"МУ 2.3.2.3687-21. 2.3.2. Гигиена. Гигиена питания. Продовольственное сырье и пищевые продукты. Медико-биологическая оценка безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов животного происхождения, включая рыб и птицу. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.02.2021)

1. Разработаны ФГБУН "ФИЦ питания и биотехнологии" (В.А. Тутельян, Н.В. Тышко, Э.О. Садыкова, С.И. Шестакова, М.Д. Требух, Н.С. Никитин, Л.В. Кравченко, Л.И. Авреньева, Г.В. Гусева, И.В. Аксенов, И.В. Гмошинский, А.А. Кочеткова, В.А. Саркисян); Российской академией наук (Г.Г. Онищенко); Институтом биоинженерии, ФГУ "ФИЦ Биотехнологии" РАН (М.В. Сухачева, И.В. Яковлева); Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова (М.П. Кирпичников).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой "12" февраля 2021 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУ) устанавливают порядок проведения оценки безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов животного происхождения, включая рыб и птицу (далее - ГМО животного происхождения), предназначенных для производства продовольственного сырья и пищевых продуктов.

1.2. Порядок оценки безопасности, изложенный в настоящих МУ, применяется на этапе государственной регистрации ГМО животного происхождения, впервые поступающих на продовольственный рынок Российской Федерации.

1.3. МУ разработаны с целью обеспечения единой, научно обоснованной системы оценки безопасности ГМО животного происхождения, и учитывают новые методические подходы, как используемые в Российской Федерации, так и рекомендованные международными организациями.

2.1. Общая характеристика ГМО животного происхождения содержит следующую информацию:

- позволяющую идентифицировать ГМО животного происхождения (вид, порода/линия, трансформационное событие, характеристика отличий от немодифицированного организма);

- об исходном организме (таксономическая характеристика, описание способа размножения и распространения, данные о токсических, аллергенных и других неблагоприятных свойствах);

- об организмах - донорах вносимых генов (таксономическая характеристика, история использования);

- о методах генетической модификации и способах получения ГМО животного происхождения (описание метода модификации, структуры векторов, структуры вставок);

- о ГМО животного происхождения (описание свойств, приобретенных организмами в результате модификаций, описание структур встроенных генетических конструкций и мест их локализации, характеристику экспрессии встроенных генов (экспрессия в процессе онтогенеза организма, экспрессия в структурных компонентах организма и др.);

- о генетической и фенотипической стабильности, полученные в результате исследований нескольких поколений ГМО животного происхождения.

3.1. Оценка безопасности ГМО животного происхождения проводится в соответствии с пунктами 3.1.1 - 3.1.5 и включает в себя следующие этапы:

- экспертный анализ и оценку данных, представленных заявителем, содержащих результаты ветеринарного освидетельствования ГМО животного происхождения; оценка композиционной эквивалентности ГМО животного происхождения и его традиционного аналога (содержание нутриентов, витаминов, минеральных веществ в аналогичных органах и тканях); результаты токсикологических, аллергологических и других исследований; результаты пострегистрационного мониторинга в стране-заявителе и других странах;

- экспертную оценку методов обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО животного происхождения;

- медико-генетическую оценку ГМО животного происхождения;

- оценку функционально-технологических свойств ГМО животного происхождения;

- медико-биологическую оценку безопасности ГМО животного происхождения;

- подтверждение соответствия показателей качества и безопасности ГМО животного происхождения (содержание токсичных элементов, радионуклидов и др.) требованиям технических регламентов Евразийского экономического союза (Таможенного Союза) <1>;

- формирование заключения о результатах оценки безопасности ГМО животного происхождения, оформленное в виде отчета о научно-исследовательской работе.

--------------------------------

<1> Технический регламент Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и/или соответствующих технических регламентов, устанавливающих обязательные требования к отдельным видам пищевой продукции.

3.2. Для проведения исследований, предусмотренных разделами 3.1.1 - 3.1.5 настоящих МУ, заявитель представляет образцы ГМО животного происхождения и их традиционных аналогов в количестве, достаточном для выполнения полного объема исследований.

3.1.1.1. Анализ результатов ветеринарного освидетельствования ГМО животного происхождения (выполненного на репрезентативной выборке ГМО обоего пола, содержавшихся в условиях, полностью удовлетворяющих физиологические потребности соответствующего вида организмов, включавшего результаты наблюдения за общим состоянием, поведением, скоростью роста на протяжении всего исследования с периодичностью, используемой в стандартной практике для соответствующего вида организмов, результаты обследований, выполненных в соответствии со стандартной ветеринарной практикой для соответствующего вида организмов - клинические осмотры, лабораторные исследования крови (гематологические и биохимические), мочи, кала, инструментальные исследования (ЭКГ, УЗИ внутренних органов, рентгенография и др.), оценку репродуктивной функции - подтверждение возможности размножения ГМО, и др.).

3.1.1.2. Оценка композиционной эквивалентности проводится на основании информации о результатах сравнения химического состава ГМО животного происхождения с химическим составом его традиционного аналога, представленной заявителем (содержание белка; аминокислотный состав; содержание жира; жирнокислотный состав; содержание углеводов; макро- и микроэлементов; биологически активных веществ; аллергенов, характерных для исходного вида/породы/линии; содержание антропогенных и природных контаминантов - токсичных элементов, пестицидов, радионуклидов, антибиотиков и др.; содержание антинутриентов и других веществ, характерных для организмов исходного вида/породы/линии).

Перечень показателей варьируется в зависимости от свойств изучаемого организма.

Оценка композиционной эквивалентности ГМО животного происхождения и его традиционного аналога проводится с учетом биологических колебаний значений показателей, характерных для организмов данного вида, и справочных данных о химическом составе исходного вида (породы, линии).

В случае если целью генетической модификации является изменение метаболизма, этот фактор необходимо учитывать при оценке композиционной эквивалентности ГМО животного происхождения и его традиционного аналога.

3.1.1.3. Анализ результатов токсикологических исследований проводится на основании сведений, представленных заявителем, включающих:

- результаты оценки безопасности белков, определяющих проявление заданных признаков ГМО животного происхождения (молекулярная и биохимическая характеристика белков; наличие или отсутствие гомологии с токсинами белковой природы, а также с белками, обладающими фармакологической или иной биологической активностью (при использовании международных баз данных, содержащих информацию о белках <2>); изучение стабильности белков при обработке, хранении, технологической переработке; влияние температуры и pH, возможные модификации и/или образование стабильных белковых фрагментов в результате различных воздействий; устойчивость белков к обработке протеолитическими ферментами в эксперименте in vitro; исследования острой пероральной токсичности белков в эксперименте на грызунах и др.);

- результаты оценки безопасности нативного продукта (данные исследований на грызунах, данные исследований на молодых быстрорастущих животных (цыплятах-бройлерах, ягнятах и др.) в случае, если такие исследования проводились;

- результаты других токсикологических исследований.

--------------------------------

<2> Например, Protein Information Resource (PIR), European Molecular Biology Laboratory (EMBL), Universal Protein Resource (SwissProt), International Nucleotide Sequence Database Collaboration (GenBank) и др.

3.1.1.4. Анализ результатов аллергологических исследований проводится на основании сведений, представленных заявителем, включающих:

- результаты оценки аллергенных свойств белков, определяющих проявление заданных признаков ГМО животного происхождения (сравнение с известными аллергенами с использованием баз данных, содержащих информацию о трехмерной структуре и функции известных аллергенов и родственных им белков); определение потенциальной аллергенности белков в иммунохимических исследованиях in vitro с использованием иммуноглобулинов E, выделенных из сыворотки крови пациентов, страдающих аллергией; определение устойчивости к воздействию протеолитических ферментов (пепсина и др.); скрининговые исследования с использованием сывороток крови пациентов, страдающих аллергией; дополнительные исследования (в том числе in vivo);

- результаты аллергологических исследований нативного продукта (сравнение набора аллергенов исследуемого ГМО животного происхождения с набором аллергенов его традиционного аналога и др.) в случае, если такие исследования проводились;

- результаты других аллергологических исследований.

3.1.1.5. Анализ результатов других исследований, включая результаты применения новейших аналитических методов, таких как профильные технологии и др.

3.1.1.6. Анализ результатов пострегистрационного мониторинга, осуществляемого в странах, где ГМО животного происхождения был зарегистрирован ранее, проводится в случае, если в процессе мониторинга были получены данные о незаданных эффектах генетической модификации.

3.1.1.7. Анализ научных данных о ГМО животного происхождения, представленных в научной литературе за весь период его использования.

3.1.2.1. Основным методом, используемым для обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО животного происхождения, является полимеразная цепная реакция (далее - ПЦР) и ее модификации. Также для обнаружения ГМО животного происхождения в пищевых продуктах и продовольственном сырье, не подвергавшихся технологической переработке, могут быть использованы иммунологические методы детекции специфичных для ГМО белков.

3.1.2.2. Экспертная оценка методов идентификации ГМО животного происхождения направлена на подтверждение их адекватности инструментальной и методической базе, используемой в учреждениях Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека для контроля за обращением ГМО животного происхождения и маркировкой пищевых продуктов, содержащих ГМО животного происхождения.

3.1.2.3. Экспертная оценка методов обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО животного происхождения в пищевых продуктах проводится на основании сведений, представленных заявителем, включающих:

- метод идентификации одного или нескольких трансформационных событий (событие-специфичные тест-системы);

- метод количественного определения одного или нескольких трансформационных событий (событие-специфичные тест-системы);

- протоколы проведения анализов;

- описание праймеров, ДНК-зондов и других необходимых реактивов;

- стандартные образцы состава и свойств.

3.1.3.1. Медико-генетическая оценка ГМО животного происхождения включает проверку присутствия всех заявленных генетических конструкций методом ПЦР.

3.1.3.2. Медико-генетические исследования проводятся на основании сведений, представленных заявителем, включающих:

- описание молекулярной структуры всех заявленных генетических конструкций (нуклеотидная последовательность);

- метод идентификации и количественного определения одного или нескольких трансформационных событий;

- протокол проведения анализа;

- описание праймеров, ДНК-зондов и других необходимых реактивов;

- стандартные образцы состава и свойств.

3.1.3.3. Заключение о результатах медико-генетической оценки ГМО животного происхождения оформляется в виде отчета о научно-исследовательской работе, включающего основные сведения, на основании которых можно судить о присутствии всех заявленных генетических конструкций.

3.1.4.1. Исследования проводятся на основании сравнения функционально-технологических характеристик ГМО животного происхождения и его традиционного аналога.

3.1.4.2. Изучаемые функционально-технологические характеристики (в соответствии со стандартами на конкретный вид исследуемых продуктов):

- сравнительная органолептическая оценка;

- сравнительная оценка структурно-механических характеристик исследуемого продукта и/или его отдельных фракций;

- сравнительная оценка физико-химических характеристик исследуемого продукта и/или его отдельных фракций.

3.1.4.3. Заключение о результатах исследований оформляется в виде отчета о научно-исследовательской работе, включающего основные сведения, на основании которых можно судить о функционально-технологических характеристиках ГМО животного происхождения в сравнении с традиционным аналогом.

3.1.5.1. Исследования проводятся на основании сравнения ГМО животного происхождения с его традиционным аналогом по следующим параметрам: гигиеническая характеристика, токсикологические, генотоксикологические, аллергологические свойства, влияние на репродуктивную функцию и развитие потомства.

Наиболее предпочтительный материал для исследований определяется в зависимости от вида ГМО (животное, птица, рыба) - мясо, молоко, субпродукты, яйца, икра и т.п. При выборе материала следует учитывать, во-первых, соотношение содержания белка, определяющего проявление заданного признака, к общему содержанию белка в материале, во-вторых, предполагаемую частоту использования в рационе человека, в-третьих, степень технологической обработки, традиционно используемой для данного пищевого продукта.

3.1.5.2. Гигиеническая характеристика ГМО животного происхождения включает определение показателей качества и безопасности. Перечень показателей безопасности формируется на основании требований технических регламентов Евразийского экономического союза (Таможенного Союза) <3>.

--------------------------------

<3> Технический регламент Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и/или соответствующих технических регламентов, устанавливающих обязательные требования к отдельным видам пищевой продукции.

Изучаемые показатели:

- содержание токсичных элементов;

- содержание пестицидов;

- содержание диоксинов;

- содержание гистамина;

- содержание нитрозаминов (сумма N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина);

- содержание полихлорированных бифенилов;

- содержание ветеринарных (зоотехнических) препаратов, стимуляторов роста животных (в том числе гормональных препаратов);

- содержание антимикробных средств;

- содержание антипротозойных средств;

- содержание остатков инсектицидов;

- содержание радионуклидов;

- микробиологические показатели;

- другие показатели (в случае необходимости).

3.1.5.3. Перечень показателей качества формируется на основании свойств соответствующего организма, а также анализа представленных заявителем материалов. В случае если заявителем представлены исчерпывающие данные по оценке композиционной эквивалентности ГМО животного происхождения и его традиционного аналога (содержание белка, аминокислотный состав, содержание жира, жирнокислотный состав, углеводный состав, содержание витаминов, макро- и микроэлементов, специфических компонентов, биологически активных веществ, антинутриентов и других веществ, характерных для организмов данного вида), исследования могут быть ограничены определением влажности, золы, содержания белка, жира, углеводов.

3.1.5.4. В случае если генетическая модификация направлена на изменение химического состава ГМО животного происхождения, рекомендуется провести исследования, подтверждающие заявленные изменения.

3.1.5.5. Изучение репродуктивной токсичности и токсичности ГМО животного происхождения проводится в эксперименте на крысах линии Вистар. Токсикологические исследования включают изучение репродуктивной функции крыс поколения F₀, пре- и постнатальное развитие потомства поколения F₁, а также оценку физиолого-биохимических показателей крыс поколения F₀ (на основании данных о динамике массы тела, об абсолютной и относительной массе внутренних органов; данных гематологических, морфологических и биохимических исследований, состояния антиоксидантного статуса и функционального состояния систем, осуществляющих защиту организма от воздействия токсичных соединений экзо- и эндогенного происхождения). Схема проведения эксперимента представлена в таблице 1.

На протяжении эксперимента животные получают полусинтетический казеиновый рацион (далее - ПКР). Исследуемый ГМО животного происхождения и его традиционный аналог включают в состав корма в максимально возможном количестве, не нарушающем баланс основных пищевых веществ. Замена ингредиентов рациона проводится с учетом содержания белков, жиров и углеводов во вводимом продукте при соблюдении принципа изокалорийности.

Продуктовый набор и химический состав базового ПКР представлены в таблицах 2 - 3.

Физиолого-биохимические показатели состояния здоровья крыс поколения F₀ оценивают на основании данных о динамике массы тела, об абсолютной и относительной массе внутренних органов; данных гематологических, морфологических и биохимических исследований, состояния антиоксидантного статуса и функционального состояния систем, осуществляющих защиту организма от воздействия токсичных соединений экзо- и эндогенного происхождения. Перечень исследуемых показателей и сроки отбора материала для исследований представлены в таблицах 4 - 12.

Репродуктивную функцию оценивают по генеративной и эндокринной функции гонад родительских животных поколения F₀, пренатальному и постнатальному развитию потомства поколения F₁. Перечень исследуемых показателей и сроки отбора материала для исследований представлены в таблицах 13 - 15.

В раздел отчета по результатам изучения репродуктивной токсичности и токсичности ГМО животного происхождения рекомендуется включать цифровые данные в форме таблиц, содержащих основные сведения, необходимые для суждения о наличии или отсутствии у исследуемого ГМО неблагоприятного действия на интегральные, физиолого-биохимические показатели состояния здоровья, репродуктивную функцию и развитие потомства подопытных животных.

3.1.5.6. Иммунологические исследования ГМО животного происхождения проводятся в эксперименте на мышах линий CBA и C57Bl/6 и включают изучение его иммуномодулирующих и сенсибилизирующих свойств по четырем тестам:

- действие на гуморальное звено иммунитета - в тесте определения уровня гемагглютининов к эритроцитам барана;

- действие на клеточное звено иммунитета - в реакции гиперчувствительности замедленного типа (далее - ГЗТ) к эритроцитам барана;

- действие как сенсибилизирующего агента - в тесте чувствительности к гистамину;

- действие на естественную резистентность мышей к Salmonella typhimurium (сальмонеллы мышиного тифа).

В таблице 16 представлены сравнительные характеристики мышей линий CBA и C57Bl/6. Схема проведения эксперимента представлена в таблице 17.

Исследования начинают через 21 день с момента перевода мышей на экспериментальные рационы. В течение эксперимента проводят наблюдения за поедаемостью корма и общим состоянием животных.

3.1.5.6.1. Влияние ГМО животного происхождения на гуморальный иммунный ответ оценивают на основании титров антител после иммунизации эритроцитами барана мышей высокоотвечающей (CBA) и низкоотвечающей (C57BL/6) линий. Для иммунизации животных следует использовать минимальные дозы (5 x 10⁶) антигена.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 45 животных) и опытной (не менее 45 животных) групп обеих линий внутрибрюшинно вводят 0,5 мл эритроцитов барана (10 млн клеток/мл). Отбор крови для исследований проводят на 7-й, 10-й и 14-й день после введения эритроцитов барана. Сыворотку крови титруют общепринятым методом в реакции гемагглютинации [19]. Реакция основана на способности антител, содержащихся в сыворотке крови иммунизированных животных, склеивать (агглютинировать) эритроциты барана. В 96-луночных плоскодонных планшетах готовят двукратные разведения исследуемой сыворотки в объеме 0,5 мл, начиная с разведения 1:10. В контрольную лунку вносят 0,5 мл физиологического раствора. Ко всем лункам добавляют 0,5 мл 1% эритроцитов барана. Учет реакции ведется после инкубации планшетов в термостате в течение 2 ч при 37 °C. При положительном результате эритроциты оседают на дне лунки планшета в виде зонтика, при отрицательном - в виде пуговки. За титр принимают то последнее разведение исследуемой сыворотки, при которой еще наблюдается положительный результат. Контрольная лунка должна быть отрицательной. Полученные данные обрабатывают методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента. Результаты приводятся в виде M +/- m, где M - выборочное среднее измеряемых величин, m - стандартная ошибка.

3.1.5.6.2. Влияние ГМО животного происхождения на клеточный иммунный ответ оценивают на основании реакции гиперчувствительности замедленного типа. При выполнении теста антиген вводят двукратно: для сенсибилизации и для разрешения.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 15 животных) и опытной (не менее 15 животных) групп обеих линий подкожно в межлопаточную область вводят 0,5 мл эритроцитов барана (20 млн клеток/мл). Через пять дней всем мышам в подушечку одной задней лапы вводят разрешающую дозу эритроцитов барана - 0,02 мл (100 млн клеток/мышь); в контрлатеральную лапу - 0,02 мл 0,95%-го раствора хлорида натрия. Местную воспалительную реакцию оценивают через 18 - 20 часов путем определения массы опытной и контрольной лапок. Интенсивность местной реакции определяют по индексу реакции [19].

3.1.5.6.3. Действие ГМО животного происхождения как сенсибилизирующего агента оценивают в тесте чувствительности к гистамину.

Через 21 день эксперимента мышам контрольной (не менее 15 животных) и опытной (не менее 15 животных) групп обеих линий внутрибрюшинно вводят гистамин гидрохлорид (2,5 мг/мышь в 0,5 мл физиологического раствора). Реакцию учитывают через 24 часа по проценту гибели мышей [25].

3.1.5.6.4. Влияние ГМО животного происхождения на естественную резистентность мышей к Salmonella typhimurium оценивают на модели внутрибрюшинного заражения мышей десятикратно отличающимися дозами Salmonella typhimurium штамм 415. Через 21 день эксперимента мышей контрольной (не менее 45 животных) и опытной (не менее 45 животных) групп обеих линий заражают тремя дозами культуры: 1 000, 100, 10 микробных клеток/мышь. После заражения за животными наблюдают в течение 21 дня. Вычисляют ЛД₅₀, а также процент гибели животных по каждой дозе, затем проводят сравнительный анализ результатов [2].

3.1.5.7. Аллергологические исследования ГМО животного происхождения проводятся в эксперименте на лабораторных животных: потенциальную аллергенность оценивают, определяя тяжесть протекания системной анафилаксии и уровень циркулирующих сенсибилизирующих антител (субклассов IgG1 + IgG4) у крыс, получающих в составе рациона исследуемый ГМО (группа "опыт") и его традиционный аналог (группа "контроль"). Метод основан на количественной сравнительной оценке тяжести реакции системной анафилаксии, возникающей при внутрибрюшинной (далее - в/б) сенсибилизации взрослых крыс пищевым антигеном - овальбумином куриного яйца (далее - ОВА) с последующим введением сенсибилизированным животным разрешающей дозы того же белка [32]. Схема проведения эксперимента представлена в таблице 18.

На 1-й, 3-й, 5-й день опыта крыс в/б сенсибилизируют ОВА, а на 21-й день эксперимента вводят дополнительную ("бустерную") дозу антигена, уменьшенную в 10 раз в сравнении с первоначальной. Кормление рационами продолжают до утра 29-го дня эксперимента и затем вводят раствор ОВА, после чего оценивают на протяжении 24 ч тяжесть развивающейся реакции анафилаксии по показателям числа летальных реакций, общего числа судорожных реакций и величины анафилактического индекса [35]. Непосредственно перед введением разрешающей дозы у крыс отбирают 0,1 - 0,2 мл крови из хвостовой вены для определения уровня специфических антител.

Иммуноферментное определение уровней циркулирующих специфических антител к ОВА проводят согласно проводят по протоколу, описанному в статье Гмошинского И.В. и др., 1994 [3]. Статистическую обработку результатов проводят согласно U-критерию Фишера для долевых показателей, непараметрическим критериям хи-квадрат и Манна-Уитни.

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990. 384 с.

2. Ведомости фармакологического комитета. 1999. N 1. С. 31 - 36.

3. Гмошинский И.В., Кржечковская В.В., Пятницкий Н.Н.//Вопросы питания. 1994. N 1, 2. С. 30 - 33.

4. Дингл Дж. Лизосомы. Методы исследования. М.: Мир, 1980. 344 с.

5. Западнюк И.П. и др. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. 3-е изд. Киев: Вища школа, 1983. 383 с.

6. Киселева А.Ф. и др. Морфофункциональные методы исследования в норме и при патологии. К.: Здоров'я, 1983. 163 с.

7. Костюк В.А., Потапович А.И.//Вопр. мед. химии. 1987. N 3. С. 115 - 118.

8. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учеб. пособие для биол. спец. вузов. 4-е изд., перераб. и доп. М.: Высш. шк., 1990. 352 с.

9. Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М.: Мир, 1982. 272 с.

10. Луппа Х. Основы гистохимии. М.: Мир, 1980. 343 с.

11. Мальцев Г.Ю., Васильев А.В.//Вопр. мед. химии. 1994. N 2. С. 56 - 58.

12. Мальцев Г.Ю., Орлова Л.А.//Вопр. мед. химии. 1994. N 2. С. 59 - 61.

13. Меньшиков В.В. (Ред.) Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987. 368 с.

14. Микроскопическая техника: Руководство/Под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Перова. М.: Медицина, 1996. 544 с.

15. Ноздрачев А.Д., Поляков Е.Л. Анатомия крысы. С.-Пб.: Лань, 2001. 464 с.

16. Пальцев М.А., Аничков Н.М. Патологическая анатомия. В 2-х т. М.: Медицина, 2000. 1944 с.

17. Полак Д., Норден С.В. Введение в иммуноцитохимию: современные методы и проблемы. М.: Мир, 1987. 74 с.

18. Применение метода щелочного гель-электрофореза изолированных клеток для оценки генотоксических свойств природных и синтетических соединений: Методические рекомендации. М., 2006. 27 с.

19. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств/Под ред. Миронова А.Н. Ч. 1. М.: Гриф и К, 2012. 944 с.

20. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ/Под ред. Хабриева Р.У. 2-е изд., перераб. и доп. М.: ОАО "Издательство "Медицина", 2005. 832 с.

21. Струков А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия. М.: Медицина, 1993. 688 с.

22. Burchell B., Weatherill P.//Methods Enzymol. 1981. Vol. 77. P. 169 - 176.

23. Burke M.D., Mayer R.T.//Chem.-Biol. Interact. 1983. Vol. 45. P. 243 - 258.

24. Ernster L., Nordenbrandt K.//In Methods in Enzymology. Oxidation and phosphorilation. Estabrook R.W., Pullman M.E., eds., Ac. Press N.Y. 1967. Vol. 10. P. 574 - 580.

25. FAO/WHO Protein quality evaluation. Report of a Joint FAO/WHO Expert Consultation Held in Bethesda, Md, USA, 4 - 8 December, 1989, FAO Rome. 2 p.

26. Habig W.H., Pabst M.J., Jacoby W.B.//J. Biol. Chem. 1974. Vol. 294. P. 7130 - 7139.

27. Michara, M., Uchiyama, M., Fukuzawa, K. 1980.//Biochem. Med. Vol. 23, Issue 3. P. 302 - 311.

28. Mills G.C.//J. Biol. Chem. 1959. Vol. 234. N 3. P. 502 - 506.

29. Niashikimi M., Rao N., Jagi K.//Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. Vol. 46. P. 849 - 854.

30. Omura T., Sato R.//Biol. Chem. 1964. Vol. 239. P. 2370 - 2378.

31. Oshino N., Chance B.//Arch. Biochem. Biophys. 1973. Vol. 154. N 1. P. 117 - 131.

32. Stokes C.R., Miller B.G., Bourne F.J. Animal models of food sensitivity. Food allergy and intolerance. London. 1987. P. 286 - 300.

33. Tillotson J.A., Sauberlich H.E.//J. Nutrition. 1971. Vol. 101. P. 1459 - 1466.

34. Umegaki K., Saito K., Kubota Y. et al.//Jpn. J. Pharmacol. 2002. Vol. 90. P. 345 - 351.

35. Weigle W., Cochrane C., Dixon F.//J. Immunology. 1960. Vol. 85. P. 469 - 477.

36. Weingard K., Brown G., Hall R. et al.//Fundamental and applied toxicology. 1996. Vol. 29. P. 198 - 201.