"МУК 4.1.3974-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств циклобутрифлурама в плодоовощной и соковой продукции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 19.02.2024)

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием для определения массовой концентрации циклобутрифлурама в ботве и клубнях картофеля, в моркови, луке, землянике, огурцах, томатах и томатном соке в диапазоне 0,004 - 0,4 мг/кг без разбавления, 0,004 - 20 мг/кг с учетом разбавления в 50 раз.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Циклобутрифлурам - 2(1H)-пиридон, 3,5-дихлор-N-[(1S,2S)-2-(2,4-дихлорфенил)циклобутил]-2-(трифтометил)пиридин-3-карбоксамид <1>. Брутто-формула C₁₇H₁₃Cl₂F₃N₂O. Молекулярная масса 389,2.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства.

Белый порошок без запаха. Температура плавления плюс 125,4 °C. Давление паров 6,2·10^-3 мПа (плюс 25 °C). Плотность 1,46 г/см³. Растворимость в воде при плюс 20 °C - 33 мг/дм³. Коэффициент распределения в системе н-октанол - вода K_owlogP = 3,2.

2.3. Область применения.

Циклобутрифлурам относится к классу пиридин-3-карбоксамидов, предназначен для защиты широкого спектра сельскохозяйственных культур при почвенном применении и обработке семян для борьбы с нематодами.

3.1. При соблюдении условий проведения анализа <2> и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1, для соответствующих диапазонов концентраций.

--------------------------------

<2> ГОСТ Р ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6)).

4.1. Методика основана на определении циклобутрифлурама с использованием ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором.

4.2. Экстракцию циклобутрифлурама выполняют смесью воды и ацетонитрила, выделяют ацетонитрил из смеси высаливанием. Ацетонитрильный экстракт подвергают очистке сорбентами для дисперсионной твердофазной экстракции.

4.3. Нижний предел измерения циклобутрифлурама в анализируемом объеме пробы - 5 пг. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<3> Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 N 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на ВЭЖХ, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 - 30 °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, подвижной фазы, смесей солей для экстракции и очистки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

8.2. Приготовление 0,1%-го водного раствора муравьиной кислоты (компонент А подвижной фазы). В мерную колбу вместимостью 500 см³ добавляют 200 см³ деионизованной воды, пипеткой на 1 см³ вносят 0,5 см³ концентрированной муравьиной кислоты и доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Хранят не более 14 дней.

8.3. Кондиционирование хроматографической колонки.

Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (компонент А приготовлен по п. 8.2, компонент Б - ацетонитрил) 95:5 и скорости подачи растворителя 0,4 см³/мин не менее 15 мин.

8.4. Приготовление смеси солей для экстракции.

Для обработки одной пробы смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого, (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, (1,00 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,50 +/- 0,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного. Для каждой пробы готовится отдельное количество смеси. Смеси хранят в индивидуальной герметичной упаковке не более 6 месяцев.

8.5. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов <4>.

--------------------------------

<4> Примечание: допускается использование коммерческих наборов для дисперсионной твердофазной экстракции (очистки экстрактов) для фруктов и овощей.

Для очистки одной аликвоты экстракта смешивают (150 +/- 5) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина и (900 +/- 5) мг магния сернокислого, закрывают в герметичную тару, хранят не более 6 месяцев.

При применении коммерческих наборов соблюдаются инструкции производителя.

8.6. Приготовление раствора для экстракции. В мерную колбу вместимостью 500 см³ вносят мерным цилиндром 400 см³ ацетонитрила и доводят водой до метки. Тщательно перемешивают.

8.7. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

8.7.1. Исходный раствор циклобутрифлурама для градуировки (концентрация 1000 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г циклобутрифлурама, добавляют 5 - 7 см³ ацетонитрила, перемешивают до полного растворения, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой темной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более полугода.

Растворы N 1 - 7 готовят при температуре плюс 20 - 25 °C объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.7.2. Раствор N 1 циклобутрифлурама для градуировки (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1 см³ исходного раствора циклобутрифлурама с концентрацией 1000 мкг/см³ (п. 8.7.1), доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой темной таре в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов методом добавок.

8.7.3. Раствор N 2 циклобутрифлурама для градуировки и внесения (концентрация 0,1 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1 см³ раствора циклобутрифлурама с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.7.2), доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °C не более одной недели.

8.7.4. Рабочие растворы N 3 - 7 циклобутрифлурама для градуировки (концентрация 0,001 - 0,1 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 10 см³ помещают по 0,1; 0,5; 1,0; 2,5; 5,0 см³ градуировочного раствора N 2 с концентрацией 0,1 мкг/см³ (п. 8.7.3), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 7 с концентрацией циклобутрифлурама 0,001; 0,005; 0,01; 0,025; 0,05 мкг/см³ соответственно. Растворы используют свежеприготовленными.

8.8. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации циклобутрифлурама, устанавливают методом абсолютной калибровки по 6 растворам для градуировки N 2 - 7.

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм³ каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 8.7.3 - 8.7.4, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Устанавливают площадь пика циклобутрифлурама.

8.9. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

Проводят измерения не менее двух образцов рабочих растворов для градуировки, содержание циклобутрифлурама в которых соответствует диапазону концентраций от 0,001 до 0,1 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение (1), (2):

где A - величина расхождения, %;

X - концентрация вещества в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).

9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <5>.

--------------------------------

<5> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79; ГОСТ 32284 "Морковь столовая свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 17.12.2013 N 2281-ст; ГОСТ 34306 "Лук репчатый свежий. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 28.11.2017 N 1844-ст; ГОСТ 33953 "Земляника свежая. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 29.11.2016 N 1851-ст; ГОСТ 33932 "Огурцы свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 29.11.2016 N 1849-ст; ГОСТ 34298 "Томаты свежие. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 14.12.2017 N 1956-ст; ГОСТ 32876 "Продукция соковая. Сок томатный. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 08.12.2014 N 1949-ст; ГОСТ 7176 "Картофель продовольственный. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 28.11.2017 N 1843-ст.

9.2. Образцы хранят не более двух недель в негерметичных контейнерах в хорошо вентилируемом помещении без прямого доступа солнечных лучей при температуре не выше плюс 6 °C. Не допускается хранение при повышенной температуре. Долгосрочное хранение осуществляется при температуре не выше минус 18 °C.

10.1. Навеску измельченной ботвы, клубней картофеля, моркови, лука, земляники, огурцов, томатов или томатного сока массой 5 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³. Добавляют 25 см³ раствора, приготовленного по п. 8.6, ставят на вихревой шейкер на 10 мин. Вносят в пробирку смесь солей для экстракции (п. 8.4). Закрывают крышкой и помещают на вихревой шейкер на 2 мин. Затем пробу центрифугируют 5 мин при скорости вращения не менее 4500 об/мин. Помещают в полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ смесь сорбентов для очистки экстракта (п. 8.5), добавляют 6 см³ верхнего слоя, встряхивают вручную до полного смачивания порошков и помещают на вихревой шейкер на 2 минуты. Образец повторно центрифугируют 5 мин при скорости вращения не менее 4500 об/мин. Экстракт (верхний слой в пробирке после центрифугирования) фильтруют через мембранный фильтр (размер пор не более 0,45 мкм) в виалу и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3.

10.2. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором (тройной квадруполь с источником ионизации) при следующих режимных параметрах (см. табл. 10.1):

- режим ионизации: электроспрей (англ. Electrospray Ionization, ESI), электростатическое напряжение минус 4500 В;

- полярность отрицательная;

- режим работы: мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, далее - MRM);

- скорость сканирования: 100 мс;

- давление газовой завесы: 25 psi;

- давление газа 1: 50 psi;

- давление газа 2: 60 psi;

- температура осушающего газа: плюс 350 °C.

--------------------------------

<6> Примечание: параметры масс-спектрометрического детектора могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.

10.3. Условия хроматографирования:

- хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2 мм, модифицированная полярная C18 с TMS-эндкеппингом, зернением 4 мкм;

- температура колонки: плюс 40 °C;

- скорость потока элюента: 0,4 см³/мин;

- объем вводимой пробы: 5 мм³;

- подвижная фаза: компонент А - 0,1%-я муравьиная кислота (приготовлена по п. 8.2); компонент Б - ацетонитрил.

Режим элюирования: градиентный, приведен в табл. 10.2.

Линейный диапазон детектирования 5 - 500 пг.

11.1. Содержание циклобутрифлурама (X, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):

где C - концентрация циклобутрифлурама, полученная по градуировочному графику, в соответствии с площадью хроматографического пика, мкг/см³;

V - объем ацетонитрила, добавленного в матрицу, см³ (20 см³);

m - масса анализируемого образца, г (5 г);

f - степень извлечения циклобутрифлурама из проб. Определяется конкретной лабораторией в процессе внедрения метода;

K_р - коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).

11.2. Проверка приемлемости результатов параллельных определений. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости и удовлетворяет условию (4):

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом .

При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12.1. Результат анализа представляют в виде формулы (5):

где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг, рассчитанная по формуле (6):

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "Содержание циклобутрифлурама в пробах менее 0,004 мг/кг" <7>.

--------------------------------

<7> Примечание: 0,004 мг/кг - предел количественного определения циклобутрифлурама в пробах ботвы и клубней картофеля, моркови, лука, земляники, огурцов, томатов и томатного сока.

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <8>. Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.

--------------------------------

<8> ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6).

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.

3. ГОСТ Р ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

4. ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".

5. ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений".

6. ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".

7. ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений".

8. ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

9. ГОСТ Р 53228 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания.

10. ГОСТ OIML R 111-1 "Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

11. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

12. ГОСТ ISO 7886-1 "Шприцы инъекционные однократного применения стерильные".

13. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

14. ГОСТ 5848 "Государственный стандарт Союза ССР. Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия".

15. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

16. ГОСТ 4166 "Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия".

17. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

18. ГОСТ 12.1.004 "Пожарная безопасность. Общие требования".

19. ГОСТ 12.1.007 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

20. ГОСТ 12.1.019 "Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

21. ГОСТ 12.4.009 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

22. ГОСТ 22280 "Натрий лимоннокислый трехзамещенный. Технические условия".

23. ГОСТ 32284 "Морковь столовая свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия".

24. ГОСТ 34306 "Лук репчатый свежий. Технические условия".

25. ГОСТ 33953 "Земляника свежая. Технические условия".

26. ГОСТ 33932 "Огурцы свежие, реализуемые в розничной торговле. Технические условия".

27. ГОСТ 34298 "Томаты свежие. Технические условия".

28. ГОСТ 32876 "Продукция соковая. Сок томатный. Технические условия".

29. ГОСТ 7176 "Картофель продовольственный. Технические условия".

30. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.