"Методические указания по определению триасульфурона в растительном материале, соломе, воде и почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6177-91)

Разработчики: Кошарновская Т.А., Гиренко Д.Б., ВНИИГИНТОКС, г. Киев.

1. Вводная часть.

Логран, /ЦГА 131036/, 75% в.г.

ф."Сиба", Швейцария.

Триасульфурон, 3-(6-метокси-4-метил-1,3,5-триазин-2-ил)-1-2-(2-хлорэтокси) фенилсульфонил-мочевина (ИЮПАК).

Триасульфурон относится к группе сульфонилмочевин.

C₁₄H₁₆ClN₅O₅

М.м. 401,83

Белые кристаллы с Tпл. 186 °C. Растворимость в воде при 20 °C 1,5 г/л, незначительная растворимость в большинстве органических растворителей.

Логран используется в качестве гербицида против однолетних двудольных сорняков, в том числе устойчивых к 2,4-Д и 2М-4Х на посевах пшеницы и ячменя при норме расхода 6,5 - 13 г/га.

Триасульфурон умеренно токсичен для теплокровных. Оральная ЛД₅₀ для крыс > 5000 мг/кг, дермальная ЛД₅₀ > 2000 мг/кг. Вещество не токсично для рыб, птиц и дафний. Не раздражает слизистую глаз у кроликов, при попадании на кожу наблюдается слабое раздражение.

2. Методика определения.

2.1. Основные положения.

2.1.1. Принцип метода.

Метод основан на извлечении триасульфурона из анализируемой пробы метанол-сульфатным буфером (pH 7) в соотношении 2:1. Очистка экстрактов осуществляется распределением между несмешивающимися фазами. Количественное определение остаточных количеств проводят хроматографическими методами (ГЖХ, ТСХ).

2.1.2. Определению не мешают наполнители технического препарата.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода.

2.2. Реактивы и растворы.

Хлороформ, ч., ГОСТ 20015-74.

Метанол, х.ч., ГОСТ 6995-77.

Фосфорная кислота, х.ч., ГОСТ 6552-80.

Фосфатный буфер (pH 7), ГОСТ 8.135-74.

Бикарбонат натрия, х.ч., (чда), ГОСТ 2156-76.

Ацетон, ч., ГОСТ 2601-79.

Азот особой чистоты газообразный, ГОСТ 9293-74.

Хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.

Едкий кали, ч., ГОСТ 9285-78.

Гидразингидрат, чда.

Нитрат серебра, ч., ГОСТ 1277-75.

Бромфеноловый синий, ч., ТУ 6-09-3719-83.

Лимонная кислота, осч., ТУ 6-09-584-75, 2% раствор.

2.3. Приборы и посуда.

Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором (Цвет, газохром или др.).

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-77.

Колбы конические на шлифе емкостью 250 - 500 мл, ГОСТ 10394-74.

Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 23932-79.

Посуда мерная, ГОСТ 1770-74.

Делительные воронки, ГОСТ 23336-82.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-21-1081-73.

Воронки химические, ГОСТ 8613-75.

Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-71.

Водяная баня.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.

Прибор для получения диазометана:

- колба круглодонная трехгорлая, емкостью 500 мл на шлифах (реакционный сосуд);

- холодильник Либиха на шлифах;

- делительная воронка на шлифе (капельница);

- П-образный переходник на шлифах;

- капилляр.

Камера хроматографическая, ГОСТ 23932-79.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-79.

Пластинки "Силуфол" (Хемапол, ЧССР).

2.4. Отбор, хранение и подготовка проб.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 г. за N 2051-79.

Хранят пробы в морозильной камере (-14 - 20 °C).

2.5. Подготовка к определению.

2.5.1. Приготовление стандартного раствора.

Стандартный раствор лограна, содержащий 100 мкг/мл вещества, готовят растворением 10 мг препарата в мерной колбе с притертой пробкой в 100 мл хлороформа. Хранят в холодильнике не более 6 месяцев.

2.5.2. Приготовление проявляющего реактива.

Проявляющий реактив: Раствор А: 50 мл бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона. Раствор Б: 0,5 г нитрата серебра растворяют в 20 мл дистиллированной воды и прибавляют 60 мл ацетона. Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 100 мл и доводят ацетоном до метки. После обработки бромфеноловым синим, пластинку обесцвечивают 2% раствором лимонной кислоты.

2.5.3. Подвижная фаза хлороформ:ацетон 9:1.

2.5.4. Получение диазометана.

В реакционную колбу на 500 мл помещают 6 г едкого кали, 3 мл гидразингидрат, 3 мл метанола. Через смесь продувают азот с расходом 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 кап. за 1 - 2 с. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, конец которого снабжен газоотводной трубкой, которая погружена в слой исследуемого ацетонового раствора, находящегося на дне приемника. Приемник охлаждают смесью льда и соли.

Вследствие токсичности и раздражающего действия диазометана прибор должен быть установлен в вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран, перчатки, очки.

После окончания насыщения исследуемого ацетонового раствора (не менее 4 мин), прекращают подачу в реакционную колбу хлороформ, отключают азот, остатки в реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части прибора водой.

2.6. Описание определения.

2.6.1. Экстракция и очистка экстрактов.

2.6.1.1. Солома. 50 г соломы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл (500 мл), приливают 200 мл смеси метанол-фосфатный буфер (pH 7) в соотношении 2:1, встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Отделяют раствор. Колбу и фильтр дважды промывают 50 мл фосфатным буфером (pH 7). Объединяют экстракты и экстрагируют препарат хлороформом трижды по 75 мл. Водную фазу отбрасывают, а хлороформные экстракты объединяют.

Примечание: Логран медленно гидролизуется в кислом растворе. Поэтому следует провести операцию реэкстракции из водной фазы в органическую без перерыва.

2.6.1.2. Растительный материал. 25 г растительного материала помещают в коническую колбу емкостью 250 мл. Далее определение проводят согласно пункту 2.6.1.1.

2.6.1.3. Почва. 100 г почвы помещают в коническую колбу емкостью 500 мл. Далее определение проводят согласно пункту 2.6.1.1.

2.6.1.4. Вода. Не менее 3 л средней пробы воды экстрагируют хлороформом. Хлороформный экстракт переносят в делительную воронку и логран экстрагируют тремя порциями по 100 мл водного раствора бикарбоната натрия (5%). Органическую фазу отбрасывают, водные экстракты объединяют и переносят обратно в делительную воронку, подкисляют фосфорной кислотой до pH 3 - 4. Препарат экстрагируют тремя порциями по 75 мл хлороформа. Хлороформные экстракты объединяют и упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани не более 45 °C.

2.6.2. Получение производных.

При определении триасульфурона методом ГЖХ проводят метилирование. К сухому остатку приливают 1 мл ацетона и пропускают через этот раствор диазометан в течение 4 мин. После прекращения пропуска диазометана исследуемому раствору дают постоять 30 мин. Затем выпаривают растворитель досуха. Растворяют по 4 мкл пробы. Одновременно с пробой готовят и стандартные растворы лограна с концентрацией 10 мкл/мл, 5 мкл/мл, 2 мкл/мл.

2.6.3. Условия хроматографирования.

2.6.3.1. ГЖХ.

Хроматограф с термоионным детектором (марки "Цвет 500" и др.).

Колонка стеклянная, длина 1 м, d = 3 мм.

Носитель - хроматон, N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм).

Неподвижная фаза - 5% SE-30.

Температура: испарителя - 265 °C.

Расходы: азота - 34 мл/мин, водорода - 12 мл/мин, воздуха - 150 +/- 80 мл/мин.

Вводимый объем - 4 мкл.

Рабочая шкала электрометра: 64·10^-10 А.

Скорость протяжки ленты самописца 240 мм/час.

Время удерживания при данных условиях: 4 мин 25 с.

Минимально детектируемое количество: 8 нг.

2.6.3.2. ТСХ.

Пробу количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Рядом наносят стандартный раствор с различным содержанием лограна (2, 5, 7 и 10 мкг). После этого пластинку помещают в камеру для хроматографирования. Хроматограмму развивают в смеси хлороформ-ацетон (9:1). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, помешают ее под тягу и дают возможность испариться растворителям, после чего обрабатывают пластинку из пульверизатора вначале раствором бромфенолового синего, затем раствором лимонной кислоты. Препарат проявляется на пластинках в виде синих пятен на желтом фоне с R_f = 0,53 +/- 0,03.

2.6.4. Обработка результатов анализа.

2.6.4.1. ГЖХ.

Содержание триасульфурона в пробе рассчитывают по формуле:

X - количество препарата в пробе, мг/кг, мг/л;

C_ст - содержание вещества в стандарте, мкг/мл;

V₁ - объем стандарта, введенного в колонку газового хроматографа, мл;

V₂ - объем анализируемой пробы, введенной в колонку газового хроматографа, мкл;

V₃ - общий объем анализируемой пробы, мл;

H₁ - высота пика стандарта, мм;

H₂ - высота пика анализируемой пробы, мм;

M - масса пробы, взятой для анализа, г.

2.6.4.2. ТСХ.

Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов.

Содержание триасульфурона в анализируемой пробе X мг/кг:

A - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

P - навеска пробы, г.

3. Требования техники безопасности.

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.