред.
Предлагаемые методики позволили определить присутствие ионов натрия, калия, хлора в средах и их компонентах, вести целенаправленное конструирование среды. С помощью этих двух методов получены количественные данные отдельно ионов натрия, калия, хлора, находящихся как в диссоциированном, так и в "связанном" состоянии.
1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИОНОВ НАТРИЯ И ХЛОРА МЕТОДОМ ИОНОМЕТРИИ
Ионометрия - раздел потенциометрии, использующей в качестве
аналитических детекторов ионоселективные электроды (ИСЭ). ИСЭ -
представляют собой электрохимические полуэлементы, для которых разность
потенциалов на границе раздела фаз "электрод-раствор" зависит от
+
концентрации определяемого иона в растворе. Катионочувствительные (Na )
стеклянные электроды селективны (по отношению к другим катионам), устойчивы
в редокс-системах, на них не воздействуют белки, они индифферентны к
анионам. Аниончувствительные электроды - индифферентны к катионам.
Для определения концентрации ионов с помощью ИСЭ используют прямую потенциометрию в среде с высокой ионной силой (методы градуировочного графика и стандартных добавок) и потенциометрическое титрование. Техника измерения аналогична измерению pH: необходимы потенциометр (pH-метр) и электрод сравнения. ИСЭ выпускает ЗИП в г. Гомеле и НПО "Аналитприбор", г. Тбилиси.
Определение ионов хлора и натрия методом
двойной стандартной добавки
Методика определения ионов хлора и натрия в сложных микробиологических питательных средах, содержащих высокие концентрации посторонних компонентов, основана на измерении потенциала селективного электрода до и после введения в анализируемый раствор двух идентичных порций (добавок) раствора с известной концентрацией определяемого иона.
Анализ проводят с использованием натриевого (ЭСЛ-51Г-05) и хлоридного
-
(ЭМ-Cl 01) селективных электродов. Измерение сигнала индикаторного
электрода проводят на потенциометре типа pH-121 и других типов относительно
хлорсеребряного электрода сравнения (ЭВЛ-1МЗ), соединенного с исследуемым
раствором посредством электролитического моста, заполненного 3% гелем
агар-агара с 10% раствором KNO , при перемешивании раствора. Для
3
приготовления геля навески агар-агара (0,75 г) и KNO 2,5 г, помещают в
3
25 мл H O и смесь оставляют для набухания, затем при интенсивном
2
перемешивании доводят до кипения и горячий раствор заливают в трубку,
избегая появления пузырьков воздуха. Постоянство ионной силы в системе
осуществляется введением 2 М раствора нитрата аммония к исследуемому
раствору (рис. 1 - здесь и далее рисунки не приводятся).
+
Подготовка электрода к работе.
+
Перед проведением серии анализов по определению ионов Na в питательных
-
средах Na - селективный электрод готовят к работе следующим образом:
-1
1) выдерживают электрод в 10 М растворе NaCl в течение суток для
приведения мембраны в рабочее состояние;
2) по точной навеске готовят исходный 1 М раствор NaCl (5,85 г в
100 мл), затем для калибровки электрода методом последовательного
разбавления получают рабочие растворы следующих концентраций:
Таблица 1
КАЛИБРОВОЧНЫЕ РАСТВОРЫ ДЛЯ НАТРИЕВОГО ЭЛЕКТРОДА
??????????????????????????????????????????????????????????????????
? ? -3 ? -2 ? -1 ? ?
?Конц. NaCl, М ?1 x 10 ?1 x 10 ?1 x 10 ?1,0 ?
??????????????????????????????????????????????????????????????????
?pNa = -lg a ?3,02 ?2,04 ?1,11 ?0,22 ?
? Na ? ? ? ? ?
??????????????????????????????????????????????????????????????????
Примечание: Таблица приведена из технического описания и инструкции по эксплуатации "pH-метр - милли-вольтметр pH-121".
3) в каждом из приготовленных растворов, начиная с более разбавленного,
+
измеряют значение потенциала индикаторного электрода (Na ) относительно
электрода сравнения и строят график зависимости потенциала электрода (E)
натрий ионов (pNa) в координатах E - pNa;
4) определяют наклон (S) графика, имеющего вид прямой линии, по
E - E
1 2
соотношению S = -----------. Если S близко к теоретическому значению
pNa - pNa
1 2
(59,16), то электрод пригоден к работе. Проверка работы электрода и
построение градуировочного графика проводится один раз перед проведением
серийных анализов образцов с близким содержанием определяемых компонентов.
При постоянной эксплуатации электрода его характеристику достаточно
проверять один раз в месяц по двум значениям концентраций в средней области
градуировочного графика. При длительном хранении электрода подготовку его к
работе необходимо начинать с "замачивания" мембраны.
Градуировочный график необходим для приближенного определения
содержания ионов в исследуемом образце, а также для выбора концентрации и
величины вводимой добавки стандартного раствора.
Ход анализа.
Навеску сухой среды или точно измеренный объем исследуемой жидкой или
растопленной агаризованной питательной среды разбавляют дважды перегнанной
водой в мерной колбе, тщательно перемешивают. Размер навески и кратность
разбавления H O в мерной колбе подбирается в зависимости от содержания
2
+
ионов Na в исследуемом образце. В случае изучения агаризованной среды
используют для разбавления подогретую воду до 45 - 50 °C. Пипеткой отбирают
5 мл полученного раствора, помещают в стаканчик, прибавляют равный объем
2 М NH NO , погружают Na-селективный электрод. 2 М раствора нитрата аммония
4 3
добавляют к раствору исследуемого образца в измерительной ячейке для
поддержания постоянной ионной силы. Связь исследуемого раствора с раствором
электрода сравнения осуществляют посредством электролитического моста.
Раствор перемешивают с помощью магнитной мешалки. Отсчет значений
потенциала E , мВ, по шкале прибора производят через 1 - 2 мин. после
1
погружения индикаторного электрода. Затем пипеткой вводят добавку V
ст
стандартного раствора C NaCl 1 М (чтобы изменением объема можно было
ст
пренебречь, вводимая добавка не должна превышать 0,5 мл, а концентрация
добавляемого раствора должна быть на 2 порядка больше исследуемого).
Фиксируют значение E , мВ, введение добавки стандартного раствора должно
2
вызвать изменение потенциала не менее, чем на 30 - 40 мВ. Затем вводят в
исследуемый раствор вторую идентичную добавку и измеряют E , мВ.
3
Расчет содержания анализируемого иона проводят следующим образом:
вычисляют разность значений потенциалов между первоначально измеренным
и после введения каждой добавки: E - E ; E - E , находят их отношение:
1 2 1 3
E - E
1 3
R = -------;
E - E
1 2
C
х
пользуясь
табл. 3 определяют, какое значение A = -------- соответствует
ДЕЛЬТА C
вычисленному значению R;
преобразуют выражения относительно C = A x ДЕЛЬТА C;
х
C x V
ст ст
подставляют ДЕЛЬТА C = ---------,
V
пробы
C x V
ст ст
тогда C , Моль/л = A ---------,
х V
пробы
где:
C - концентрация стандартного раствора, используемого в виде добавки,
ст
моль/л;
V - объем добавки, мл;
ст
V - объем пробы, взятой для анализа, мл.
пробы
Конечный результат в г/л определяют с учетом разбавления исходного
образца:
C x M x V
х м.к
C = ------------- x 1000 г/л
иссл. V x 1000
иссл.
или величины навески, растворенной в мерной колбе,
C x M x V
х м.к
C = ------------- x 1000 г/л,
иссл. a x 1000
где:
V - объем мерной колбы, мл;
м.к
V - объем пробы, взятой для разбавления, мл;
иссл.
a - навеска образца, г;
M - мольная масса определяемого иона (Na = 23,0 г);
или в %:
C x M x V
х м.к
C = ------------- x 100%.
иссл. V x 1000
иссл.
-
Подготовка электрода к работе.
-3
1. Выдерживают хлорид-селективный электрод в 10 М растворе KCl в
течение суток для приведения мембраны в рабочее состояние.
2. По точной навеске готовят исходный раствор KCl 1 М растворением 7,45 г реактива в мерной колбе емкостью 100 мл.
3. Последовательным разбавлением в мерной колбе емкостью 25 мл готовят серию калибровочных растворов KCl следующих концентраций:
Таблица 2
КАЛИБРОВОЧНЫЕ РАСТВОРЫ ДЛЯ ХЛОРИДНОГО ЭЛЕКТРОДА
??????????????????????????????????????????????????????????????????
? ? -1 ? -2 ? -3 ? -4 ? -4 ?
?Конц. KCl, М ?10 ?10 ?10 ?5 x 10 ?3 x 10 ?
??????????????????????????????????????????????????????????????????
?pCl = -lg a _?1,11 ?2,04 ?3,02 ?3,30 ?3,50 ?
? Cl ? ? ? ? ? ?
??????????????????????????????????????????????????????????????????
Примечание: Таблица приведена из паспорта электрода мембранного ЭМ-Cl-01.
Таблица 3
РАСЧЕТ АНАЛИЗА ПО МЕТОДУ ДВОЙНЫХ СТАНДАРТНЫХ ДОБАВОК
(ПО ДАННЫМ ФИРМЫ "ORION") <*>
--------------------------------
<*> Таблица приведена из Камман К. (Cammann K.). В кн.: Работа с ионоселективными электродами. М., Мир., 1980. С. 264.
??????????????????????????????????????????????????????????????????
? R ? C ?? R ? C ?? R ? C ?
? ? x ?? ? x ?? ? x ?
? ?A = --------?? ?A = --------?? ?A = --------?
? ? ДЕЛЬТА C?? ? ДЕЛЬТА C?? ? ДЕЛЬТА C?
??????????????????????????????????????????????????????????????????
?1,270 ?0,100 ??1,520 ?0,694 ??1,670 ?1,598 ?
?1,280 ?0,113 ??1,525 ?0,714 ??1,675 ?1,643 ?
?1,290 ?0,126 ??1,530 ?0,735 ??1,680 ?1,691 ?
?1,300 ?0,140 ??1,535 ?0,756 ??1,685 ?1,738 ?
?1,310 ?0,154 ??1,540 ?0,778 ??1,690 ?1,787 ?
?1,320 ?0,170 ??1,545 ?0,801 ??1,695 ?1,840 ?
?1,330 ?0,186 ??1,550 ?0,823 ??1,700 ?1,894 ?
?1,340 ?0,203 ??1,555 ?0,847 ??1,705 ?1,948 ?
?1,350 ?0,221 ??1,560 ?0,870 ??1,710 ?2,006 ?
?1,360 ?0,240 ??1,565 ?0,896 ??1,715 ?2,066 ?
?1,370 ?0,260 ??1,570 ?0,920 ??1,720 ?2,126 ?
?1,380 ?0,280 ??1,575 ?0,946 ??1,725 ?2,190 ?
?1,390 ?0,302 ??1,580 ?0,973 ??1,730 ?2,256 ?
?1,400 ?0,325 ??1,585 ?1,000 ??1,735 ?2,326 ?
?1,410 ?0,349 ??1,590 ?1,029 ??1,740 ?2,397 ?
?1,420 ?0,373 ??1,595 ?1,056 ??1,745 ?2,470 ?
?1,430 ?0,399 ??1,600 ?1,086 ??1,750 ?2,549 ?
?1,440 ?0,427 ??1,605 ?1,116 ??1,755 ?2,629 ?
?1,450 ?0,455 ??1,610 ?1,147 ??1,760 ?2,711 ?
?1,460 ?0,485 ??1,615 ?1,179 ??1,765 ?2,801 ?
?1,470 ?0,516 ??1,620 ?1,213 ??1,770 ?2,892 ?
?1,475 ?0,532 ??1,625 ?1,245 ??1,775 ?2,985 ?
?1,480 ?0,548 ??1,630 ?1,280 ??1,780 ?3,088 ?
?1,485 ?0,565 ??1,635 ?1,315 ??1,785 ?3,193 ?
?1,490 ?0,582 ??1,640 ?1,353 ??1,790 ?3,301 ?
?1,495 ?0,600 ??1,645 ?1,391 ??1,795 ?3,416 ?
?1,500 ?0,618 ??1,650 ?1,430 ??1,800 ?3,536 ?
?1,505 ?0,637 ??1,655 ?1,469 ??1,805 ?3,664 ?
?1,510 ?0,655 ??1,660 ?1,510 ??1,810 ?3,797 ?
?1,515 ?0,675 ??1,665 ?1,554 ??1,815 ?3,939 ?
??????????????????????????????????????????????????????????????????
Калибровочные
таблицы 1 и
2 указывают область концентраций, в которой работает данный электрод. Таблицы дают конкретные значения концентраций калибровочных растворов, которые необходимы для проверки работы электродов.
4. В каждом из приготовленных растворов, начиная с более разбавленного,
измеряют значение потенциала. Для этого калибровочный раствор помещают в
стаканчик, погружают хлорид-селективный электрод. Электрод сравнения
помещают в другой стаканчик с насыщенным раствором KNO . Оба раствора
3
соединяют электролитическим ключом, электроды подключают к клеммам
измерительного прибора.
5. По значениям E, измеренным в растворах с различной концентрацией
KCl, строят график зависимости E, мВ - pCl. Находят крутизну электродной
E - E
1 2
характеристики S = -----------; если соблюдается прямолинейная зависимость
pCl - pCl
1 2
E от pCl и значение S близко к теоретическому (59,16), электрод пригоден к
работе.
Ход анализа.
-
Методика проведения анализа по определению содержания Cl -ионной
-
аналогична описанной ранее. Молярная масса (М) определяемого иона Cl =
35,5 г. В качестве стандартного раствора используют 1 М KCl.
Если образец сухой, то берется навеска среды и растворяется в мерной
колбе определенного объема. Величина навески и кратность разбавления водой
подбирается в каждом конкретном случае в зависимости от содержания ионов
+ -
Na или Cl в образце. При этом руководствуются тем, что потенциал,
измеренный в исследуемом растворе, должен лежать на среднем участке
калибровочного графика. Работа в этой области чувствительности электрода
дает наиболее точные результаты. В качестве примера приведем методики
анализа жидкого образца (бульона) и сухой пробы питательной среды.
-
Анализ бульона на содержание Cl -ионов
1 мл пробы растворяем в мерной колбе емкостью 10 мл. Отбираем 5 мл,
помещаем в стаканчик, прибавляем 5 мл 2 М NH NO , погружаем индикаторный
4 3
электрод. Исследуемый раствор соединяем с электродом сравнения посредством
электролитического ключа. Электроды подключаем к клеммам прибора pH-121.
Измеряем значение потенциала E . Делаем две идентичные добавки (V )
1 ст
стандартного C 1 М KCl по 0,3 мл, каждый раз измеряя значения потенциала
ст
E и E .
2 3
Результаты измерений заносим в таблицу:
??????????????????????????????????????????????????????????????????
? V мл KCl 1 М ? E, мВ ?
??????????????????????????????????????????????????????????????????
?- ?236 ?
?0,3 ?196 ?
?0,3 ?179 ?
??????????????????????????????????????????????????????????????????
Производим вычисления:
E - E = 236 - 196 = 40 мВ,
1 2
E - E = 236 - 179 = 57 мВ,
1 3
E - E
1 3 57
R = ------- = -- = 1,42.
E - E 40
1 2
По
таблице 3 находим, что R = 1,42 соответствует значение
C
х
A = -------- = 0,373; подставляем значение ДЕЛЬТА C и решаем относительно:
ДЕЛЬТА C
C x V
ст ст 1 x 0,3
C = A ---------; C = 0,373 x ------- = 0,011 моль/л.
х V х 10
иссл.
Учитывая разбавление исходной пробы (V ), выразим результат
м.к
-
определения Cl ионов в г/л:
C x M _ x V
х Cl м.к 0,011 x 35,5 x 10
C = ---------------- = ----------------- = 3,9 г/л
иссл. V 1
иссл.
или в %:
C x M _ x V
х Cl м.к
C = ---------------- x 100% = 0,39%.
иссл. V x 1000
иссл.
Анализ сухой пробы питательной среды
Навеску пробы <*> 0,65 г растворяем в мерной колбе емкостью 10 мл.
Отбираем 5 мл раствора, помещаем в стаканчик, прибавляем 5 мл 2 М NH NO .
4 3
Дальнейший ход анализа аналогичен описанному выше.
--------------------------------
<*> Навеску берут в соответствии с рецептурой из расчета на 100 мл изучаемой среды.
Приводим результаты измерений:
??????????????????????????????????????????????????????????????????
? V мл KCl 1 М ? E, мВ ?
??????????????????????????????????????????????????????????????????
?- ?266 ?
?0,4 ?231 ?
?0,4 ?216 ?
??????????????????????????????????????????????????????????????????
Производим вычисления:
E - E = 266 - 231 = 35 мВ,
1 2
E - E = 266 - 216 = 50 мВ,
1 3
E - E
1 3 50
R = ------- = -- = 1,43.
E - E 35
1 2
По
таблице 3 находим, что R = 1,43 соответствует значение
C
х
A = -------- = 0,399; подставляем значение ДЕЛЬТА C и решаем относительно:
ДЕЛЬТА C
C x V
ст ст 1 x 0,4
C = A ---------; C = 0,399 x ------- = 0,016 моль/л.
х V х 10
иссл.
Учитывая величину навески (a, г) и объем колбы (V ), используемый для
м.к
-
ее растворения, выразим результат определения Cl ионов в г/л:
C x M _ x V
х Cl м.к 0,016 x 35,5 x 10
C = ---------------- = ----------------- = 8,7 г/л
иссл. a 0,65
или в %:
C x M _ x V
х Cl м.к 0,016 x 35,5 x 10
C = ---------------- x 100% = ----------------- x 100% = 0,87%.
иссл. a x 1000 0,65 x 1000
2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАТРИЯ, КАЛИЯ И КАЛЬЦИЯ
МЕТОДОМ ПЛАМЕННОЙ ФОТОМЕТРИИ
Пламенная фотометрия является разновидностью эмиссионного спектрального анализа, широко применяется в клинических лабораториях для определения щелочных и щелочно-земельных металлов в биологических средах и тканях. Метод основан на измерении интенсивности излучения соответствующих элементов. Анализируемый раствор в виде мелких брызг (аэрозоля) с помощью распылителя вводят в пламя горелки. Излучение определяемого элемента отделяют посредством светофильтров (монохроматора) от других и направляют на фотоэлемент. Возникающий при этом фототок измеряют микроамперметром. Количественное определение натрия, калия и кальция в растворах проводят на пламенном фотометре - ФПЛ-1, функциональная схема которого представлена на рис. 2. Метод надежнее химического, особенно при определении малых концентраций и одновременном присутствии нескольких элементов. Нижний предел определения: а) натрия и калия - 0,5 мг/л, для кальция - 5,0 мг/л. Верхний предел всех элементов составляет 100 мг/л, расход анализируемого раствора до 5 мл/мин. Продолжительность измерения 30 секунд.
Приборы и реактивы: пламенный фотометр ФПЛ-1, стандартные растворы калия, натрия и кальция, мерные колбы вместимостью 50 и 100, градуированные пипетки на 1,0 и 5,0 мл, испытуемые вещества, дистиллированная вода.
В случае определения содержания элементов в сухих средах берут навеску
в соответствии с рецептурой из расчета на 100 мл среды и разводят
бидистиллированной водой. Агаризованные среды перед исследованием
расплавляются, в случае необходимости могут дополнительно разводиться
подогретой бидистиллированной водой (t 45 - 55 °C).
а
Анализируемый раствор в виде аэрозоля с помощью распылителя вводится в
пламя горелки. Наилучшие показатели получаются при величине внутренних
конусов пламени 3 - 4 мм и голубовато-зеленом их цвете (рис. 3).
Прямая пропорциональность между интенсивностью спектральной линии и
концентрацией анализируемого раствора наблюдается лишь при определенных
концентрациях и зависит от природы спектральной линии и пламени.
Возникающий фототок, регистрируемый микроамперметром, является функцией
концентрации определяемого элемента. Для выделения спектральной линии
измеряемого элемента применяются интерференционные светофильтры со
следующими длинами волн в максимуме пропускания: для измерения эмиссии
натрия, калия и кальция лямбда соответственно равно 589 +/- 5; 768 +/- 5
max
и 622 +/- 5 нм.
Определение натрия, калия и кальция
Для каждого элемента готовится разбавлением исходного раствора дистиллированной водой серия стандартных растворов в мерных колбах вместимостью 50 мл. Исходный стандартный раствор NaCl и KCl содержит 200 мг/л натрия и 200 мг/л калия соответственно. Исходный стандартный раствор хлорида кальция содержит 1,0 г/л кальция. Эти растворы используются для приготовления пяти более разбавленных растворов (табл. 4).
Таблица 4
ПРИГОТОВЛЕНИЕ СТАНДАРТНЫХ РАСТВОРОВ
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
?Порядковые номера разведенных стандартных растворов ?1 ?2 ?3 ?4 ?5 ?
?Объем исходного стандартного раствора, мл ?0,25?0,5?1,0?1,5?2,0?
?Содержание натрия, калия, мг/л ?1 ?2 ?4 ?6 ?8 ?
?Содержание кальция, мг/л ?5 ?10 ?20 ?30 ?40 ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
Фотометрирование начинают с раствора, имеющего наибольшую концентрацию, чтобы избежать отклонения стрелки микроамперметра за пределы шкалы. Затем последовательно переходят от меньшей концентрации к большей. По полученным данным строят график зависимости i = f(C), где i - сила фототока (мА), f - функция, (C) - концентрация (мг/л).
Перед фотометрированием анализируемых растворов распылитель и газовую горелку тщательно промывают дистиллированной водой в течение 2 - 3 мин., анализируемые растворы фотометрируют и по графику i = f(C) находят искомые концентрации с учетом разбавления питательных сред.
Методические дополнения составлены сотрудниками:
Казанского химико-технологического института им. С.М. Кирова;
Казанского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии.
