"Методические указания по лабораторным исследованиям на гельминтозы плотоядных"
(одобрены Госагропромом СССР 29.12.1985)

1.1. Трихоцефалез, дирофиляриоз, другие нематодозы, тениидозы, описторхоз - наиболее распространенные гельминтозы собак, лисиц, песцов, куниц, соболей, кошек и других плотоядных. Болезни протекают остро и хронически.

1.2. Диагноз на указанные гельминтозы устанавливают на основании результатов копрологического исследования с учетом эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных.

1.3. Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют пробы свежих фекалий массой около 5 г отдельно от каждого животного, для посмертной - труп животного. Материал упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию фекалии не позднее 24 ч после взятия, труп - не позднее 5 ч после гибели.

Исследование крови на дирофиляриоз проводят на месте.

2.1. Фекалии исследуют методом гельминтоскопии и одним из флотационных методов.

2.2. Пробы фекалий вначале осматривают на наличие зрелых члеников. Надо при этом учитывать, что членики дипилидиум белого цвета, похожи на огуречные семена, заполненные капсулами, в которых по 5 - 20 яиц. Членики других цестод однотипны, белого цвета, внутри их - капсулы с яйцами.

2.3. Метод флотации эффективен при диагностике нематодозов. Берут 3 г фекалий, помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 0,5 - 1,0 г натрия карбоната (сода кальцинированная), тщательно растирают и добавляют порциями флотационный раствор аммония нитрата с уд. массой 1,3 (1500 г аммония нитрата растворяют в 1 л горячей воды) до краев стакана, фильтруют через капроновое сито, отстаивают в течение 10 мин. Металлической петлей снимают 3 капли поверхностной пленки, переносят их на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

При микроскопии учитывают, что яйца различных нематод имеют следующие признаки:

трихоцефалюсы - коричневого цвета, бочковидной формы, с пробочками на полюсах;

токсаскарисы - темно-коричневого цвета, округлой формы, с гладкой оболочкой,

токсокары - темно-коричневого цвета, круглой формы, с ячеистой оболочкой;

анкилостомы - серого цвета, овальной формы, внутри их - шары дробления;

унцинарии - схожи с яйцами анкилостомы, только несколько крупнее.

2.4. Метод комбинированный с насыщенным раствором аммония нитрата. Он наиболее эффективен при диагностике тениидозов.

Берут 3 г фекалий, помещают в стакан емкостью 50 мл, добавляют 0,5 - 1,0 г натрия карбоната, тщательно растирают, добавляют порциями воду до краев стакана, фильтруют, отстаивают в течение 5 мин, надосадочный слой сливают. Осадок выливают в пробирку, центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 3 - 5 мин, надосадочную жидкость отсасывают, добавляют насыщенный раствор аммония нитрата, осадок суспендируют и вновь центрифугируют при том же режиме. Металлической петлей снимают 3 капли поверхностной пленки, переносят их на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

При микроскопии надо учитывать, что яйца тениид однотипны по морфологии, кроме яиц дифиллоботрии, овальной формы, бурого цвета, с радиально исчерченной толстой оболочкой, внутри содержат округлую онкосферу с шестью крючочками. Яйца дифиллоботрии - овальной формы, с крышечкой на одном полюсе и штифтиком на другом, светло-коричневого цвета, внутри содержат зародыш с шестью крючочками и желточные клетки.

2.5. Для диагностики описторхоза применяют комбинированный метод с использованием насыщенного раствора цинка хлорида.

Фекалии обрабатывают, как указано в п. 2.4, но после удаления надосадочной жидкости осадок вновь заливают водой, отстаивают 5 мин, надосадочный слой отсасывают. Осадок переливают в пробирку и центрифугируют при 1 тыс. об/мин в течение 2 мин, надосадочный слой отсасывают, к осадку добавляют насыщенный раствор цинка хлорида с уд. массой 1,8 (2000 г цинка хлорида растворяют в 1 л холодной воды), осадок суспендируют и центрифугируют при том же режиме.

Металлической петлей снимают 3 капли поверхностной пленки, переносят их на предметное стекло, к каждой капле добавляют водный раствор глицерина (1:1), накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом.

При микроскопии необходимо учитывать, что яйца описторхиса - мелкие, овальной формы, светло-золотистого цвета, на суженном полюсе имеется крышечка, на другом - штифтик.

2.6. Периферическую кровь собак на дирофиляриоз исследуют сразу после взятия (на месте). Каплю крови помещают на предметное стекло, добавляют 2 капли дистиллированной воды или 1%-ного водного раствора уксусной кислоты, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа.

Личинки дирофилярии белого цвета, подвижные.

3.1. Трупы животных вскрывают. Исследованию подвергают тонкие и толстые кишки, печень с желчным пузырем.

3.2. Тонкие и толстые кишки отделяют, разрезают, содержимое выливают в капроновый мешочек и промывают его водой до тех пор, пока вода не будет прозрачной. Осадок порциями переносят в чашку Петри и исследуют визуально или под лупой.

В тонком отделе кишечника локализуются тении, мультицепсы, дипилидиумы, эхинококки, альвеококки, дифиллоботрии, токсаскарисы, токсокары, анкилостомы, унцинарии.

Дифференциация тениид основана на признаках, приведенных в таблице.

Токсаскариса (Toxascaris leonina) - нематода светло-желтого цвета, головной конец снабжен узкими боковыми крыльями.

Токсокара (Toxocara canis) - нематода светло-желтого цвета, несколько крупнее токсаскарисы, головной конец снабжен тремя губами и широкими боковыми крыльями.

Унцинария (Uncinaria stenocephala) - нематода светло-желтого цвета, головной конец снабжен ротовой капсулой, вооруженной хитиновыми пластинками.

Анкилостома (Ancylostoma caninum) - нематода крупнее унцинарии, ротовая капсула вооружена хитиновыми пластинками и тремя крючковидными зубами.

В толстом отделе кишечника локализуется трихоцефала (Trichocephalus vulpis), которая имеет нитевидный головной конец и толстый хвостовой.

3.3. Сердце, печень с желчным пузырем в отдельности разрезают, промывают водой, затем органы удаляют, а промывные воды частями переносят в чашку Петри и просматривают невооруженным глазом или под лупой.

В сердце локализуется дирофилярия (Dirofilaria immitis) - крупная нематода красного цвета.

В желчном пузыре, желчных ходах печени - описторхис (Opisthorchis felineus) - мелкая трематода ланцетовидной формы.

4. Результат исследования считают положительным при обнаружении гельминтов, их члеников, яиц или личинок.

5. Срок исследования - 2 дня.