Описание
Источник публикации
"Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Справочник", том 1. М., ВО "Колос", 1992
Примечание к документу
Название документа
"Методические указания по определению ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ в воде, почве, растительном материале методом тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 08.07.1989 N 5033-89)
"Методические указания по определению ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ в воде, почве, растительном материале методом тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 08.07.1989 N 5033-89)
Утверждены
Минздравом СССР
8 июля 1989 г. N 5033-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ В ВОДЕ, ПОЧВЕ,
РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ
ХРОМАТОГРАФИИ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны Ю.А. Бунятяном, М.С. Петросян (Филиал ВНИИГИНТОКС).
Препараты ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ рекомендуются для применения в сельском хозяйстве в качестве ингибиторов нитрификации азотных удобрений на посевах риса, пшеницы, овощей, хлопчатника.
Краткая характеристика препаратов. ГМП - N-гидрокси-3(5)-метилпиразол.
Брутто-формула C H N O. Молекулярная масса 112. Химически чистое
5 8 2
соединение - бледно-желтый порошок со слабым запахом метилпиразола, т. пл.
72 - 76 °C. Хорошо растворим в хлороформе, ацетоне, воде. ГМП -
среднетоксичное соединение. Для крыс ЛД составляет 1650 мг/кг.
50
ТМДИ - тетраметилендикарбамоил-N-бис-3(5)-метилпиразол. Брутто-формула
C H N O . Молекулярная масса 300. Химически чистое соединение -
14 22 6 2
бледно-желтый порошок со слабым запахом метилпиразола. Хорошо растворим в
ацетоне, хлороформе, диметилформамиде, толуоле, при нагревании - в
изопропиловом спирте, гексане, перекристаллизовывается из гексана. В воде
нерастворим, устойчив при температуре разгонки, практически нелетуч.
Возможно проявление двух изомерных форм 3(5)-метилпиразола. ТМДИ -
малотоксичное соединение. Для крыс ЛД составляет 4600 мг/кг.
50
ГМДИ - гексаметилендикарбамоил-N-бис-3(5)-метилпиразол. Брутто-формула
C H N O . Молекулярная масса 332. Химически чистое соединение -
16 24 6 2
бледно-серый порошок со слабым запахом метилпиразола. Т. пл. 59 - 61 °C, т.
кип. 165 - 170 °C (533,3 Па). Хорошо растворим в ацетоне, хлороформе,
диметилформамиде, толуоле, при нагревании - в изопропиловом спирте,
гексане, перекристаллизовывается из гексана. В воде нерастворим, устойчив
при температуре разгонки. Возможно проявление двух изомерных форм
3(5)-метилпиразола. ГМДИ - малотоксичное соединение. Для крыс ЛД
50
составляет 4850 мг/кг.
ХГИ - N-6-(хлоргексил)-карбамоил-3(5)-метилпиразол. Брутто-формула
C H N OCl. Молекулярная масса 243,56. Химически чистое соединение -
11 12 3
бледно-желтый порошок со слабым запахом метилпиразола. Т. пл. 34 - 36 °C,
т. кип. 159 °C (260 Па). Хорошо растворим в ацетоне, хлороформе, толуоле,
изопропиловом спирте, метилэтилкетоне, этилацетате, перекристаллизовывается
из гексана (гептана). В воде нерастворим, устойчив при температуре
разгонки. ХГИ - малотоксичное соединение. Для крыс ЛД составляет
50
5250 мг/кг.
Принцип метода. Метод основан на извлечении ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ из исследуемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта в кислой среде, реэкстракции препаратов в щелочной среде и хроматографировании в тонком слое пластинок "Силуфол" в системе растворителей гексан-ацетон (5:3). Зоны локализации препаратов обнаруживаются в виде синих пятен на светлом фоне после предварительного облучения УФ-светом и обработки пластинок о-толуидином или йод-крахмальным реагентом.
Метрологическая характеристика метода. Метрологические данные представлены в таблице 124.
Таблица 124
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА (N = 5, P = 0,95)
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
?Анализи- ? Предел ? Диапазон ?Среднее ?Стандартное?Доверительный?
?руемый ?обнаружения,?определяемых ?значение ?отклонение,? интервал ?
?объект ? мг/кг, л ?концентраций,?определе-? % ? среднего, % ?
? ? ? мг/кг, л ?ния, % ? ? ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
? ГМП ?
? ?
?Вода ?0,01 ?0,01 - 0,1 ?90 ?+/- 2,25 ?+/- 2,78 ?
?Почва ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?81 ?+/- 2,85 ?+/- 3,52 ?
?Рис ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?83 ?+/- 1,60 ?+/- 1,97 ?
?Пшеница ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?85 ?+/- 1,60 ?+/- 1,97 ?
?Картофель ?0,08 ?0,08 - 0,4 ?80 ?+/- 3,61 ?+/- 4,46 ?
?Томаты ?0,08 ?0,08 - 0,4 ?80 ?+/- 3,17 ?+/- 3,92 ?
? ?
? ТМДИ ?
? ?
?Вода ?0,01 ?0,01 - 0,1 ?94 ?+/- 3,37 ?+/- 4,17 ?
?Почва ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?80 ?+/- 3,03 ?+/- 3,78 ?
?Рис ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?97 ?+/- 2,69 ?+/- 3,34 ?
?Пшеница ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?94 ?+/- 3,08 ?+/- 3,82 ?
?Томаты ?0,08 ?0,08 - 0,4 ?85 ?+/- 1,65 ?+/- 1,97 ?
? ?
? ГМДИ ?
? ?
?Вода ?0,01 ?0,01 - 0,1 ?90 ?+/- 3,37 ?+/- 4,17 ?
?Почва ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?80 ?+/- 3,03 ?+/- 3,78 ?
?Рис ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?95 ?+/- 1,60 ?+/- 1,97 ?
?Пшеница ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?90 ?+/- 1,58 ?+/- 1,96 ?
?Томаты ?0,08 ?0,08 - 0,4 ?83 ?+/- 1,60 ?+/- 2,41 ?
? ?
? ХГИ ?
? ?
?Вода ?0,01 ?0,01 - 0,1 ?93,2 ?+/- 3,21 ?+/- 1,32 ?
?Почва ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?80,0 ?+/- 1,23 ?+/- 0,51 ?
?Рис ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?81,0 ?+/- 2,83 ?+/- 1,17 ?
?Пшеница ?0,04 ?0,04 - 0,4 ?83,0 ?+/- 2,74 ?+/- 1,13 ?
?Томаты ?0,08 ?0,08 - 0,4 ?80,0 ?+/- 3,38 ?+/- 1,34 ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
Избирательность метода. В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии близких по структуре и области применения таких соединений, как нитрапирин, 6-хлорпиколиновая кислота, тилт, байлетон, хлорамп, АТГ, АТГ-ф, лонтрел, а также тех, которые применяются на посевах риса - пропанид, базагран, ордран.
Реактивы, растворы, материалы. ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ-98-процентные
(товарные формы). Хлороформ х.ч. н-Гексан х.ч. Ацетон х.ч. Этиловый
спирт х.ч. Сульфат натрия безводный, ч. Гидроксид натрия х.ч.,
15-процентный в.р. Уксусная кислота х.ч. Хлороводородная кислота
концентрированная х.ч., 25-процентный (по объему) и 5 н раствор. Калий
марганцовокислый х.ч., 3-процентный в.р. Йодид калия х.ч., 1-процентный
в.р. о-Толуидин х.ч. Фильтры бумажные обеззоленные "синяя лента",
предварительно промытые смесью хлороформ-ацетон (1:1). Пластинки
хроматографические "Силуфол" УФ размером 15 x 15 см. Стандартные
254
растворы ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ в хлороформе содержанием 100; 10 и 1 мкг/мл.
Хранить в холодильнике не более 3 мес. Проявляющие реагенты: раствор для
хлорирования (смешивают равные объемы 3-процентного раствора перманганата
калия и 25-процентного раствора хлороводородной кислоты). Готовят перед
употреблением в количествах, необходимых для разового пользования;
проявляющий реагент N 1: а - 0,2 г о-толуидина растворяют в 2 мл уксусной
кислоты; б - 0,8 г йодида калия растворяют в 2 мл дистиллированной воды.
Смешивают растворы а и б и доводят дистиллированной водой до 200 мл.
Проявляющий реагент N 2: а - 1-процентный водный раствор йодида калия; б -
3-процентный раствор крахмала. Перед употреблением смешать растворы а и б и
этиловый спирт в соотношении 2,5:2,5:1. Перед опрыскиванием пластинку
помещают в эксикатор, содержащий раствор для хлорирования, на 3 - 5 мин.,
после чего оставляют на воздухе до удаления запаха хлора (около 15 мин.) и
обрабатывают проявляющим реагентом N 1 или N 2.
Приборы, аппаратура, посуда. Ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4. Ротационный вакуумный испаритель. Колбы: мерные на 100 мл; конические на 100 и 250 мл; круглодонные на 100 мл. Воронки делительные, химические. Микропипетки на 0,1 мл. Цилиндры мерные на 50 и 100 мл. Камера хроматографическая. Пульверизаторы стеклянные. Камера для хлорирования (эксикатор).
Отбор проб. Отобранные пробы анализировать сразу.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (100 мл) помещают в коническую колбу. При определении ГМП прибавляют безводный сульфат натрия до насыщения и трижды экстрагируют ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ хлороформом порциями по 50; 30 и 30 мл. Объединенный экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонные колбы и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре бани не выше 30 °C при определении ГМП; 60 °C - ГМДИ, ТМДИ, ХГИ до объема 0,2 - 0,1 мл. Остаток количественно с помощью хлороформа наносят на хроматографическую пластинку.
Навеску почвы (25 г), измельченную и просеянную, увлажняют 3 мл воды и трижды экстрагируют ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ ацетоном порциями по 50 мл. Объединенный экстракт фильтруют через фильтр "синяя лента" и слой безводного сульфата натрия (1 - 2 г) и отгоняют на ротационном испарителе досуха при температуре бани не выше 30 °C при определении ГМП; 60 °C - ТМДИ, ГМДИ, ХГИ. К сухому остатку прибавляют 10 мл 5 н раствора хлороводородной кислоты, тщательно ополаскивают колбу и переносят в коническую колбу на 100 мл через фильтр "синяя лента". Колбу еще дважды (по 10 мл) промывают 5 н раствором хлороводородной кислоты и сливают в ту же колбу. Объединенный экстракт хлороводородной кислоты подщелачивают 15-процентным раствором гидроксида натрия (4 - 5 мл) до pH 8 - 9, затем прибавляют безводный сульфат натрия до насыщения (10 - 12 г) и трижды экстрагируют ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ хлороформом по 15 - 20 мл. Далее поступают аналогично анализу воды. Измельченную (25 г) пробу растительного материала (рис, пшеница, картофель, томаты) трижды экстрагируют хлороформом по 50 мл. Растворитель фильтруют в перегонную колбу через фильтр "синяя лента" и слой безводного сульфата натрия. Далее поступают аналогично анализу почвы.
Условия хроматографирования. После отгонки растворителя пробы с помощью
хлороформа количественно наносят на пластинки "Силуфол" на расстоянии 1 см
от нижнего края пластинки. Справа и слева от пробы наносят стандартные
растворы ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ, содержащие известные количества препаратов.
Развитие хроматограммы проводят в системе гексан-ацетон (5:3). После
поднятия фронта растворителя на 14 см пластинку проветривают на воздухе до
полного удаления растворителей. После этого пластинку подвергают облучению
УФ-светом в течение 35 - 40 мин., затем помещают в камеру с раствором для
хлорирования на 3 мин., оставляют пластинку на воздухе до полного удаления
запаха хлора (около 15 мин.) и обрабатывают из пульверизатора проявляющим
реагентом (о-толуидин или йод-крахмальный реагент). Зоны локализации
обнаруживаются в виде синих пятен на светлом фоне. Окраска пятен устойчива
в течение 3 дней. Величины R для ГМП составляют 0,36, ТМДИ - 0,68, ГМДИ -
f
0,78, ХГИ - 0,84. Если содержание препаратов в пробе превышает верхнюю
границу диапазона линейности (10 мкг), то для нанесения на пластинку
необходимо брать аликвотную часть экстракта.
Обработка результатов анализа. Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен проб и стандартных растворов. Содержание ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ в анализируемой пробе (X, мг/кг или мг/л) определяют по формуле:
A
X = -,
P
где:
A - количество ГМП, ТМДИ, ГМДИ, ХГИ, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;
P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.
Требования безопасности. Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях.
