"Методические указания по лабораторным исследованиям на дизентерию свиней, вызываемую трепонемой"
(утв. Минсельхозом СССР 25.12.1983)

1.1. Дизентерия свиней, вызываемая трепонемой (Treponema hyodysenteriae), - острая инфекционная болезнь.

Бактероиды, фузобактерии, вибрионы, клостридии и другие микроорганизмы кишечника свиней способствуют созданию благоприятных условий для проявления трепонемами патогенного действия.

1.2. Диагноз на дизентерию свиней ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных, а также результатов лабораторного исследования.

1.3. Лабораторные исследования на дизентерию заключаются в обнаружении трепонем при микроскопическом исследовании патологического материала.

1.4. Материалом для прижизненной диагностики служат фекалии, для посмертной - слизистая оболочка большой ободочной кишки павших или убитых с диагностической целью свиней.

1.4.1. Фекалии от больных свиней берут ватным тампоном из прямой кишки. Для этого стерильный ватный тампон вводят в прямую кишку на глубину 7 - 8 см и делают вращательные движения, прижимая тампон к стенке кишки, затем его извлекают и помещают в пробирку с 8 - 10 мл физиологического раствора.

1.4.2. У животных, убитых с диагностической целью, вырезают участок большой ободочной кишки, освобождают ее от содержимого, промывают водопроводной водой, затем соскабливают скальпелем около 1 г слизистой оболочки, переносят в пробирку с 8 - 10 мл физиологического раствора и суспендируют.

Допускается отбор материала и от трупов не позднее 2 ч после гибели.

1.5. Приготовленную суспензию исследуют непосредственно в хозяйстве или отправляют в ветеринарную лабораторию. При пересылке материала в лабораторию пробирки закрывают резиновыми пробками и помещают в термос со льдом.

1.6. Материал должен быть исследован в течение 2 - 4 ч, при хранении на холоде - в течение 6 - 8 ч.

2.1. Материал исследуют микроскопически, методом фазового контраста, путем просмотра в темном поле или в проходящем свете (подкрашенных и окрашенных препаратов).

2.1.1. Стекла, используемые для микроскопии, должны быть бесцветными, прозрачными, чистыми, без царапин и бликов.

2.2. Метод фазового контраста. Для исследования этим методом используют устройство КФ-4 или МФА-2, осветитель ОИ-9 или подобный, окуляр 7x - 10x, объектив 40x и светофильтр ЗС-2. Установку фазово-контрастного устройства и работу с ним выполняют, руководствуясь указаниями прилагаемой к нему инструкции.

2.2.1. Для исследования на чистое обезжиренное предметное стекло наносят 1 - 2 капли заранее приготовленной суспензии слизистой оболочки или фекалий и накрывают их покровным стеклом, избегая образования под ним пузырьков воздуха. На одном предметном стекле можно готовить три раздавленных капли.

2.3. Микроскопия в темном поле. Препараты готовят, как указано в подпункте 2.2.1, и просматривают при увеличении в 280 - 400 раз (окуляр 7x или 10x, объектив 40x - водная иммерсия).

2.4. Исследование подкрашенных нативных препаратов. На предметное стекло наносят каплю суспензии исследуемого материала и к ней добавляют каплю красителя (см. приложение), накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом в проходящем свете при увеличении в 200 - 400 раз.

2.5. Исследование окрашенных препаратов. Из суспензии готовят мазки, фиксируют метиловым спиртом или над пламенем горелки и окрашивают по Граму, Романовскому - Гимзе или фуксином Пфейффера.

2.6. В нативных препаратах трепонемы имеют вид подвижных извитых нитей с острыми концами, перемещающихся поступательно, змеевидно. Различают 3 вида трепонем свиней: крупные - длиной до 20 мкм, шириной 0,2 мкм, с 8 - 12 завитками; средние - длиной 8 - 12 мкм, с 6 - 8 завитками и малые - длиной до 8 мкм, шириной 0,1 мкм, с 3 - 4 завитками. Завитки расположены равномерно.

По размерам вибрионы в сравнении с трепонемами в 2 - 4 раза толще, с тупыми концами. Могут приобретать вид спирали с тремя и более изгибами, но меньшей амплитудой их расположения, чем у трепонем. Движение вибрионов - вращательное вокруг длинной оси.

У большинства больных дизентерией свиней при исследовании раздавленной капли в одном поле зрения микроскопа обнаруживают 5 - 10 и более (в зависимости от тяжести процесса) средних и крупных трепонем.

В окрашенных фиксированных препаратах обнаруживают грамотрицательные микроорганизмы с характерной для трепонем морфологией.

1. Краситель состоит из метиленовой сини - 3 г, спирта-ректификата - 25 мл, воды дистиллированной - 90 мл, 1%-ного раствора едкого кали - 1 мл, глицерина - 10 мл.

Метиленовую синь растворяют в водно-спиртовой смеси и помещают на 48 ч в термостат при 37 °C. Затем фильтруют и добавляют раствор едкого кали и глицерина.

2. При отсутствии метиленовой сини можно использовать краску, приготовленную по следующей прописи: бытовая краска для шерсти - черная или коричневая - 1 таблетка (около 5 г), спирт-ректификат - 25 мл, вода дистиллированная - 65 мл, карболовая кислота кристаллическая - 1 г, глицерин - 10 мл.

Техника приготовления краски такая же, как указано в п. 1.