"Методические указания по определению фенпиклонила в зерне, почве и воде методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6175-91)

Разработчики: Скурьят А.Ф., Бунякина Е.М., Кивачицкая М.М., Карченя Г.К., БелНИИЗР, г. Минск.

1. Вводная часть.

Берет, 20% в.р.п.

ф. "Сиба", Швейцария.

Фенпиклонил, 4-(2,3-Дихлорфенил)-1H-пиррол-3-карбонитрил (ИЮПАК).

C₁₁H₆Cl₂N₂

Молекулярная масса: 237,09

Бесцветные кристаллы, температура плавления 152,9 °C. Растворимость г/100 мл: ацетон - 36, метанол - 8,3, изопропанол - 7,7, октанол - 3,6, метиленхлорид - 2,5, Н-гексан - 0,004, вода - 0,0002.

Летучесть при 20 °C 4,1·10^-5 мг/м³. Давление паров при 20 °C - 3,2·10^-9, при 30 °C - 1,6·10^-8, при 40 °C 7,3·10^-8 мм рт. ст.

Берет - протравитель семян пшеницы и ячменя для борьбы с твердой и каменной головней и снежной плесенью. Применяется при норме расхода 1 - 2 кг/т.

Фенпиклонил обладает средней токсичностью. ЛД₅₀ для крыс и мышей 5000 - 3000 мг/кг.

2. Методика определения.

2.1. Основные положения.

2.1.1. Принцип метода.

Метод основан на извлечении препарата из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта на пластинках "Силуфол", последующим определением газожидкостной хроматографией с термоионным детектором.

2.1.2. Избирательность метода.

Другие препараты по сфере применения в данных условиях хроматографирования определению не мешают.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода.

Диапазон определяемых концентраций 0,0005 - 0,01 мкг.

Нижний предел детектирования - 0,0005 мкг.

Чувствительность определения: зерно - 0,02 мг/кг, почва - 0,01 мг/кг, вода - 0,008 мг/л.

Среднее значение определения %: зерно - 74,2, почва - 82,1, вода - 92,3.

Размах варьирования: зерно - 70,0 - 90,0%, почва - 72,0 - 95,0%, вода - 90 - 98%.

Стандартное отклонение: зерно +/- 2,67%, почва +/- 2,84%, вода +/- 3,95%.

Доверительный интервал среднего при n = 5, p = 0,95: зерно - 74,2 +/- 5,6; почва - 82,1 +/- 6,7; вода - 92,3 +/- 7,5.

2.2. Реактивы и растворы.

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79.

Этиловый спирт, х.ч., ТУ 6-09-7710-77.

Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75.

Этилацетат, ч.д.а., ГОСТ 22300-76.

Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

2.3. Приборы и посуда.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 64-1-8-77.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-21-1087-73.

Микрошприц МШ N 10, ТУ Е-2.833.0.24.

Микропипетки, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические со шлифом на 250, 500 и 100 мл, ГОСТ 10394-72.

Воронки делительные, ГОСТ 8613-75.

Воронки конические, ГОСТ 8613-75.

Цилиндры мерные емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Грушевидные колбы емкостью 50 мл.

Камера для хроматографирования.

Фильтры бумажные.

Пластины "Силуфол" - UV-254 (ЧССР).

Хроматограф "Цвет-106" с ТИД.

Стеклянная макрокапиллярная колонка с фазой Е-301 с толщиной пленки 2 мкм, диаметром 0,6 мм, длиной 55 м.

2.4. Отбор, хранение и подготовка проб.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1970 г. за N 2051-79.

2.5. Подготовка к определению.

2.5.1. Приготовление стандартного раствора.

Стандартный раствор берета в ацетоне (50 мкг/мл).

2.6. Описание определения.

2.6.1. Экстракция и очистка экстрактов.

2.6.1.1. Вода. 200 мл воды помещают в делительную воронку с притертой пробкой, заливают 150 мл этилацетата и встряхивают в течение 3 - 5 мин. Экстракт фильтруют через плотный фильтр и безводный сернокислый натрий. Затем повторно экстрагируют 50 мл этилацетата в течение 3 мин. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе (t 69 °C) до объема 0,2 - 0,3 мл (остаток высушивают в токе воздуха). Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и аликвоту вводят в хроматограф.

2.6.1.2. Почва. 100 г почвы экстрагируют 100 - 150 мл этилацетата при встряхивании в течение 1,5 часов. Растворитель фильтруют через фильтр с безводным сернокислым натрием. Экстракцию повторяют еще раз в течение 30 мин. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе (t 60 °C) до объема 0,2 - 0,3 мл и проводят очистку.

2.6.1.3. Зерно. 10 - 20 г измельченного зерна экстрагируют 100 - 150 мл этилацетата при встряхивании в течение 1,5 часов. Далее определение проводится согласно пункту 2.6.1.2.

На пластинку "Силуфол" UV-254, предварительно разогнанную в камере с ацетоном, в виде полосы наносят сконцентрированный экстракт, рядом наносят пятно стандартного раствора. Пластину хроматографируют в смеси бензол:этанол (11:1). Если грязь находится близко от места нанесения полосы пробы, то пластину тщательно вентилируют, затем хроматографируют повторно в той же смеси. Нельзя допускать перегрузки стартовой полосы. В случае, если экстракт сильно насыщенный, его необходимо нанести на несколько пластин.

Под УФ-светом отмечают место расположения стандартного пятна и на том же уровне Rf, с некоторым запасом, отмечают зону пробы. Полосу с зоной пробы вырезают, измельчают ножницами и помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 100 мл ацетона и встряхивают в течение 1 часа. Раствор фильтруют через фильтр, предварительно промытый ацетоном. Экстракцию повторяют еще 2 раза с 50 мл ацетона в течение 30 минут. Объединенный экстракт упаривают, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и аликвоту вводят в хроматограф.

2.6.2. Условия хроматографирования.

Определение проводят на хроматографе "Цвет-106" с термоионным детектором. Используют макрокапиллярную колонку с фазой E-301, толщина пленки 2 мкм, диаметром 0,6 мм, длиной 55 м. Температура испарителя - 270 °C, температура колонки - 250 °C. Расход газа через колонку - 30 мл/мин. Время удерживания - 2 мин. 45 сек. Рабочая шкала электрометра - 5·10^-10 А. Скорость движения ленты самописца - 600 мм/час. При работе на хроматографе "Цвет-106" с ДПР-1, используют колонку с фазой OV-210, на хроматоне N-AW-DMCS, диаметром 3 мм, длиной 1,5 м. Температурные режимы: испарителя - 270 °C, колонки - 250 °C, детектора - 270 °C. Время удерживания - 3 мин. 35 сек.

2.6.3. Обработка результатов анализа.

Для количественного определения фенпиклонила измеряют высоту пиков проб и стандартных растворов. Содержание препарата в пробе рассчитывают по формуле:

где: X - содержание фенпиклонила в пробе, мг/кг или мг/л;

M_ст - содержание берета в стандартном растворе, мкг;

H_ст - высота пика стандартного раствора, мм;

H_пр - высота пика пробы, мм;

V_к - объем конечного экстракта, мл;

V_ст - объем стандартного раствора берета, введенный в хроматограф, мкл;

V_х - объем экстракта пробы, введенный в хроматограф, мкл;

M - навеска пробы в г или мл.

3. Требования техники безопасности.

При анализе необходимо соблюдать требования техники безопасности, рекомендованные для работ с органическими растворителями, кислотами и сжатыми газами.