"МУК 4.1.3657-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Многокомпонентное определение остаточных количеств пестицидов различных химических классов в цитрусовых хроматографическими методами. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 26.10.2020)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, О.Е. Егорченкова, М.С. Гречина, Н.А. Степанова, К.С. Курпединов, А.В. Суслова, Д.Н. Соболев, Л.П. Мухина).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 26 октября 2020 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения методов высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тройным квадрупольным масс-детектором (далее - ВЭЖХ-МС/МС) для определения в цитрусовых (мандарин, апельсин, лимон, грейпфрут, лайм и т.д.) массовых концентраций азоксистробина, диметоата, дитианона, дифеноконазола, дифлубензурона, имазалила, имидаклоприда, карбендазима, клотианидина, клофентезина, крезоксим-метила, метомила, ометоата, пидифлуметофена, пираклостробина, пириметанила, пирипроксифена, прохлораза, тиабендазола, тиаметоксама, трифлоксистробина, фенитротиона, флудиоксонила, хлорантранилипрола, эпоксиконазола в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг; а также газожидкостной хроматографии с масс-селективным детектором (далее - ГЖХ-МС) для определения массовых концентраций фипронила, фипронил-сульфона в диапазоне 0,005 - 0,050 мг/кг; бифентрина, дельтаметрина, диазинона, диметоата, дифлубензурона, имазалила, карбосульфана, карбофурана, 3-кето-карбофурана, малатиона, металаксила, метрибузина, ометоата, пиридабена, пириметанила, пиримифос-метила, пропиконазола, тебуконазола, тиабендазола, триадименола, триадимефона, трифлуралина, фенитротиона, флудиоксонила, фозалона, фосмета, хлороталонила, цигалофоп-бутила, альфа-циперметрина, ципродинила, эпоксиконазола в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг; гекситиазокса в диапазоне 0,05 - 0,50 мг/кг.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области безопасности и качества пищевой продукции и продовольственного сырья.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Характеристика веществ и основные физико-химические свойства представлены в табл. 2.1.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

3.1. При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности p = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 и 3.2 для соответствующих диапазонов концентраций.

3.2. Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 3.3 и 3.4.

4.1. Метод основан на определении азоксистробина, диметоата, дитианона, дифеноконазола, дифлубензурона, имазалила, имидаклоприда, карбендазима, клотианидина, клофентезина, крезоксим-метила, метомила, ометоата, пидифлуметофена, пираклостробина, пириметанила, пирипроксифена, прохлораза, тиабендазола, тиаметоксама, трифлоксистробина, фенитротиона, флудиоксонила, хлорантранилипрола, эпоксиконазола при совместном присутствии с помощью ВЭЖХ на обращенной фазе с тройным квадрупольным масс-детектором в режиме динамического мультиреакционного мониторинга; а также бифентрина, гекситиазокса, дельтаметрина, диазинона, диметоата, дифлубензурона, имазалила, карбосульфана, карбофурана, 3-кето-карбофурана, малатиона, металаксила (мефеноксам, металаксил M), метрибузина, ометоата, пиридабена, пириметанила, пиримифос-метила, пропиконазола, тебуконазола, тиабендазола, триадименола, триадимефона, трифлуралина, фенитротиона, фипронила, фипронил-сульфона, флудиоксонила, фозалона, фосмета, хлороталонила, цигалофоп-бутила, альфа-циперметрина, ципродинила и эпоксиконазола при совместном присутствии методом капиллярной ГЖХ с масс-селективным детектором.

4.2. Экстракцию веществ из анализируемых проб выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, цитрата натрия и натрия лимоннокислого двузамещенного 1,5-водного); очистку экстрактов проводят методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе аминов, октадецилсилана.

4.3. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовые и жидкостные хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать правила безопасности <2>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<2> Федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением", утвержденные Приказом Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536.

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе с масс-селективным детектором и жидкостном хроматографе с тройным квадрупольным масс-детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом и жидкостном хроматографах проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на приборы.

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, смеси растворителей для растворения проб, компонентов подвижной фазы (метод ВЭЖХ-МС/МС), смеси солей для экстракции и смеси сорбентов для очистки экстрактов, установление градуировочных характеристик, отбор проб.

8.2. Очистка органических растворителей

8.2.1. Ацетон. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонке с числом теоретических тарелок не менее 30.

8.2.2. Ацетонитрил. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют; непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3. Приготовление раствора уксусной кислоты в ацетонитриле с объемной долей 1% (1%-й раствор). В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 300 - 400 см³ ацетонитрила, вносят 10 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.4. Приготовление компонентов подвижной фазы для ВЭЖХ

8.4.1. Компонент А: раствор 0,05% (вес/объем) формиата аммония, 0,01% муравьиной кислоты (по объему) в воде.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают (0,50 +/- 0,01) г формиата аммония, растворяют в 300 - 400 см³ бидистиллированной воды, вносят 0,1 см³ муравьиной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

8.4.2. Компонент Б: раствор 0,01% (по объему) муравьиной кислоты в метаноле.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 300 - 400 см³ метанола, вносят 0,1 см³ муравьиной кислоты, доводят метанолом до метки, перемешивают.

Растворы хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.5. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

8.5.1. Серия N 1 (метод ВЭЖХ-МС/МС)

8.5.1.1. Исходные растворы азоксистробина, диметоата, дитианона, дифеноконазола, дифлубензурона, имазалила, имидаклоприда, карбендазима, клотианидина, клофентезина, крезоксим-метила, метомила, ометоата, пидифлуметофена, пираклостробина, пириметанила, пирипроксифена, прохлораза, тиабендазола, тиаметоксама, трифлоксистробина, фенитротиона, флудиоксонила, хлорантранилипрола, эпоксиконазола для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по (0,0100 +/- 0,0005) г каждого вещества (раздельно), растворяют в 50 - 60 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Растворы хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение 3 месяцев.

Рабочие растворы готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.

8.5.1.2. Градуировочный раствор N 1 азоксистробина, диметоата, дитианона, дифеноконазола, дифлубензурона, имазалила, имидаклоприда, карбендазима, клотианидина, клофентезина, крезоксим-метила, метомила, ометоата, пидифлуметофена, пираклостробина, пириметанила, пирипроксифена, прохлораза, тиабендазола, тиаметоксама, трифлоксистробина, фенитротиона, флудиоксонила, хлорантранилипрола, эпоксиконазола для градуировки и внесения (концентрация 1 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают по 1 см³ исходных растворов каждого вещества с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.5.1.1), доводят ацетонитрилом до метки.

Градуировочный раствор хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение месяца.

Раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов измерений.

8.5.1.3. Рабочие растворы N 2 - 6 азоксистробина, диметоата, дитианона, дифеноконазола, дифлубензурона, имазалила, имидаклоприда, карбендазима, клотианидина, клофентезина, крезоксим-метила, метомила, ометоата, пидифлуметофена, пираклостробина, пириметанила, пирипроксифена, прохлораза, тиабендазола, тиаметоксама, трифлоксистробина, фенитротиона, флудиоксонила, хлорантранилипрола, эпоксиконазола (концентрация 0,01 - 0,10 мкг/см³). В мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1,0; 2,0; 5,0; 8,0 и 10 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 8.5.1.2), доводят до метки 1%-м раствором уксусной кислоты в ацетонитриле, приготовленным по п. 8.3, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией каждого вещества 0,01; 0,02; 0,05; 0,08 и 0,1 мкг/см³ соответственно.

Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение недели.

8.5.2. Серия N 2 (метод ГЖХ-МС)

8.5.2.1. Исходные растворы бифентрина, гекситиазокса, дельтаметрина, диазинона, диметоата, дифлубензурона, имазалила, карбосульфана, карбофурана, 3-кето-карбофурана, малатиона, металаксила (мефеноксам, металаксил M), метрибузина, ометоата, пиридабена, пириметанила, пиримифос-метила, пропиконазола, тебуконазола, тиабендазола, триадименола, триадимефона, трифлуралина, фенитротиона, фипронила, фипронил-сульфона, флудиоксонила, фозалона, фосмета, хлороталонила, цигалофоп-бутила, альфа-циперметрина, ципродинила и эпоксиконазола для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г каждого вещества (раздельно), растворяют в 50 - 60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Растворы хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение 3 месяцев.

Рабочие растворы готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.

8.5.2.2. Раствор N 1' гекситиазокса для градуировки и внесения (концентрация 5,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 5 см³ исходного раствора вещества с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.5.2.1), разбавляют ацетоном до метки.

Градуировочный раствор N 1' хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение месяца.

Раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов измерений.

8.5.2.3. Растворы N 2' бифентрина, дельтаметрина, диазинона, диметоата, дифлубензурона, имазалила, карбосульфана, карбофурана, 3-кето-карбофурана, малатиона, металаксила (мефеноксам, металаксил M), метрибузина, ометоата, пиридабена, пириметанила, пиримифос-метила, пропиконазола, тебуконазола, тиабендазола, триадименола, триадимефона, трифлуралина, фенитротиона, фипронила, фипронил-сульфона, флудиоксонила, фозалона, фосмета, хлороталонила, цигалофоп-бутила, альфа-циперметрина, ципродинила и эпоксиконазола для градуировки и внесения (концентрация 1,0 мкг/см³). В мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1 см³ исходного раствора каждого вещества (раздельно) с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.5.2.1), разбавляют ацетоном до метки.

Градуировочные растворы N 2' хранят в морозильной камере при температуре -18 °C в течение месяца.

Растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов измерений.

8.5.2.4. Рабочие растворы N 3' - 7' для градуировки фипронила, фипронил-сульфона (диапазон концентраций 0,005 - 0,05 мкг/см³), бифентрина, дельтаметрина, диазинона, диметоата, дифлубензурона, имазалила, карбосульфана, карбофурана, 3-кето-карбофурана, малатиона, металаксила (мефеноксам, металаксил M), метрибузина, ометоата, пиридабена, пириметанила, пиримифос-метила, пропиконазола, тебуконазола, тиабендазола, триадименола, триадимефона, трифлуралина, фенитротиона, флудиоксонила, фозалона, фосмета, хлороталонила, цигалофоп-бутила, альфа-циперметрина, ципродинила и эпоксиконазола (диапазон концентраций 0,01 - 0,1 мкг/см³), гекситиазокса (диапазон концентраций 0,05 - 0,5 мкг/см³). В мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 0,5; 1,0; 2,0; 4,0 и 5,0 см³ рабочих растворов фипронила, фипронил-сульфона (раздельно) с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 8.5.2.3) и гекситиазокса с концентрацией 5,0 мкг/см³ (п. 8.5.2.2); 1,0; 2,0; 5,0; 8,0 и 10,0 см³ рабочих растворов бифентрина, дельтаметрина, диазинона, диметоата, дифлубензурона, имазалила, карбосульфана, карбофурана, 3-кето-карбофурана, малатиона, металаксила (мефеноксам, металаксил M), метрибузина, ометоата, пиридабена, пириметанила, пиримифос-метила, пропиконазола, тебуконазола, тиабендазола, триадименола, триадимефона, трифлуралина, фенитротиона, флудиоксонила, фозалона, фосмета, хлороталонила, цигалофоп-бутила, альфа-циперметрина, ципродинила и эпоксиконазола (раздельно) с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 8.5.2.3), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3' - 7' фипронила, фипронил-сульфона с концентрацией каждого вещества 0,005; 0,01; 0,02; 0,04 и 0,05 мкг/см³; гекситиазокса - 0,05; 0,1; 0,2; 0,4 и 0,5 мкг/см³; бифентрина, дельтаметрина, диазинона, диметоата, дифлубензурона, имазалила, карбосульфана, карбофурана, 3-кето-карбофурана, малатиона, металаксила (мефеноксам, металаксил M), метрибузина, ометоата, пиридабена, пириметанила, пиримифос-метила, пропиконазола, тебуконазола, тиабендазола, триадименола, триадимефона, трифлуралина, фенитротиона, флудиоксонила, фозалона, фосмета, хлороталонила, цигалофоп-бутила, альфа-циперметрина, ципродинила и эпоксиконазола с концентрацией каждого вещества 0,01; 0,02; 0,05; 0,08 и 0,1 мкг/см³.

Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение недели.

8.6. Приготовление смеси солей для экстракции. Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного 1,5-водного, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).

Примечание: возможно использование коммерческих наборов солей для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г.

8.7. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов. Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ помещают (25 +/- 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (150 +/- 4) мг магния сернокислого и (150 +/- 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание: возможно использование коммерческих дисперсионных наборов для фруктов и овощей с маслом и воском, помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 15 см³.

8.8. Установление градуировочных характеристик

Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площадей пиков от концентрации азоксистробина, диметоата, дитианона, дифеноконазола, дифлубензурона, имазалила, имидаклоприда, карбендазима, клотианидина, клофентезина, крезоксим-метила, метомила, ометоата, пидифлуметофена, пираклостробина, пириметанила, пирипроксифена, прохлораза, тиабендазола, тиаметоксама, трифлоксистробина, фенитротиона, флудиоксонила, хлорантранилипрола, эпоксиконазола (метод ВЭЖХ-МС/МС), а также бифентрина, гекситиазокса, дельтаметрина, диазинона, диметоата, дифлубензурона, имазалила, карбосульфана, карбофурана, 3-кето-карбофурана, малатиона, металаксила (мефеноксам, металаксил M), метрибузина, ометоата, пиридабена, пириметанила, пиримифос-метила, пропиконазола, тебуконазола, тиабендазола, триадименола, триадимефона, трифлуралина, фенитротиона, фипронила, фипронил-сульфона, флудиоксонила, фозалона, фосмета, хлороталонила, цигалофоп-бутила, альфа-циперметрина, ципродинила и эпоксиконазола (метод ГЖХ-МС) устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки N 2 - 6 (серия 1 - метод ВЭЖХ-МС/МС) и N 3' - 7' (серия 2 - метод ГЖХ-МС) соответственно.

В инжектор жидкостного хроматографа вводят по 2 мм³ каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 8.5.1.3, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3.1; в испаритель хромато-масс-спектрометра - по 1 мм³ каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 8.5.2.4, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3.2. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков веществ, на основании которых строят градуировочные зависимости.

8.9. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочных характеристик проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание веществ в которых должно охватывать диапазон концентраций в соответствии с п. 8.5.1 (метод ВЭЖХ-МС/МС), в соответствии с п. 8.5.2 (метод ГЖХ-МС).

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где X - концентрация веществ в растворе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 20% при P = 0,95).

9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами <3>.

--------------------------------

<3> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов; ГОСТ 34307 "Плоды цитрусовых культур. Технические условия".

9.2. Отобранные образцы хранят в холодильнике при температуре (2 - 6) °C не более 5 дней. Для длительного хранения образцы замораживают и помещают в морозильную камеру (температура не выше минус 18 °C).

9.3. Перед анализом образцы измельчают с сухим льдом.

10.1. Экстракция. Образец измельченной с сухим льдом пробы цитрусовых массой 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³, вносят 10 см³ ацетонитрила, помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 30 с. Далее вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 8.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин.

Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4500 оборотов/мин и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 10.2.

Определение дитианона в образцах проводят отдельно. После внесения 10 см³ ацетонитрила в пробу выполняют контроль pH экстракта (с помощью универсальной индикаторной бумаги), при необходимости доводят его значение до 2, используя уксусную кислоту. Помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 30 с. Далее вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 8.6), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4500 оборотов/мин и фильтруют в виалу с помощью шприцевого мембранного фильтра (размер пор 0,22 мкм). Помещают в автосамплер хроматографа для анализа методом ВЭЖХ-МС/МС по п. 10.3.1.

10.2. Очистка экстракта. Аликвоту экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 6 - 7 см³ с помощью пипетки переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.7. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 30 с. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4500 оборотов/мин. Отбирают с помощью медицинского шприца раствор, фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,22 мкм) в виалу вместимостью 2 см³ с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой. Помещают в автосамплер хроматографа для анализа методом ВЭЖХ-МС/МС по п. 10.3.1 или ГЖХ-МС по п. 10.3.2.

Примечание: допускается концентрирование полученных после очистки экстрактов отдуванием в токе инертного газа при температуре не более 35 °C.

10.3. Условия хроматографирования и идентификации

10.3.1. Метод ВЭЖХ-МС/МС. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации, оснащенным соосной подачей горячего азота для эффективной десольвации ионов при следующих режимных параметрах:

- источник ионизации - электростатическое распыление (положительная и отрицательная ионизация);

- режим работы: регистрация дочерних положительных и отрицательных ионов после разрушения материнских ионов (регистрация "перехода") в режиме динамического мониторинга множественных реакций. Параметры масс-спектрометрического детектора приведены в табл. 10.1.

Примечание: <*> - ион, используемый для количественного расчета; вторые дочерние ионы (масса/заряд) используются для подтверждения.

Параметры масс-спектрометрического детектора:

Условия хроматографирования:

- хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернением 1,8 мкм;

- объем вводимой пробы - 2 мм³ с промывкой иглы (3 с, метанол);

- режим элюирования градиентный (табл. 10.2), общее время анализа 13 мин, включая промывку колонки после анализа 3 мин.

Линейные диапазоны детектирования азоксистробина, диметоата, дитианона, дифеноконазола, дифлубензурона, имазалила, имидаклоприда, карбендазима, клотианидина, клофентезина, крезоксим-метила, метомила, ометоата, пидифлуметофена, пираклостробина, пириметанила, пирипроксифена, прохлораза, тиабендазола, тиаметоксама, трифлоксистробина, фенитротиона, флудиоксонила, хлорантранилипрола, эпоксиконазола - 0,02 - 0,20 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочные растворы с концентрацией 0,1 мкг/см³, разбавляют 1%-м раствором уксусной кислоты в ацетонитриле (не более чем в 50 раз).

10.3.2. Метод ГЖХ-МС. Измерения выполняют на газовом хроматографе, с масс-селективным детектором, автоматическим пробоотборником с использованием капиллярной кварцевой колонки, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащей сорбент 5% фенил- и 95% диметилполисилоксана, с толщиной пленки 0,25 мкм.

Параметры работы масс-спектрометрического детектора:

Условия хроматографирования:

- температура термостата колонки в режиме программирования: начальная температура - 90 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 185 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 2 градуса в минуту до температуры 200 °C, выдержка 4 мин, нагрев колонки со скоростью 5 градусов в минуту до температуры 250 °C, выдержка 8 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 260 °C, выдержка 6 мин.

Газ 1 (гелий):

Режим сканирования - мониторинг выбранных ионов (англ. selection ion monitoring, далее - SIM).

Индивидуальные характеристические ионы, выбранные для идентификации, приведены в табл. 10.3.

Примечание: <*> - ион, используемый для количественного расчета; два других иона (масса/заряд) используются для подтверждения.

Линейные диапазоны детектирования:

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочные растворы с концентрацией 0,05 мкг/см³ (фипронил, фипронил-сульфон), 0,1 мкг/см³ (бифентрин, дельтаметрин, диазинон, диметоат, дифлубензурон, имазалил, карбосульфан, карбофуран, 3-кето-карбофуран, малатион, металаксил (мефеноксам, металаксил M), метрибузин, ометоат, пиридабен, пириметанил, пиримифос-метил, пропиконазол, тебуконазол, тиабендазол, триадименол, триадимефон, трифлуралин, фенитротион, флудиоксонил, фозалон, фосмет, хлороталонил, цигалофоп-бутил, альфа-циперметрин, ципродинил, эпоксиконазол), 0,5 мкг/см³ (гекситиазокс) разбавляют ацетоном (не более чем в 50 раз).

11.1. Содержание веществ в пробах (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где A - концентрация вещества, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

V - объем экстракта первичный, см³, равен 10 см³;

m - масса анализируемого образца, г;

f - полнота извлечения вещества, приведенная в табл. 3.3 и 3.4 (в %).

Содержание ометоата в образце выражают в эквиваленте действующего вещества диметоата, вводя в формулу расчета коэффициент, равный соотношению молекулярных масс: 229,3/231,2 = 1,06.

Содержание фипронил-сульфона в образце выражают в эквиваленте действующего вещества фипронила, вводя в формулу расчета коэффициент, равный соотношению молекулярных масс: 437,2/453,2 = 0,96.

Содержание 3-кето-карбофурана в образце выражают в эквиваленте действующего вещества карбофурана, вводя в формулу расчета коэффициент, равный соотношению молекулярных масс: 380,6/221,3 = 0,94.

12.1. Результат анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1 и 3.2), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание вещества в пробе цитрусовых менее 0,005 мг/кг; 0,01 мг/кг; 0,05 мг/кг <4>".

--------------------------------

<4> - 0,005 мг/кг - нижний предел количественного определения пенконазола, фипронила, фипронил-сульфона;

- 0,01 мг/кг - нижний предел количественного определения азоксистробина, диметоата, дитианона, дифеноконазола, дифлубензурона, имазалила, имидаклоприда, карбендазима, клотианидина, клофентезина, крезоксим-метила, метомила, ометоата, пидифлуметофена, пираклостробина, пириметанила, пирипроксифена, прохлораза, тиабендазола, тиаметоксама, трифлоксистробина, фенитротиона, флудиоксонила, хлорантранилипрола, эпоксиконазола (метод ВЭЖХ-МС/МС), бифентрина, дельтаметрина, диазинона, диметоата, дифлубензурона, имазалила, карбосульфана, карбофурана, 3-кето-карбофурана, малатиона, металаксила, метрибузина, ометоата, пиридабена, пириметанила, пиримифос-метила, пропиконазола, тебуконазола, тиабендазола, триадименола, триадимефона, трифлуралина, фенитротиона, флудиоксонила, фозалона, фосмета, хлороталонила, цигалофоп-бутила, альфа-циперметрина, ципродинила, эпоксиконазола (метод ГЖХ-МС);

- 0,05 мг/кг - нижний предел количественного определения гекситиазокса (метод ГЖХ-МС).

13.1. Организация контроля качества измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

где - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

где - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1 и 3.2), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

где , , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

где X₁, X₂ - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1 и 3.2), %.

1. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

2. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

3. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

4. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

5. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

6. ГОСТ 20461 "Гелий газообразный".

7. ГОСТ 9293 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

8. ГОСТ 2603 "Реактивы. Ацетон. Технические условия".

9. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

10. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

11. ГОСТ 4221 "Реактивы. Калий углекислый. Технические условия".

12. ГОСТ 6995 "Реактивы. Метанол-яд. Технические условия".

13. ГОСТ 5848 "Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия".

14. ГОСТ 22280 "Реактивы. Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия".

15. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

16. ГОСТ 61 "Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия".

17. ГОСТ 12162 "Двуокись углерода твердая. Технические условия".

18. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

19. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

20. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

21. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

22. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

23. ГОСТ 34307 "Плоды цитрусовых культур. Технические условия".

24. "Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" от 21.08.1979 N 2051-79.

25. Федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением", утвержденные Приказом Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536.