"Методические указания по определению фосфорорганических пестицидов (базудин, гетерофос, карбофос, метафос, фосфамид, этафос) в табаке методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 N 5011-89)

--------------------------------

<*> Разработаны Ф.Г. Житку (Молдавский НИИ табака).

Краткая характеристика препаратов приведена в Унифицированной методике. МДУ базудина в табаке 0,5 мг/кг; МДУ карбофоса в табаке и махорке 1 мг/кг; фосфамида - 0,4 мг/кг. Содержание метафоса в табаке не допускается. МДУ гетерофоса и этафоса в табаке не установлены.

Принцип метода. Метод основан на извлечении пестицидов из табачного сырья диэтиловым эфиром и очистке от балластных веществ путем их осаждения при выпаривании эфира в присутствии 50-процентного водного раствора ацетона. После экстракции препаратов гексаном и хлороформом проводят их качественное и количественное определение на хроматографе с ТИД.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 25.

Избирательность метода. Метод избирателен в отсутствие актеллика и метилнитрофоса, которые также разрешено применять на табаке.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Диэтиловый эфир. Хлороформ х.ч. Сульфат натрия безводный х.ч. Хлорид натрия х.ч. Хлороводородная кислота х.ч. Гидроксид натрия х.ч. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 3% OV-17. Хроматон N-AW-DMCS (0,25 - 0,315 мм) с 5% SE-30. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% ПМС-100. Хроматон N-супер (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60. Азот газообразный особой чистоты. Водород электролитический (СГС-2). Воздух из баллона с редуктором или нагнетаемый компрессором. Вода дистиллированная. Стандартные растворы пестицидов с концентрацией (мкг/мл): базудина - 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; гетерофоса - 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; карбофоса, метафоса, фосфамида - 1,0; 2,0; 4,0; 10; этафоса - 2,0; 4,0; 8,0; 20.

Приборы и посуда. Хроматограф "Цвет-106" с ТИД. Колонки хроматографические стеклянные длиной 1 и 2 м с внутренним диаметром 3 мм. Аппарат для встряхивания. Испаритель ротационный. Воронки делительные. Колбы: конические нормального шлифа; круглодонные нормального шлифа; мерные на 25; 50 и 100 мл. Воронки химические. Цилиндры мерные. Колба Бунзена. Воронка Бюхнера. Бумажные фильтры "синяя лента". Электромельница. Насос вакуумный ВНВР-1Д. Компрессор ГСВ-0,6/12 модели 155/285. Микрошприц МШ-10.

Подготовка к определению. Подготовка хроматографических колонок и их кондиционирование. Стеклянные колонки моют хромовой смесью, ополаскивают водой, промывают ацетоном, затем хлороформом и гексаном. Колонки просушивают и заполняют сорбентом, используя вакуум. Заполненные колонки кондиционируют, не подключая к детектору, 24 ч при 250 °C (OV-17), 270 °C (SE-30), 235 °C (XE-60 + ПМС-100).

Приготовление стандартных растворов. В мерных колбах на 50 мл взвешивают отдельно по 25 мг каждого пестицида с точностью 0,0001 г. Приливают в каждую колбу 20 - 30 мл ацетона, осторожно взбалтывают до полного растворения препаратов и доливают ацетон до метки. Хранят в холодильнике при температуре не выше +4 °C. Срок хранения 1,5 - 2 мес.

Основной раствор получают смешиванием: 1 мл ацетонового раствора базудина и 1 мл ацетонового раствора гетерофоса, по 2 мл растворов карбофоса, метафоса, фосфамида, 4 мл раствора этафоса. К полученной смеси доливают ацетон до объема 100 мл. Концентрация пестицидов в основном растворе: базудина и гетерофоса по 5 мкг/мл, карбофоса, метафоса и фосфамида - по 10 мкг/мл, этафоса - 20 мкг/мл. Срок хранения основного раствора 3 - 4 недели.

Для анализа готовят рабочие растворы: N 1 - 10 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора ацетоном до метки; N 2 - 10 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 50 мл и доводят объем раствора ацетоном до метки; N 3 - 10 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем раствора ацетоном до метки. 1 мкл полученного раствора N 3 содержит (нг): 0,5 базудина, 0,5 гетерофоса, 1 карбофоса, 1 метафоса, 1 фосфамида, 2 этафоса.

Рабочие растворы хранят в холодильнике 2 - 3 недели.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Сухой табак (20 г) тщательно измельчают (50 г зеленого табака растирают в ступке с 30 г безводного сульфата натрия), помещают в коническую колбу с пришлифованной пробкой, заливают 100 мл диэтилового эфира и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Декантируют экстракт 2 - 3 мин. и фильтруют через бумажный фильтр на воронке Бюхнера под вакуумом. Экстрагируют еще раз тем же количеством эфира, встряхивая 15 мин. Фильтруют пробу, фильтр промывают 50 мл эфира.

К эфирным вытяжкам в круглодонную колбу прибавляют 75 мл 50-процентного водного раствора ацетона (в объемных процентах) и полностью удаляют эфир под вакуумом на ротационном испарителе при 25 - 29 °C. При этом на стенках вращающейся колбы осаждаются практически все балластные вещества (воски, смолы, пигменты), что объясняется их нерастворимостью в 50-процентном растворе ацетона.

Водно-ацетоновый экстракт, содержащий ФОП, отделяют фильтрованием через бумажный фильтр в делительную воронку. В колбу с осадком прибавляют 50 мл диэтилового эфира, взбалтывают до полного растворения балластов, прибавляют 75 мл 50-процентного водного раствора ацетона и еще дважды повторяют очистку.

К объединенному водно-ацетоновому фильтрату добавляют 25 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия и экстрагируют базудин, гетерофос, карбофос, метафос, этафос гексаном три раза порциями по 50 мл, каждый раз энергично встряхивая в течение 1 мин. Фосфамид экстрагируют хлороформом трижды по 25 мл, встряхивая каждый раз по 1 мин.

Гексановые и хлороформные фракции промывают два раза порциями по 10 мл 0,01 н NaOH, два раза по 10 мл 0,01 н HCl, высушивают, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (10 - 15 г), и выпаривают под вакуумом при 40 - 45 °C. Следы растворителей удаляют в токе холодного воздуха.

К сухим остаткам прибавляют 1 - 5 мл ацетона и хроматографируют на хроматографе с ТИД.

При использовании неподвижной фазы OV-17 можно экстрагировать сразу все препараты из водно-ацетонового экстракта хлороформом трижды порциями по 25 мл. Промывку экстракта и остальные операции проводят так же, как описано выше.

Колонку с неподвижной фазой OV-17 используют как основную при качественном и количественном определении препаратов. Можно применять и другие колонки (см. табл. 26). На колонке с фазой OV-17 минимально детектируемое количество базудина и гетерофоса - 0,5 нг, карбофоса, метафоса, фосфамида - 1 нг, этафоса - 2 нг. Линейный диапазон детектирования: базудина и гетерофоса 0,5 - 5 нг, карбофоса, метафоса, фосфамида 1 - 15 нг, этафоса 2 - 30 нг. Хроматографируют 2 - 3 мкл конечного экстракта пробы.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят методом соотношения со стандартами по высоте пиков. Содержание пестицидов в анализируемой пробе вычисляют как среднее значение из трех параллельных определений.

Количество пестицида в анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

Требования безопасности. При анализе необходимо выполнять правила безопасности, рекомендованные для работы с органическими растворителями, пестицидами и сжатыми газами.