"МУК 4.1.4019-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств эмамектина бензоата в зеленой массе, семенах рапса, кукурузы, подсолнечника и сои, растительных маслах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 31.05.2024)

1. Разработаны "ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, Н.Е. Федорова, С.Д. Добрев, А.А. Ивченкова).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой "31" мая 2024 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания по методам контроля (далее - МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием (далее - МСД) для определения массовой концентрации эмамектина бензоата в зеленой массе, семенах рапса, кукурузы, подсолнечника и сои, растительных маслах в диапазоне 0,005 - 0,075 мг/кг без разбавления, 0,005 - 7,5 мг/кг с учетом разбавления в 100 раз.

2.1. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Эмамектин бензоат состоит из смеси, содержащей >= 90% эмамектина бензоата B_1a и <= 10% эмамектина бензоата B_1b.

Эмамектин бензоат B_1a - (10E,14E,16E,22Z)-(1R,4S,5'S,6S,6'R,8R,12S,13S,20R,21R,24S)-6'-[(S)-втор-бутил]-21,24-дигидрокси-5',11,13,22-тетраметил-2-оксо-3,7,19-триоксатетрацикло[15.6.1.1^4,8.0^20,24]пентакоза-10,14,16,22-тетраен-6-спиро-2'-(5',6'-дигидро-2'H-пиран)-12-ил 2,6-дидеокси-3-O-метил-4-O-(2,4,6-тридеокси-3-O-метил-4-метиламино--L-ликсо-гексапранозил)--L-арабиногексопиранозид <1>.

--------------------------------

<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, далее - IUPAC).

Эмамектин бензоат B_1b - (10E,14E,16E,22Z)-(1R,4S,5'S,6S,6'R,8R,12S,13S,20R,21R,24S)-21,24-дигидрокси-6'-изопропил-5',11,13,22-тетраметил-2-оксо-3,7,19-триоксатетрацикло[15.6.1.1^4,8.0^20,24]пентакоза-10,14,16,22-тетраен-6-спиро-2'-(5',6'-дигидро-2'H-пиран)-12-ил 2,6-дидеокси-3-O-метил-4-O-(2,4,6-тридеокси-3-O-метил-4-метиламино--L-ликсо-гексопиранозил)--L-арабиногексопиранозид <2>.

--------------------------------

<2> В соответствии с IUPAC.

Брутто-формула - C₅₆H₈₁NO₁₅ (B_1a); C₅₅H₇₉NO₁₅ (B_1b). Молекулярная масса 1008,3 (B_1a), 994,2 (B_1b).

2.2. Физические и химические свойства.

Кристаллический порошок, с органическим запахом, цвет от белого до грязно-белого. Температура плавления плюс 141 - 146 °C (с разложением при нагревании до плюс 300 °C). Давление паров 4·10^-3 мПа (плюс 25 °C). Плотность 1,2 г/см³. Растворимость в органических растворителях (при плюс 25 °C, г/дм³): октанол - 48, ацетон - 140, дихлорметан > 500, этилацетат - 81, метанол - 270, толуол - 26, гексан - 0,077, циклогексан - 0,23. Растворимость в воде при 25 °C - 0,31 г/дм³ (дистиллированная вода, pH 6,5), 0,32 (буферный раствор, pH 5), 0,024 г/дм³ (буферный раствор, pH 7), 0,0001 (буферный раствор, pH 9). Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода K_ow logP = 3,0 +/- 0,1 (pH 5), 5,0 +/- 0,2 (pH 7), 5,9 +/- 0,3 (pH 9). Гидролитически стабилен при pH 5 - 8 (плюс 25 °C).

2.3. Краткая токсикологическая характеристика.

Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс (самки) - 53 мг/кг, мышей (самки) - 120 - 165 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс более 2 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс более 2,12 - 4,44 мг/дм³ (4 ч).

2.4. Область применения препарата.

Эмамектин бензоат - несистемный инсектицид кишечно-контактного действия для защиты томатов, виноградной лозы, капусты и других культур от широкого спектра личинок лепидоптеры.

3.1. При соблюдении условий проведения анализа <3> и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

--------------------------------

<3> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002).

4.1. Методика основана на определении эмамектина бензоата методом ВЭЖХ с МСД.

4.2. Экстракцию эмамектина бензоата из зеленой массы и масел выполняют ацетонитрилом, из семян - ацетонитрилом с добавлением воды. Добавляют хлорид натрия и безводный сульфат натрия, вымораживают, фильтруют через мембранный шприцевой фильтр с размером пор не более 0,45 мкм.

4.3. Нижний предел измерения эмамектина бензоата в анализируемом объеме проб - 10 пг. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в таблицах 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-2017, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009-83. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 - 30 °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на высокоэффективном жидкостном хромато-масс-спектрометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, подвижной фазы, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

8.2. Приготовление компонента А подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 500 см³ добавляют 200 см³ деионизованной воды, пипеткой на 1 см³ вносят 0,5 см³ концентрированной муравьиной кислоты и доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.3. Кондиционирование хроматографической колонки.

Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (компонент А приготовлен по п. 8.2, компонент Б - ацетонитрил) 95:5 и скорости подачи растворителя 0,4 см³/мин не менее 15 мин.

8.4. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

8.4.1. Исходный раствор эмамектина бензоата для градуировки (концентрация 1000 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,0100 +/- 0,0005 г эмамектина бензоата, добавляют 5 - 7 см³ ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой темной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более полугода.

Растворы N 1 - 7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.4.2. Раствор N 1 эмамектина бензоата для градуировки (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1 см³ исходного раствора эмамектина бензоата с концентрацией 1000 мкг/см³ (п. 8.4.1), доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой темной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов методом "добавок".

8.4.3. Раствор N 2 эмамектина бензоата для градуировки и внесения (концентрация 1 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора эмамектина бензоата с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.4.2), доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C 1 неделю.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов методом "добавок".

8.4.4. Рабочие растворы N 3 - 7 эмамектина бензоата для градуировки (концентрация 0,002 - 0,05 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 10 см³ помещают по 0,02, 0,05, 0,075, 0,1 и 0,5 см³ градуировочного раствора N 2 с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 8.4.3), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 7 с концентрацией эмамектина бензоата 0,002, 0,005, 0,0075, 0,01 и 0,05 мкг/см³ соответственно. Растворы используют свежеприготовленными.

8.5. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации эмамектина бензоата, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам N 3 - 7 для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм³ каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 8.4.4, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.2. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площадь пика эмамектина бензоата.

8.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

Проводят измерения не менее двух образцов рабочих растворов для градуировки, содержание эмамектина бензоата в которых соответствует диапазону концентраций от 0,002 до 0,05 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение (1), (2):

где: A - величина расхождения, %;

X - концентрация эмамектина бензоата в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).

9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>, а также документами по стандартизации <5>.

--------------------------------

<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

<5> ГОСТ Р 56912-2016 "Корма зеленые. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 11.04.2016 N 258-ст; ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 18.12.1986 N 3979; ГОСТ 8808-2000 "Масло кукурузное. Технические условия", введенный в действие постановлением Госстандарта Российской Федерации от 26.07.2001 N 291-ст; ГОСТ 31759-2012 "Масло рапсовое. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1631-ст; ГОСТ 31760-2012 "Масло соевое. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1630-ст; ГОСТ 1129-2013 "Масло подсолнечное. Технические условия", введенный приказом Госстандарта от 28.10.2013 N 1253-ст.

9.2. Образцы зеленой массы, семян, масел хранят при температуре не выше минус 18 °C.

10.1. Навеску масла, измельченной зеленой массы или семян массой 5 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³. В пробу семян добавляют дополнительно 10 см³ воды. В пробирку заливают 10 см³ ацетонитрила, ставят на аппарат для встряхивания на 15 мин. Вносят в пробирку 3,5 г хлорида натрия и 2,5 г безводного сульфата натрия. Закрывают крышкой и помещают на аппарат для встряхивания на 3 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4000 об/мин. Отбирают верхний слой в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ и помещают в морозильную камеру на 2,5 - 3 ч при температуре не выше минус 18 °C. При необходимости образец повторно центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4000 об/мин. Экстракт (верхний слой в пробирке после центрифугирования) фильтруют через мембранный фильтр (размер пор не более 0,45 мкм) в виалу и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.2.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0,05 мкг/см³, разбавляют ацетонитрилом (не более чем в 100 раз).

10.2. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации при следующих режимных параметрах <6>:

- режим ионизации: электроспрей (англ. Electrospray ionization, ESI), электростатическое напряжение плюс 5500 В;

- полярность: положительная;

- режим работы: мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, MRM).

--------------------------------

<6> Примечание: параметры масс-спектрометрического детектора могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.

Параметры масс-спектрометрического детектора приведены в таблице 10.1.

- скорость сканирования: 100 мс;

- давление газовой завесы: 25 psi;

- давление газа 1:50 psi;

- давление газа 2:70 psi;

- температура осушающего газа: плюс 450 °C.

Условия хроматографирования:

- хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2 мм, модифицированная полярная C18 с TMS эндкеппингом, зернением 4 мкм;

- температура колонки: плюс 40 °C;

- скорость потока элюента: 0,4 см³/мин;

- объем вводимой пробы: 5 мм³;

- подвижная фаза: компонент А: 0,1% муравьиная кислота (приготовлена по п. 8.2); компонент Б: ацетонитрил.

Линейный диапазон детектирования 10 - 250 пг.

Режим элюирования: градиентный, приведен в таблице 10.2.

11.1. Содержание эмамектина бензоата в зеленой массе, семенах рапса, кукурузы, подсолнечника и сои, растительных маслах (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):

где: C - концентрация эмамектина бензоата, полученная по градуировочному графику в соответствии с площадью хроматографического пика, мкг/см³;

V - объем экстрагента, добавленного в матрицу, см³ (10 см³);

m - масса анализируемого образца, г (5 г);

Кр - коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).

11.2. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (4):

где: X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом .

При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12.1. Результат анализа представляют в виде формулы (5):

где: - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (6):

где: - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: содержание эмамектина бензоата в пробах - менее 0,005 мг/кг <7>.

--------------------------------

<7> Примечание: 0,005 мг/кг - предел количественного определения эмамектина бензоата в пробах в зеленой массе, семенах рапса, кукурузы, подсолнечника и сои, растительных маслах.

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с документами по стандартизации <8>. Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.

--------------------------------

<8> ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002; ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

3. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".

4. ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений".

5. ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".

6. ГОСТ Р ИСО 5725-5-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений".

7. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

8. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

9. ГОСТ OIML R 111-1-2009 "Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

10. ГОСТ 29227-91 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

11. ГОСТ ISO 7886-1-2011 "Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

12. ГОСТ Р 52501-2005 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

13. ГОСТ 5848-73 "Кислота муравьиная. Технические условия".

14. ГОСТ 4233-77 "Натрий хлористый. Технические условия".

15. ГОСТ 4166-76 "Натрий сернокислый. Технические условия".

16. ГОСТ 1770-74 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

17. ГОСТ 12.1.007-76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

18. ГОСТ 12.1.019-2017 "Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

19. ГОСТ 12.1.004-91 "Пожарная безопасность. Общие требования".

20. ГОСТ 12.4.009-83 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

21. ГОСТ Р 56912-2016 "Корма зеленые. Технические условия".

22. ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб".

23. ГОСТ 8808-2000 "Масло кукурузное. Технические условия".

24. ГОСТ 31759-2012 "Масло рапсовое. Технические условия".

25. ГОСТ 31760-2012 "Масло соевое. Технические условия".

26. ГОСТ 1129-2013 "Масло подсолнечное. Технические условия".

27. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.