"МУК 4.1.268-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Хроматографическое измерение концентраций В-экзотоксина (турингина-1) в воздухе рабочей зоны. Методические указания"
(утв. Госкомсанэпиднадзором России 08.06.1996)

1. Методические указания по измерению концентрации вредных веществ в воздухе рабочей зоны (выпуск 30) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

2. Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны утверждены и.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г.

3. Введены впервые.

4. Методические указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТа 12.1.016-79. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения концентраций вредных веществ" и ГОСТа Р 1.5-92, п. 7.3.

Методические указания одобрены на совместном заседании группы Главного эксперта Федеральной комиссии по санитарно-гигиеническому нормированию "Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение" и методбюро п/секции "Промышленно-санитарная химия" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии".

Ответственные исполнители: Г.А. Дьякова, С.И. Муравьева.

Исполнители: Г.А. Дьякова, Н.С. Горячев, Л.Г. Макеева, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.В. Грыжина, Е.Н. Грицун.

Структурная формула (не приводится).

В-экзотоксин (турингин-1) - биологический препарат, применяется в сельском и лесном хозяйстве против колорадского жука, паутинного клеща, хлопковых совок и др. вредителей растений.

Представляет собой порошок от коричневого до светло-бежевого цвета, растворим в воде и не растворим в органических растворителях. Действующим началом турингина является В-экзотоксин, содержание которого в препарате в среднем - +/- 1%. В воздухе находится в виде аэрозоля.

ПДК в воздухе- 1 мг/куб. м.

Определение основано на хроматографическом разделении препарата в тонком слое силикагеля (силуфол-UV 254) с последующим спектрометрическим измерением концентраций.

Отбор проб производится с концентрированием на фильтр АФА-ВП-20.

Нижний предел измерения в анализируемой пробе - 3 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе - 0,06 мг/куб. м (при отборе 45 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций в воздухе - от 0,06 до 2 мг/куб. м.

Граница суммарной погрешности измерения +/- 20%.

Определению не мешает присутствие полупродуктов производства экзотоксина.

Основной стандартный раствор N 1 готовят растворением 100 мг экзотоксина в 100 мл дистиллированной воды, получают раствор, содержащий 1 мг/мл экзотоксина.

Стандартный раствор N 2 готовят путем разбавления основного стандартного раствора N 1 или растворением 10 мг экзотоксина в 10 мл дистиллированной воды, получают раствор, содержащий 0,1 мг/мл или 100 мг/мл экзотоксина.

Срок хранения растворов - 5 суток.

Приготовление рабочих растворов с содержанием экзотоксина 15,05; 50; 100; 300; 500 мкг/мл - (см. табл.).

Воздух со скоростью 15 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, закрепленный в фильтродержателе.

Для определения 1/2 ПДК достаточно отобрать 6 л воздуха. После отбора пробы фильтры складывают загрязненной стороной внутрь, помещают в пакеты и доставляют в лабораторию.

Срок хранения отобранных проб - 5 суток.

Фильтры с отобранной пробой помещают в химический стакан, затем промывают дважды 2 - 3 мл дистиллированной воды, тщательно отжимают фильтр стеклянной палочкой и сливают в фарфоровую чашку, которую устанавливают на водяную баню. Выпаривают содержимое до сухого остатка и растворяют в 0,2 - 0,3 мл воды и всю пробу количественно с помощью микропипетки наносят на стартовую линию хроматографической пластинки в одну точку с помощью микропипетки или микрошприца так, чтобы диаметр пятна не превышал 0,5 см. Остаток в чашке еще 2 раза тщательно смывают по 0,1 мл дистиллированной водой и наносят в центр того же пятна. На стартовую линию той же пластинки в различные точки, расположенные друг от друга на расстоянии 2 см, наносят по 0,2 мл рабочих растворов, содержащих 15, 50, 100, 300 и 500 мкг/мл экзотоксина, что соответствует 3; 10; 20; 60; 100 мкг препарата. Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, которую за 30 мин. до хроматографирования заливают смесью: пропанол, ацетон, вода в соотношении 15:5:1. После поднятия фронта подвижного растворителя на 10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько мин. до его испарения. Затем под хроматоскопом обнаруживают зоны локализации препаратов, проявляющихся в виде сине-фиолетовых пятен на голубом фоне с величиной Rf = 0,78 при использовании пластинок "Силуфол"-UV 254. Под УФ-светом (лямбда = 254 нм) зоны локализации препарата проявляется в виде желтоватых пятен на светлом фоне с величиной Rf = 0,68.

Количественное определение проводят путем сравнения площадей пятен стандартных растворов и проб. Между количеством препарата и площадью его пятен на пластинке существует прямая пропорциональная зависимость.

При большом содержании препарата в пробе следует использовать для анализа меньшую часть анализируемого экстракта.

Содержание экзотоксина (С) в воздухе (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

где:

а - количество экзотоксина, найденное в анализируемом объеме пробы, мкг;

в - общий объем пробы, мл;

б - объем пробы, взятой для анализа, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).

Полученные на хроматограмме пятна пробы и стандарта снимают осторожно скальпелем и высыпают слой сорбента в центрифужные пробирки. Затем в пробирки добавляют по 4 мл дистиллированной воды и центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 5 - 10 мин.

Недостаточный прозрачный раствор осторожно пипеткой отсасывают в прямоугольные кварцевые кюветы с L = 10 мм и измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 240 нм.

Количественное определение экзотоксина в пробе проводят по калибровочному графику.

Для построения калибровочного графика готовят шкалу стандартов в соответствии с таблицей.

Стандартные растворы наносят на чистую хроматографическую пластинку и обрабатывают аналогично пробам.

Измеряют величину оптической плотности стандартных растворов на спектрофотометре при длине волны 240 мм и по полученным средним данным из пяти определений строят калибровочный график "количество препарата (мкг) - оптическая плотность".

Концентрацию экзотоксина (мг/куб. м) воздуха (Х) вычисляют по формуле:

где:

А - количество экзотоксина, найденное в анализируемом объеме пробы по калибровочному графику, мкг;

V - анализируемый объем воздуха, приведенного к нормальным условиям, л.

Методические указания разработаны НИИ гигиены труда и профзаболеваний, г. Ташкент.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям проводят по формуле: