"МУК 4.1.4029-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение концентраций циклобутрифлурама в воде и почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания по методам контроля"
(утв. Роспотребнадзором 31.05.2024)

1. Разработаны ФБУН "ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, Н.Е. Федорова, С.Д. Добрев, А.А. Ивченкова).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 31 мая 2024 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее - МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (далее - МС/МС) для определения в воде и почве массовой концентрации циклобутрифлурама в диапазонах: в воде 0,001 - 0,1 мг/дм³ - без учета разбавления, 0,001 - 10 мг/дм³ - с учетом разбавления в 100 раз, в почве 0,002 - 0,2 мг/кг - без учета разбавления, 0,002 - 20 мг/кг - с учетом разбавления в 100 раз.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Циклобутрифлурам - смесь, состоящая из 80 - 100% N-[(1S,2S)-2-(2,4-дихлорфенил)циклобутил]-2-(трифторметил)пиридин-3-карбоксамида и 20 - 0% (1R,2R)-энантиомера <1>.

--------------------------------

<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

Брутто-формула - C₁₇H₁₃Cl₂F₃N₂O. Молекулярная масса 389,2.

2.2. Физические и химические свойства.

Белый порошок без запаха. Температура плавления плюс 125,4 °C. Давление паров 6,2·10^-3 мПа (при температуре плюс 25 °C). Плотность - 1,46 г/см³. Растворимость в воде при температуре плюс 20 °C - 33 мг/дм³. Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода при температуре 20 °C K_ow logP = 3,2.

2.3. Область применения.

Циклобутрифлурам обеспечивает защиту от широкого спектра нематодных вредителей.

3.1. При соблюдении условий проведения анализа и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность <2> (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

--------------------------------

<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 N 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).

4.1. Методика основана на определении циклобутрифлурама с использованием ВЭЖХ-МС/МС.

4.2. Экстракцию циклобутрифлурама из почвы выполняют смесью воды и ацетонитрила, выделяют ацетонитрил из смеси высаливанием. Ацетонитрильный экстракт подвергают очистке сорбентами для дисперсионной твердофазной экстракции (далее - ТФЭ).

Очистку проб воды для определения циклобутрифлурама осуществляют с помощью мембранного шприцевого фильтра с размером пор не более 0,45 мкм.

4.3. Нижний предел измерения циклобутрифлурама в анализируемом объеме пробы - 5 пг. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 N 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

6.4. Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 - 30 °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, подвижной фазы, смесей солей для экстракции и очистки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

8.2. Приготовление 0,1% водного раствора муравьиной кислоты (компонент А подвижной фазы). В мерную колбу вместимостью 500 см³ добавляют 200 см³ деионизованной воды, пипеткой на 1 см³ вносят 0,5 см³ концентрированной муравьиной кислоты и доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят не более 14 дней.

8.3. Кондиционирование хроматографической колонки.

Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (компонент А приготовлен по п. 8.2, компонент Б - ацетонитрил) 95:5 и скорости подачи растворителя 0,4 см³/мин не менее 15 мин.

8.4. Приготовление смеси солей для экстракции <4>. Для обработки одной пробы смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного. Для каждой пробы готовится отдельное количество смеси. Смеси хранят в индивидуальной герметичной упаковке не более 6 месяцев.

--------------------------------

8.5. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов <5>. Для очистки одной аликвоты экстракта смешивают (150 +/- 5) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина и (900 +/- 5) мг магния сернокислого, закрывают в герметичную тару, хранят не более 6 месяцев.

--------------------------------

8.6. Приготовление раствора для экстракции. В мерную колбу вместимостью 500 см³ вносят мерным цилиндром 100 см³ воды и 400 см³ ацетонитрила. Тщательно перемешивают.

8.7. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

8.7.1. Исходный раствор циклобутрифлурама для градуировки (концентрация 1000 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г циклобутрифлурама, добавляют 5 - 7 см³ ацетонитрила, перемешивают до полного растворения, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой темной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 6 месяцев.

Растворы N 1 - 7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.7.2. Раствор N 1 циклобутрифлурама для градуировки (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1 см³ исходного раствора циклобутрифлурама с концентрацией 1000 мкг/см³ (п. 8.7.1), доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой темной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более 3 месяцев.

Раствор N 1 используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов методом "добавок".

8.7.3. Раствор N 2 циклобутрифлурама для градуировки и внесения (концентрация 0,1 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1 см³ раствора циклобутрифлурама с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.7.2), доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C 1 неделю.

8.7.4. Рабочие растворы N 3 - 7 циклобутрифлурама для градуировки (концентрация 0,001 - 0,05 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 10 см³ помещают по 0,1; 0,5; 1,0; 2,5; 5,0 см³ градуировочного раствора N 2 с концентрацией 0,1 мкг/см³ (п. 8.7.3), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 7 с концентрацией циклобутрифлурама 0,001; 0,005; 0,01; 0,025; 0,05 мкг/см³ соответственно. Растворы используют свежеприготовленными.

8.8. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации циклобутрифлурама, устанавливают методом абсолютной калибровки по 6 растворам для градуировки N 2 - 7.

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм³ каждого градуировочного раствора (см. п. 8.7.3 - 8.7.4) и анализируют в условиях хроматографирования в соответствии с п. 10.3. Устанавливают площадь пика циклобутрифлурама.

8.9. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

Проводят измерения не менее двух образцов рабочих растворов для градуировки, содержание циклобутрифлурама в которых соответствует диапазону концентраций от 0,001 до 0,1 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1), (2):

где: A - величина расхождения, %;

X - концентрация циклобутрифлурама в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).

8.10. Определение степени извлечения (f). Степень извлечения определяется при внедрении настоящих МУК. Применяется при использовании абсолютной калибровки (калибровочные стандарты приготовлены на растворителе). Степень извлечения определяется методом добавок как соотношение среднего значения экспериментально найденной величины добавки к фактическому значению внесенной в образец добавки. Степень извлечения при применении матричной калибровки должна быть не менее 90%.

9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <6>.

--------------------------------

<6> ГОСТ Р 59024-2020 "Вода. Общие требования к отбору проб", введенный приказом Росстандарта от 10.09.2020 N 640-ст; ГОСТ Р 70282-2022 "Поверхностные и подземные воды. Общие требования к отбору проб льда и атмосферных осадков", введенный приказом Росстандарта от 05.10.2022 N 1075-ст; ГОСТ Р 58595-2019 "Почвы. Отбор проб", введенный приказом Росстандарта от 10.10.2019 N 954-ст.

9.2. Пробы воды отбирают и хранят в стеклянных бутылях при температуре плюс 2 - 5 °C не более 5 суток. При отборе допускается консервация муравьиной кислотой до pH 3.

9.3. Пробы почвы готовят в соответствии с методическими документами <7>.

Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C.

--------------------------------

<7> ГОСТ ISO 11464-2015 "Качество почвы. Предварительная подготовка проб для физико-химического анализа", введенный приказом Росстандарта от 05.06.2015 N 559-ст.

10.1. Вода.

Образец воды фильтруют через мембранный фильтр (характеристики указаны в таблице 5.3). Пробу анализируют в условиях хроматографирования (см. п. 10.3).

10.2. Почва.

Образец суховоздушной почвы массой 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³. Добавляют 25 см³ раствора, приготовленного по п. 8.6, ставят на вихревой шейкер на 10 мин. Вносят в пробирку смесь солей для экстракции (см. п. 8.4). Закрывают крышкой и помещают на вихревой шейкер на 2 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения не менее 4500 об/мин. Помещают в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ смесь сорбентов для очистки экстракта (см. п. 8.5), добавляют 6 см³ верхнего слоя, встряхивают вручную до полного смачивания порошков и помещают на вихревой шейкер на 2 мин. Образец повторно центрифугируют 5 мин при скорости вращения не менее 4500 об/мин. Экстракт (верхний слой в пробирке после центрифугирования) фильтруют через мембранный фильтр (характеристики указаны в таблице 5.3) в виалу и анализируют в условиях хроматографирования (см. п. 10.3)

10.3. Измерения выполняют методом ВЭЖХ-МС/МС: тройной квадруполь с источником ионизации при следующих режимных параметрах. Параметры масс-спектрометрического детектора могут различаться в зависимости от марки и модели прибора:

- режим ионизации: электроспрей (англ. Electrospray Ionization, ESI), электростатическое напряжение минус 4500 В;

- полярность: отрицательная;

- режим работы: мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, далее - MRM), параметры масс-спектрометрического детектора приведены в таблице 10.1;

- скорость сканирования: 100 мс;

- давление газовой завесы: 172,37 кПа;

- давление газа 1: 344,74 кПа;

- давление газа 2: 413,7 кПа;

- температура осушающего газа: плюс 350 °C.

Условия хроматографирования:

- хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2 мм, модифицированная полярная C18 с TMS эндкеппингом, зернением 4 мкм;

- температура колонки: плюс 40 °C;

- скорость потока элюента: 0,4 см³/мин;

- объем вводимой пробы: 5 мм³;

- подвижная фаза: компонент А: 0,1% муравьиная кислота (приготовлена по п. 8.2); компонент Б: ацетонитрил.

Режим элюирования: градиентный, приведен в таблице 10.2.

Линейный диапазон детектирования 5 - 500 пг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0,1 мкг/см³, разбавляют ацетонитрилом (не более чем в 100 раз).

11.1. Содержание циклобутрифлурама в воде (X_в, мг/дм³) рассчитывают по формуле (3):

где: C_в - концентрация циклобутрифлурама, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

Кр_в - коэффициент разбавления (если проба подвергалась разбавлению).

11.2. Содержание циклобутрифлурама в почве (X_п, мг/кг) рассчитывают по формуле (4):

где: C_п - концентрация циклобутрифлурама, полученная по градуировочному графику в соответствии с площадью хроматографического пика, мкг/см³;

V - объем ацетонитрила, добавленного в анализируемую пробу, см³ (20 см³);

m - масса анализируемого образца, г;

f - степень извлечения циклобутрифлурама из проб. Определяется конкретной лабораторией в процессе внедрения метода;

К_рп - коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).

11.2. Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости и удовлетворяет условие (5):

где: X₁, X₂ - результаты параллельных определений проб воды (почвы), мг/дм³ (мг/кг);

r - значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом .

При невыполнении условия (5) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12.1. Результат анализа представляют в виде формулы (6):

где: - среднее арифметическое результатов определений концентраций в пробах воды (почвы), признанных приемлемыми, мг/дм³ (мг/кг);

- граница абсолютной погрешности, мг/дм³ (мг/кг), рассчитанная по формуле (7):

где: - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание компонента в воде менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание циклобутрифлурама в воде - менее 0,001 мг/дм³" <8>.

--------------------------------

<8> Примечание: 0,001 мг/кг - предел количественного определения циклобутрифлурама в воде.

Если содержание компонента в почве менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание циклобутрифлурама в почве - менее 0,002 мг/кг" <9>.

--------------------------------

<9> Примечание: 0,002 мг/кг - предел количественного определения циклобутрифлурама в почве.

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <10>.

--------------------------------

<10> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 23.04.2002 N 161-ст.

Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Постановление Правительства Российской Федерации от 16.11.2020 N 1847 "Об утверждении перечня измерений, относящихся к сфере государственного регулирования обеспечения единства измерений".

3. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.

4. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

5. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".

6. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений".

7. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".

8. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений".

9. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

10. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

11. ГОСТ OIML R 111-1-2009 "Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

12. ГОСТ 29227-91 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

13. ГОСТ ISO 7886-1-2011 "Шприцы инъекционные однократного применения стерильные".

14. ГОСТ Р 52501-2005 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

15. ГОСТ 5848-73 "Кислота муравьиная. Технические условия".

16. ГОСТ 4233-77 "Натрий хлористый. Технические условия".

17. ГОСТ 4166-76 "Натрий сернокислый. Технические условия".

18. ГОСТ 1770-74 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

19. ГОСТ 12.1.007-76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

20. ГОСТ 12.1.019-2017 "Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

21. ГОСТ 12.1.004-91 "Пожарная безопасность. Общие требования".

22. ГОСТ 12.4.009-83 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

23. ГОСТ 22280-76 "Натрий лимоннокислый трехзамещенный. Технические условия".

24. ГОСТ Р 59024-2020 "Вода. Общие требования к отбору проб".

25. ГОСТ Р 70282-2022 "Поверхностные и подземные воды. Общие требования к отбору проб льда и атмосферных осадков".

26. ГОСТ Р 58595-2019 "Почвы. Отбор проб".

27. ГОСТ ISO 11464-2015 "Качество почвы. Предварительная подготовка проб для физико-химического анализа".