"Методические указания по хроматографическому измерению содержания гептилового и амилового спиртов на коже"
(утв. Минздравом СССР 28.09.1989 N 5111-89)

Амиловый спирт - бесцветная жидкость. Т. кип. 138 °C, Т. пл. (-78,5°). Растворимость в воде 2,7%, хорошо растворим в этаноле, эфире, ацетоне и некоторых других органических растворителях.

Гептиловый спирт - бесцветная жидкость. Т. кип. 174 - 176°, Т. пл. - 34,1°.

Растворим в этаноле, эфире, ацетоне и некоторых других органических растворителях.

Определение основано на переведении спиртов в соответствующие нелетучие производные - 3,5-динитробензонаты, которые разделяют в тонком слое силикагеля, пропитанного родамином 6ж. Количественное определение проводят после извлечения бензоатов по реакции Яновского.

В качестве смывающей жидкости используется ацетон.

Диапазон измеряемого содержания 0,12 - 1,2 мг/кв. см.

Определению не мешает метиловый спирт.

Граница суммарной погрешности измерения +/- 25%.

ПДУ гептилового и амилового спирта на коже 0,2 мг/кв. см.

Спирты: амиловый и гептиловый, х.ч., перегнанные при температуре кипения.

Бензол, ГОСТ 5955-75, осушенный над хлористым кальцием.

3,5-динитробензоилхлорид, раствор с содержанием 50 мг в 30 мл бензола.

Пиридин, ГОСТ 13647-78, 10-процентный раствор в бензоле.

Ацетон, ГОСТ 2603-71.

Натрия гидроксид, ГОСТ 4328-77, 40-процентный раствор.

Родамин 6ж, 0,05-процентный раствор в этаноле.

Диэтиловый эфир для наркоза.

Пластинки хроматографические "Silufol".

Основной стандартный раствор готовят для каждого спирта отдельно. Для чего в мерную колбу на 25 мл вносят 10 - 15 мл бензола и взвешивают. Добавляют 0,1 - 0,2 мл спирта и вновь взвешивают. По разности в весе определяют количество спирта. Объем доводят до метки бензолом и вычисляют содержание спирта в 1 мл. Раствор устойчив в течение месяца.

Стандартный раствор N 1, содержащий 2 мг/мл, готовят соответствующим разбавлением основного раствора.

Теплоэлектровентилятор.

Пробирки с притертыми пробками высотой 120 мм, внутренним диаметром 15 мм.

Камера хроматографическая размером 22 x 25 x 12 см.

Кювета эмалированная размером 22 x 27 см.

Колбы мерные вместимостью 25 x 50 мл.

Микропипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 0,1 - 0,2 мл.

Пипетки, ГОСТ 20222-74, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл.

Баня водяная.

Термометр на 100 °C.

Пинцет медицинский.

Скальпель.

Воронки стеклянные d = 3,0 - 3,5 см.

Смыв с кожных покровов проводится способом обмыва. Для этого в фарфоровую чашку наливают 30 мл ацетона. Ватным тампоном (0,3 г), смоченным в смывающей жидкости, обмывают участок кожного покрова (100 кв. см) сверху вниз. При этом тампон несколько раз обмакивают в жидкость. Смыв переносят в склянку. Одновременно проводят контрольный смыв у рабочих, не контактирующих с амиловым и гептиловым спиртами.

Вату извлекают из смыва пинцетом, помещают в воронку, тщательно отжимают и вновь промывают 5 мл ацетона. Жидкость присоединяют к основному смыву, фильтруют и измеряют объем. Для анализа берут 1 мл пробы, добавляют 2 мл бензола, 0,4 мл раствора 3,5-динитробензоилхлорида и 2 капли раствора пиридина.

Одновременно с пробами готовят бензоаты спиртов для построения стандартной шкалы ("свидетели").

С этой целью берут по 0,5 мл стандартного раствора каждого спирта с содержанием - 2 мг/мл, переносят в колориметрическую пробирку, добавляют 0,4 мл раствора 3,5-динитробензоилхлорида, 2 капли раствора пиридина, 1 мл ацетона и объем доводят до 3 мл бензолом.

И стандарт, и пробу помещают на водяную баню, постепенно доводят температуру до 90 - 95 °C и пробу выпаривают до сухого остатка.

Сухой остаток пробы растворяют в 30 мл бензола; 0,05 - 0,1 мл этого раствора используют для последующего хроматографического определения.

Стандарт растворяют в 1 мл бензола, при этом получают раствор 3,5-динитробензоатов спиртов, соответствующих содержанию 1 мг каждого спирта в 1 мл.

Хроматографическое разделение:

Пластинку "Silufol" размером 15 x 15 см пропитывают родамином 6ж. С этой целью в эмалированную кювету наливают 0,05-процентный этанольный раствор родамина и наносят его на пластинку путем быстрого погружения ее в раствор.

Пластинку сушат в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 4 - 5 мин. и затем 30 мин. в сушильном шкафу при температуре 100 - 110 °C. На обработанной таким образом пластинке проводят линию старта в 1,5 см от края, на которой намечают 6 точек на расстоянии 2 см друг от друга. В камеру можно помещать сразу две пластинки, т.е. одновременно определять несколько проб. При этом микропипеткой в часть точек каждой пластинки наносят пробы, в остальные - растворы "свидетелей", соответствующие 20 - 40 - 80 - 100 - 140 - 180 - 200 мкг каждого спирта.

После нанесения проб и "свидетелей" пластинку помещают в хроматографическую камеру, на дно которой предварительно (за 1,5 - 2 ч до начала анализа) наливают бензол (подвижная фаза).

Пластинку извлекают из камеры, когда подвижный растворитель поднимется на 13,5 - 14 см, сушат в вытяжном шкафу при комнатной температуре и вторично помещают в камеру.

Когда растворитель пройдет то же расстояние, что и при первом разделении, пластинку извлекают и сушат в тех же условиях. Пятна бензоатов спиртов при этом проявляются в виде малиновых пятен на слабо розовом фоне.

При слабой окраске пятен наблюдение за разделением можно вести в фильтрованном ультрафиолетовом свете (320 - 380 нм). При этом видны коричневые пятна бензоатов на желтом фоне.

Для количественного определения спиртов в пробах бензоаты пятен проб и "свидетелей" элюируют эфиром.

С этой целью скальпелем осторожно переносят силикагель пятна в пробирку с притертой пробкой, заливают 2 мл эфира, при взбалтывании в течение 3 - 4 мин. извлекают бензоаты. Частицам силикагеля дают осесть на дно пробирки, а раствор переносят в сухую пробирку.

Силикагель промывают 1 мл эфира и присоединяют к первой порции элюата. Ацетоном доводят содержимое до 5 мл.

После извлечения бензоатов проб и "свидетелей" во все пробирки добавляют по 1 мл раствора едкого натра, осторожно перемешивают и устанавливают количество спирта путем сравнения интенсивности фиолетовой окраски проб с окраской "свидетелей" стандартной шкалы.

Содержание спирта C (мг/кв. см) вычисляют по формуле:

где Q - количество искомого вещества во всей пробе, мг;

S - площадь исследуемой части тела, кв. см.