"Методические указания по определению остаточных количеств дурсбана в растительном материале, почве и воде тонкослойной и газожидкостной хроматографией"
(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 N 2097-79)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

Дурсбан.

О,О-диэтил-О-(3,5,6-трихлорпиридил)-тиофосфат.

Инсектицид стабилен длительный период при комнатной температуре в нейтральной и слабокислой среде. Скорость химического распада увеличивается пропорционально повышению температуры и pH.

Устойчивость к воздействию УФ-света снижается при повышении влажности. Дурсбан 40% э.к. рекомендуется для испытаний на хлопчатнике против хлопковой совки, карадрины и сосущих вредителей (1,5 - 2,0 кг/га), в борьбе с колорадским жуком на картофеле (1,2 - 2,0 кг/га), на плодовых культурах против яблонной плодожорки, клещей и тлей в концентрации 0,2%, на свекле в борьбе с обыкновенным свекловичным долгоносиком в дозировке 1,5 - 2,0 кг/га.

Гранулированный дурсбан представляет интерес в борьбе с подгрызающими совками на табаке, хлопчатнике, а также с проволочниками на кукурузе, картофеле.

ПДК и ДОК дурсбана в продуктах питания, воде и почве еще не установлены.

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на экстракции дурсбана из проб смесью ацетона с 0,05 н водным раствором хлорида кальция (1:1), очистке перераспределением в н-гексан и хроматографическом (ТСХ и ГЖХ) определении.

Хроматографическое в тонком слое определение проводится на пластинках со слоем силикагеля марки КСК или на "Силуфоле-UV 254". Хроматографируют в системе н-гексан - ацетон (9:1), проявляют пластинки 2,6-дибром-N-хлорхинонимином или другими пригодными для фосфорорганических инсектицидов проявителями.

Для газохроматографического определения используют детекторы ДТИ, по захвату электронов (ДЭЗ) или постоянной скорости рекомбинации (ДПР), колонку стеклянную с 5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS длиной 1 м.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

2.1.3. Избирательность метода

Другие ФОП не мешают определению.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, ч., ГОСТ 2603-63.

Гексан, х.ч., МРТУ 6-09-2937-66.

Кальций хлористый, х.ч., ГОСТ 4161-67.

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-66.

Уголь активированный марки КАД или ОУ-А.

Силикагель КСК с флуоресцирующей добавкой или пластинки "Силуфол-UV 254".

Окись алюминия для хроматографии, МРТУ 6-09-5296-68-4.

5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20).

Проявляющие реактивы:

1. 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане.

2. 1-процентный раствор 4-(р-нитробензил)-пиридина в ацетоне;

10-процентный раствор тетраэтиленпентамина в ацетоне.

3. Бромфеноловый синий (0,03 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона, затем смесь разбавляют до 100 мл 0,5-процентным водно-ацетоновым раствором азотнокислого серебра (1 ч. воды : 3 ч. ацетона)); 5-процентный раствор уксусной кислоты.

Азот особой чистоты.

Стандартные растворы дурсбана: 0,1 - 1,0 мкг/мл в гексане.

2% полиэтиленгликольсукцинат на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 - 0,2 мм (для альтернативной колонки)).

Водород.

2.3. Приборы и посуда

Хроматограф Цвет-106 или аналогичный прибор с детектором термоионным или по захвату электронов (постоянной скорости рекомбинации).

Аппарат для встряхивания.

Ротационный вакуумный испаритель или другой прибор для отгонки растворителей под вакуумом.

Хроматоскоп (хемоскоп) с излучением 250 - 280 нм.

Колбы конические со шлифами на 250 - 500 мл.

Колбы круглодонные на 100 - 500 мл.

Делительные воронки на 0,5 - 1,0 л.

Колбы мерные на 100 мл.

Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см, внутренним диаметром 15 мм.

Хроматографическая камера.

Камера для опрыскивания хроматограмм.

Пульверизаторы.

Пипетки на 0,1 мл, 1 мл, 5 мл, 10 мл.

Почвенное сито.

Микрошприц на 10 мкл.

Центрифуга с центрифужными пробирками на 500 мл.

Цилиндры мерные с притертой пробкой на 50 мл.

2.4. Отбор проб и подготовка их к анализу.

Растительную пробу (картофель, лук, яблоки, сено, силос и листья зеленых растений, в том числе хлопчатника) измельчают ножом на кусочки 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.

Почву в естественно-влажном состоянии или воздушно-сухую просеивают через почвенное сито и отбирают для анализа среднюю пробу 10 г.

Проба воды - 100 мл.

2.5. Проведение определения

Анализируемые навески помещают в конические колбы, пробы воды - в делительные воронки, куда добавляют по 5 г хлористого кальция.

Из растений дурсбан экстрагируют смесью ацетона с водой (1:1) трижды по 40 - 50 мл, из почвы - 50 мл смеси ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1). К пробам воды в делительные воронки добавляют равный объем ацетона. Экстракцию инсектицида из проб производят с помощью механического встряхивания в течение 30 мин. (для воды и растений) или 1 - 1,5 час. для почвы при комнатной температуре. Далее пробы центрифугируют при 3000 об./мин. (центрифугирование можно заменить фильтрованием). Объединенные экстракты из растительных проб, а также пробы воды охлаждают в холодильнике или в смеси льда с солью. Выпавший осадок отфильтровывают. Объем центрифугата (фильтрата) замеряют и количественно переносят (весь или аликвотную часть) в делительную воронку, куда приливают н-гексан в количестве, составляющем меньше половины объема, находящегося там центрифугата, взбалтывают 3 - 5 мин. После расслоения жидкостей нижний водно-ацетоновый слой сливают в другую делительную воронку, а гексан-ацетоновую фракцию собирают в коническую колбу на 100 мл. Реэкстракцию гексаном проводят еще два раза. Объединенную гексан-ацетоновую смесь сушат над безводным сульфатом натрия и количественно переносят в колбу для отгона растворителей (сушить гексановую фракцию можно путем фильтрования через безводный сернокислый натрий). Растворитель выпаривают на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 40 °С. Дальнейшее определение проводят хроматографическими методами.

В некоторых случаях для растительных проб требуется еще дополнительная очистка. С этой целью применяют колоночную хроматографию, а именно пробу, сконцентрированную до 3 - 5 мл, вносят в колонку (30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого натрия (2 - 3 см), окиси алюминия (3 см), активированного угля КАД-молотый или ОУ-А (3 см) и снова безводного сернокислого натрия (1 см). Предварительно через колонку пропускают 30 - 40 мл хлороформа для уменьшения сорбционной емкости. Из колонки дурсбан элюируют 100 мл хлороформа. Хлороформ удаляют под вакуумом, остаток растворяют в гексане и определяют количество инсектицида хроматографическими методами.

2.5.1. Методы аналитического определения

Проба с помощью капилляра или микропипетки наносится на хроматографическую пластинку со слоем силикагеля или на "Силуфол". Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с содержанием 1; 5 и 10 мкг дурсбана. Хроматографируют в системе гексан - ацетон (9:1). Когда фронт растворителя поднимется от линии старта на 10 см, пластинку вынимают, проветривают и опрыскивают одним из проявляющих реагентов:

1. Хроматограмму опрыскивают 0,5-процентным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане, затем нагревают в течение 5 - 7 мин. в термостате при 110°. Дурсбан проявляется в виде оранжевых пятен на светлом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.

2. Хроматограмму опрыскивают 1-процентным раствором 4-(р-нитробензил)-пиридином, нагревают в термостате 3 - 5 мин. при 110°, затем снова опрыскивают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина в ацетоне. Дурсбан проявляется в виде сине-фиолетовых пятен на светлом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.

3. Хроматограмму опрыскивают бромфеноловым реагентом с последующим снятием фона обработкой пластинки 5-процентным раствором уксусной кислоты. На пластинке проявляются сине-фиолетовые пятна дурсбана на светло-желтом фоне. Нижний предел обнаружения 3 мкг.

Пластинки со слоем силикагеля, в который внесен флуоресцирующий краситель, или "Силуфол-UV 254" можно без проявления просматривать в хемоскопе. Инсектицид определяют по тушению флуоресценции. Нижний предел обнаружения 1 мкг.

Условия определения газожидкостной хроматографией

После отгонки растворителя к сухому остатку добавляют 1 - 2 мл гексана, колбу закрывают пробкой, тщательно обмывают внутреннюю поверхность колбы. Аликвотную часть раствора (2 - 5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

Время удерживания дурсбана в указанных условиях работы ДЭЗ (ДПР) 3 мин. 5 сек. или в указанных условиях работы ДТИ 6 мин. 20 сек.

Количество дурсбана в пробе проводят методом соотношения со стандартами по высоте пиков.

В хроматограф вводят 2 мкл рабочего раствора. Линейность детектирования сохраняется в пределах 1 - 20 нг.

2.6. Содержание дурсбана в анализируемой пробе вычисляют по формуле:

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору пипеткой известное количество гексана.

В качестве альтернативной колонки можно использовать стеклянную колонку длиной 2 м и внутренним диаметром 3 мм, заполненную хроматоном N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 2% полидиэтиленгликольсукцинатом.

Требования безопасности

Общепринятые требования безопасности при работе с горючими растворителями и фосфорорганическими пестицидами.

Авторы

Петрова Т.М., Андреев Ю.Б. - Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, Ленинград.