"Методические указания по определению остаточных количеств хлорорганических пестицидов и продуктов их разложения (гамма-изомера ГХЦГ, альфа-изомера ГХЦГ, гептахлора, альдрина, кельтана, ДДЭ, ДДД, ДДТ) в воде хроматографическими методами при совместном присутствии"
(утв. Минздравом СССР 01.07.1986 N 4120-86)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

2.1.1. Принцип метода

Для повышения представительности анализа и снижения пределов обнаружения (при определении хлорорганических пестицидов в подземных водах, водоемах рыбохозяйственного назначения и т.п.) концентрирование анализируемых соединений осуществляется с помощью экстракционного извлечения из 5 - 10 л воды бензолом, находящимся в сополимере стирола с 2% дивинилбензола, помещенном в стеклянную колонку.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемые количества анализируемых соединений с помощью газожидкостной хроматографии составляют: -изомер ГХЦГ, -изомер ГХЦГ, гептахлор, альдрин - 0,01 нг, кельтан, 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДЭ - 0,02 нг. Линейный динамический диапазон детектирования находится в пределах 0,01 - 1,7 нг.

Минимально открываемые количества анализируемых соединений на пластинках с окисью алюминия 0,5 - 1,0 мкг, на пластинках "Силуфол" - 0,2 - 0,5 мкг. Пределы обнаружения, средние значения определения, стандартные отклонения и доверительные интервалы приведены в таблице 1 и таблице 2.

Ацетон, чда, ТУ 6-09-3513-75.

Аммиак водный, чда, ГОСТ 3780-74.

Алюминия окись для хроматографии 2 ст. активности, ч, ТУ 6-09-5296-78.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Кальций сернокислый, чда, ГОСТ 3210-77.

Кислота серная, ч, ГОСТ 4204-77.

Натрий сернокислый безводный, ч, ГОСТ 4106-76.

н-Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.

Пластинки для тонкослойной хроматографии "Силуфол" UV-254 (ЧССР).

Силикагель ЛС 5/40 м для тонкослойной хроматографии с 13% гипса (ЧССР, Хемапол).

Силикагель КСК N 2, ГОСТ 3956-76.

Сополимер стирола с 2% дивинилбензола, размер гранул 0,5 - 1 мл (полупродукт при производстве ионообменных сорбентов).

Для отмывки сополимера от мономеров, не вошедших в реакцию сополимеризации, 20 г сополимера помещают в делительную воронку на 250 мл, заливают бензолом и оставляют на 2 часа, периодически встряхивая. Затем сливают бензол и сополимер, заливают новой порцией растворителя. Отмывку продолжают до тех пор, пока в остатке после упаривания слитого бензола не будет характерного запаха мономеров.

Кислота соляная, ч, ГОСТ 3118-77, водный раствор (1:1).

Кислота азотная, ч, ГОСТ 4461-77, водный раствор (1:1).

Хроматон N, 0,16 - 0,20 мм, промытый кислотой и силанизированный ДМХС с 5% SЕ-30 (ЧССР, Хемапол).

Хромосорб W, 80 - 100 меш, промытый кислотой и силанизированный ДМХС с 3% OV-17.

Серебро азотнокислое, хч, ГОСТ 1277-75.

2-Феноксиэтанол, хч, ТУ 6-09-9398-77.

о-Толуидин, ч, ТУ 6-09-66-75.

Этиловый спирт, 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77.

Перекись водорода, хч (30% водный раствор), ГОСТ 10929-76.

Проявляющий реактив N 1. 0,5 г азотнокислого серебра помещают в мерную колбу на 100 мл, приливают 5 мл дистиллированной воды, 7 мл аммиака и доводят до метки ацетоном. В готовый раствор можно добавить 0,2 мл перекиси водорода. Раствор следует хранить в колбе с притертой пробкой в темном месте. Годен для использования в течение 3-х дней. Для обнаружения определяемых соединений на пластинке 9 х 12 см расходуется 8 - 10 мл раствора.

Проявляющий реактив N 2. 0,25 г азотнокислого серебра помещают в мерную колбу на 100 мл, приливают 2,5 мл дистиллированной воды, 5 мл 2-феноксиэтанола, доводят до метки ацетоном и добавляют 3 капли 30-процентного раствора перекиси водорода.

Проявляющий реактив N 3. 0,5 г о-толуидина помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки этиловым спиртом.

Стандартные растворы: 10 мг соответствующего пестицида (изомеры ГХЦГ, гептахлор, кельтан, ДДТ, ДДД, ДДЭ, хч) помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки н-гексаном. Хранят в склянках с притертыми пробками в холодильнике.

Ротационный испаритель любого типа, ТУ 25-11-917-74.

Воронки делительные емкостью 100 и 500 мл, тип VIII, ГОСТ 3613-75.

Колбы мерные емкостью 10, 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Пипетки емкостью 1, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Фильтры бумажные, ТУ 6-09-1678-77.

Сито капроновое 100 меш (1600 отверстий на кв. см).

Пластинки стеклянные 9 х 12 или 12 х 18 см.

Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок, ГОСТ 10391-74.

Камера для опрыскивания пластинок, ТУ 25-11-430-70.

Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75.

Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411-76.

Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов ("Цвет"-106 и др.).

Водяная баня, ТУ 46-22-603-75.

Электроплитка, ГОСТ 306-76.

Аппарат для измельчения силикагеля любой марки.

Стеклянный лабораторный холодильник ХПГ, ГОСТ 9499-70.

Вакуумный водоструйный стеклянный насос, ГОСТ 10696-75.

Источник ультрафиолетового света, ТУ 3-3-1304-75.

Аппарат для встряхивания любого типа, ТУ 64-1-1081-73.

2.4.1. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 за N 2051-79.

2.4.2. Приготовление пластинок для ТСХ с тонким слоем окиси алюминия. Смешивают 50 г просеянного через сито 100 меш окиси алюминия, 5 г сернокислого кальция и 75 мл дистиллированной воды. Смесь размешивают в фарфоровой ступке или аппарате для встряхивания в течение 15 минут. Около 10 г сорбционной массы наливают на стеклянную пластинку (9 х 12 см) или около 20 г на пластинку 13 х 18 см, покачивая равномерно распределяют по поверхности. Сушат в горизонтальном положении при комнатной температуре в течение 18 - 20 часов или 20 минут при комнатной температуре, а затем 45 минут в сушильном шкафу при температуре 110 °С. Хранят в эксикаторе.

2.4.3. Приготовление пластинок с тонким слоем силикагеля. 35 г силикагеля КСК, просеянного через сито 100 меш, смешивают с 2 г сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной воды в фарфоровой ступке или на аппарате для встряхивания в течение 15 мин. Нанесение на пластинку сорбционной массы проводят так, как описано выше. Порция сорбционной массы рассчитана на 10 пластинок. Пластинки сушат на воздухе при комнатной температуре 12 часов и затем активируют в сушильном шкафу при 110 °С в течение 30 минут. Хранят в эксикаторе.

Если пластинки с тонким слоем силикагеля КСК темнеют после облучения УФ-светом, силикагель перед измельчением следует очистить от примесей. Для этого силикагель заливают на 18 - 20 часов водным раствором соляной кислоты (1:1), затем кислоту сливают, промывают силикагель водой до нейтральной реакции промывных вод, заливают водным раствором азотной кислоты (1:1) и кипятят в круглодонной колбе в течение 2 - 3 часов. Кислоту сливают, промывают силикагель водой до нейтральной реакции промывных вод, сушат в сушильном шкафу 4 - 6 часов при 130 °С, измельчают и просеивают через сито 100 меш.

При использовании для приготовления пластинок силикагеля ЛС 14 г этого силикагеля смешивают с 38 мл дистиллированной воды. На одну пластинку наносят 5 - 7 г сорбционной массы и далее поступают, как описано выше.

При использовании пластинок "Силуфол" (ЧССР) проводят их предварительную промывку аммиаком. Для этого пластинку помещают в хроматографическую камеру, на дно которой налит аммиак. После подъема фронта растворителя до конца пластинки ее вынимают из камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу до исчезновения запаха аммиака. Непосредственно перед использованием пластинку активируют в сушильном шкафу при 65 °С в течение 4 минут.

Пробу воды (250 мл) помещают в делительную воронку и извлекают хлорорганические пестициды тремя порциями н-гексана (3 х 30 мл). Продолжительность одной операции экстрагирования 3 минуты. К объединенному гексановому экстракту приливают 10 мл серной кислоты, насыщенной безводным сернокислым натрием, и осторожно несколько раз встряхивают. Кислотный слой отбрасывают. Обработку гексанового слоя кислотой повторяют до тех пор, пока кислота не станет бесцветной. Очищенный гексановый экстракт промывают несколькими порциями (около 10 мл) дистиллированной воды до нейтральной реакции промывных вод, сушат безводным сернокислым натрием (10 - 15 г) и удаляют растворитель на ротационном испарителе до объема 0,3 - 0,5 мл, а затем досуха на воздухе. Сухой остаток растворяют в 1 мл н-гексана и вводят в хроматограф 3 - 5 мкл.

При необходимости определения пестицидов в пробах на уровне 0,01 - 1,0 мкг/л и ниже пробу воды (5 - 10 л) пропускают со скоростью 80 - 100 мл/мин. через колонку, подготовленную следующим образом: 20 г сополимера стирола с 2% дивинилбензола, предварительно отмытого бензолом от продуктов, не вошедших в реакцию сополимеризации, и набухшего в бензоле, переносят с водой в стеклянную колонку (длина 40 см, внутренний диаметр 2,15 см) с краном на конце. Для набухания сополимер помещают в делительную воронку на 250 мл и заливают избытком бензола на 1,5 - 2 часа. Высота слоя сополимера в колонке - 21 см, количество бензола, связанное сополимером, - 44 - 46 мл. Сверху и снизу слой сополимера ограничивают тампонами из стекловаты. После окончания пропускания воды оставшуюся воду в колонке отсасывают с помощью вакуумного водоструйного насоса, затем на 40 - 60 минут заливают чистым бензолом и собирают 100 мл бензольного элюата, содержащего концентрируемые пестициды, со скоростью 2 мл/мин. С полученным бензольным элюатом поступают так, как это описано выше.

--------------------------------

<*> Внутренний стандарт.

Оценку содержания хлорорганических пестицидов в пробе при определении с помощью газожидкостной хроматографии проводят по следующей формуле:

Оценку содержания хлорорганических пестицидов в пробе при определении с помощью тонкослойной хроматографии проводят путем визуального сравнения размера пятен и интенсивности пятен, интенсивности их окраски со стандартами. Количественное определение может быть проведено с использованием денситометра ВИАН-170.

Содержание хлорорганических пестицидов в пробе рассчитывают по следующей формуле:

где:

Х - содержание препарата в пробе, мг/л;

А - количество препарата, найденное путем сравнения со стандартом или посредством денситометрирования, мкг;

Р - объем анализируемой пробы, мл;

R - степень определения, найденная предварительно, %.

Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами.

4. Настоящие Методические указания подготовлены на основании разработок В.Д. Чмиля и З.Ф. Юрковой (ВНИИГИНТОКС, Киев), а также на основании уточнения и унификации Методических указаний, утвержденных Минздравом СССР ранее:

- Определение ДДТ, ДДЭ, ДДД, альдрина, дильдрина, гептахлора, кельтана, метоксихлора, эфирсульфоната и других ядохимикатов в воде, продуктах питания, кормах и биологических средах хроматографией в тонком слое. N 1112-73 от 30.07.73;

- Определение остаточных количеств хлорорганических пестицидов в присутствии полихлорированных бифенилов в воде методом газожидкостной хроматографии с детектором по захвату электронов. N 1540-76 от 20.12.76;

- Методические указания по определению хлорорганических пестицидов в воде, продуктах питания, кормах и табачных изделиях хроматографией в тонком слое. N 2142-80 от 28.01.1980.

5. Методические указания апробированы: филиал ВНИИГИНТОКСа (Бунатян Ю.А., Геворгян А.А.).