"Методические указания по измерению концентраций поли- и моносахаридов (глюкозамингидрохлорида, хитозана, хитина) в воздухе рабочей зоны"
(утв. Минздравом СССР 10.10.1991 N 5998-91)

Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов системы здравоохранения России и других заинтересованных министерств и ведомств.

Методические указания разрабатываются и утверждаются с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны их предельно допустимым концентрациям (ПДК) - санитарно-гигиеническим нормативам, утвержденным Министерством здравоохранения СССР, оценки эффективности внедренных санитарно-гигиенических мероприятий, установления необходимости использования средств индивидуальной защиты органов дыхания, оценки влияния вредных веществ на состояние здоровья работающих и др.

Включенные в данный выпуск Методические указания подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и ГОСТ 12.1.016-79 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения концентраций вредных веществ" и обеспечивают избирательное измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны в присутствии сопутствующих компонентов на уровне 0,5 ПДК. Погрешность измерений концентраций вредного вещества, состоящая из суммы неисключенных систематической и случайной погрешностей, не превышает 25%.

Методические указания одобрены Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и профессиональной патологии" и являются обязательными при осуществлении вышеуказанного контроля.

Ответственные за выпуск: С.И. Муравьева, Г.А. Дьякова, К.М. Грачева.

Определяемые компоненты - твердые вещества, при температуре выше 100 °C теряющие воду и осмоляющиеся. Полиаминосахариды нерастворимы в воде и органических растворителях. Хитозан растворим в кислой среде, глюкозамингидрохлорид хорошо растворим в кислой среде и воде. Хитин разлагается ферментом хитиназой и дезацетилируется в концентрированных щелочных растворах. Являются аллергенами.

ПДК в воздухе рабочей зоны - 0,005 мг/куб. м.

Метод основан на измерении флюоресценции флюоресцирующих аминосахаров с 1-диметиламино-5-нафталинсульфохлоридом, разделяемых тонкослойной хроматографией.

Отбор проб воздуха проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения концентрации аминосахаров в анализируемом растворе - 0,02 мкг.

Нижний предел измерения содержания аминосахаров в воздухе - 0,0025 мг/куб. м (при отборе 424 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций аминосахаров в воздухе - 0,0025 - 0,025 мг/куб. м.

Измерению не мешают органические растворители.

Суммарная погрешность измерения не превышает 25%.

Время выполнения измерения, включая отбор пробы, 4 часа.

Источник УФ-света ("Ультрахемископ", "Хроматоскоп" и др.).

Фильтродержатели.

Фильтр АФА-ВП.

Микрошприц МШ-10, ГОСТ 8043-74.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 50 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 0,01, 0,02, 0,04, 1,0, 2,0 мл.

Камера для тонкослойной хроматографии.

Пульверизатор стеклянный для орошения хроматограмм.

Пластинки для тонкослойной хроматографии с силикагелем типа Лабсиль А производства Медимпекс, толщина слоя 0,15 - 0,20 мм, размер 10 x 10 см.

Ацетон, ГОСТ 2603-75, ч.д.а.

Кислота уксусная, ГОСТ 61-75, х.ч., 3-процентный раствор.

Кислота трифторуксусная, ТУ 6-09-3877-80, ч.

Этиловый эфир уксусной кислоты, ГОСТ 22300-76, х.ч.

Спирт этиловый, ГОСТ 5962-67.

N,N-диметил-2-нафтиламин-5-сульфохлорид, ТУ 6-09-07-784-76, ч.д.а., в дальнейшем обозначается ДАНС-хлорид, 0,2-процентный раствор в ацетоне, хранят в темной склянке в холодильнике.

Глицерин, ГОСТ 6259-75, ч.д.а., 5-процентный раствор в этиловом спирте.

Хитозан, ТУ 6-09-05-397-75, ч.

Глюкозамингидрохлорид, ТУ 6-09-95-936-78, ч.

Стандартный раствор хитозана N 1 с концентрацией 1 мг/мл готовят в 3-процентном растворе уксусной кислоты растворением 50 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 мл. Соответствующим разведением готовят стандартный раствор N 2 с содержанием хитозана 0,1 мг/мл, из которого затем готовят рабочие стандартные растворы с содержанием хитозана 1, 2, 4, 10 мкг/мл. Растворы хранят в холодильнике.

Стандартный раствор глюкозамина N 4 с содержанием глюкозамина 0,1 мг/мл готовят соответствующим разведением стандартного раствора N 3, из которого затем готовят стандартные растворы с содержанием глюкозамина 1, 2, 4, 10 мкг/мл. Растворы хранят в холодильнике.

Аэрозольный фильтр с отобранной пробой извлекают из патрона, помещают в стеклянный бюкс вместимостью 25 - 30 мл, заливают 10 мл 3-процентного раствора уксусной кислоты (определение хитозана) или 10 мл воды (определение глюкозамина), оставляют на 30 минут для растворения, отжимают и удаляют фильтр, экстракты переносят в пробирку, упаривают в токе воздуха водные растворы при нагревании, а уксуснокислые - при комнатной температуре до сухого остатка, затем добавляют 1 мл трифторуксусной кислоты, закрывают и нагревают в течение часа на водяной бане при 65 °C. После охлаждения в растворы приливают 20 мкл ДАНС-хлорида и 40 мкл раствора гидрокарбоната натрия. Смесь нагревают при 45 °C в течение 30 минут, при этом происходит ее обесцвечивание.

На хроматографическую пластинку на линию старта на расстоянии 15 мм друг от друга наносят 20 мкл исследуемой пробы и по 20 мкл стандартных растворов с содержанием 1, 2, 4, 10 мкг/мл, что соответствует соответственно 0,02; 0,04; 0,08; 0,2 мкг каждого вещества.

Пластинку подсушивают на воздухе и опрыскивают раствором глицерина в спирте. При освещении УФ-лампой хитозан и хитин наблюдаются в виде желто-зеленых пятен на линии старта, глюкозамин - в виде желто-зеленых пятен с Rf = 0,64. Кроме пятен ДАНС-производных аминосахаридов и пятен, принадлежащих реактиву, могут наблюдаться пятна с Rf = 0,3 - 0,8 также желто-зеленого цвета, принадлежащие аминокислотам, образующимся при гидролизе белков, содержащихся в пробе.

Количественное определение проводят путем сравнения площади одинаковых по интенсивности окраски пятен пробы и стандартного раствора.

Концентрации хитозана и глюкозамина "С" в воздухе (в мг/куб. м) вычисляют по формуле:

где:

а - содержание вещества в анализируемом объеме раствора пробы, мкг;

Sк, Sст - площади пятен пробы и стандартного раствора соответственно, кв. мм; мм.

V - объем воздуха (в л), отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям (см. Приложение 1).

Приведение объема воздуха к условиям по ГОСТ 12.1.016-79 (температура 20 °С, давление 760 мм рт. ст.) проводят по следующей формуле: