"Методические указания по лабораторным исследованиям на злокачественный отек животных"
(утв. Минсельхозом СССР 05.01.1984)

1.1. Злокачественный отек - острая неконтагиозная инфекционная болезнь всех видов животных, возникающая после ранений, родов, травм, кастраций и характеризующаяся быстрым появлением газовых отеков, распадом тканей и сепсисом.

1.2. Злокачественный отек имеет полимикробную этиологию. Основными возбудителями являются Cl. septicum, Cl. oedematiens, Cl. sordellii, Cl. perfringens, Cl. histolyticum, иногда Cl. chauvoei, каждый из которых может вызвать заболевание самостоятельно, но чаще в ассоциации друг с другом, другими анаэробными или аэробными микроорганизмами. Из сопутствующих микроорганизмов наиболее важную роль играет Cl. sporogenes, который усиливает действие других патогенных анаэробов, придает процессу гнилостный характер и тем самым отягощает течение болезни.

1.3. Диагноз на злокачественный отек ставят на основании клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных с обязательным подтверждением лабораторными исследованиями.

1.4. Для исследования в лабораторию направляют кусочки пораженных мышц, тканевый экссудат и паренхиматозные органы, а от трупов овец, кроме того, направляют часть сычуга и тонкого отдела кишечника с содержимым (для одновременного исследования на брадзот и энтеротоксемию).

1.5. Исследование на злокачественный отек включает микроскопию мазков из патологического материала, посевы на питательные среды и заражение лабораторных животных.

2.1. Из пораженных тканей и другого патологического материала делают мазки-отпечатки и окрашивают их по Граму или Муромцеву.

2.2. При микроскопии мазков отмечают форму микробов, их расположение, наличие вегетативных форм, спор (споры окраску не воспринимают), капсул. Описание морфологии отдельных возбудителей дано в таблице 1.

3.1. Высевы из патологического материала делают в среду Китта - Тароцци, МПБ и на МПА. Среду Китта - Тароцци предварительно регенерируют прогреванием в кипящей водяной бане в течение 15 - 30 мин, после чего быстро охлаждают до 45 - 50 °C.

Одновременно высев можно делать и на глюкозо-кровяной агар Цейсслера в чашках Петри.

3.2. Засеянные пробирки помещают в термостат на 24 - 48 ч при 37 - 38 °C. Чашки выдерживают в анаэробных условиях 24 - 48 ч.

3.3. Для создания анаэробных условий наиболее приемлем физический метод. Чашки, не переворачивая (дном вниз), помещают в микроанаэростат, или эксикатор, из которого удаляют воздух при помощи вакуум-насоса.

Из других методов можно применять химический с использованием гидросульфита натрия (Na₂S₂O₄) и бикарбоната натрия (Na₂CO₃).

3.4. При просмотре роста в жидких питательных средах необходимо обращать внимание на интенсивность и равномерность помутнения среды, степень газообразования. Характеристика роста отдельных возбудителей дана в таблице 1.

3.5. При обнаружении в среде Китта - Тароцци роста микроорганизмов, сходных с возбудителями злокачественного отека, делают дробный пересев на 3 - 4 чашки с агаром Цейсслера. Посевы инкубируют, как указано в п. 3.3. Просмотр посевов проводят с помощью лупы или под малым увеличением микроскопа, обращая внимание на форму колоний и наличие гемолиза (см. табл. 1).

4.1. Одновременно с посевом материала на питательные среды проводят заражение морских свинок. Для этого кусочки пораженных тканей и другой патологический материал измельчают, тщательно растирают в стерильной ступке с песком и готовят равномерную взвесь, добавляя небольшое количество МПБ. Полученную взвесь вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам массой 350 - 400 г в дозе 0,5 - 1,0 мл.

4.2. При наличии в исследуемом материале возбудителей злокачественного отека морские свинки погибают через 16 - 48 ч в зависимости от вида возбудителя. При вскрытии у павших животных обнаруживают патологоанатомические изменения, характерные для того или иного возбудителя (см. табл. 2).

4.3. Из трупа морской свинки делают посевы из места введения материала, крови сердца и печени в среду Китта - Тароцци, МПБ и на МПА. Мазки-отпечатки готовят из тех же органов, а также с диафрагмальной поверхности печени.

4.4. При необходимости проверки вирулентности выделенных культур суточную культуру, выращенную на среде Китта - Тароцци, вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам в дозе 0,5 - 1,0 мл.

4.5. Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 8 сут.

5. Диагноз на злокачественный отек считается установленным в случае получения одного из следующих результатов:

выделение из патологического материала культуры со свойствами, характерными для одного из возбудителей данного заболевания, и гибель хотя бы одной из двух зараженных исходным материалом или полученной культурой морских свинок с типичной для данного возбудителя патологоанатомической картиной и выделением из органов культуры возбудителя;

гибели хотя бы одной морской свинки из двух, зараженных исходным материалом, при наличии у нее типичной для данного возбудителя патологоанатомической картины и выделения из нее культуры возбудителя, если даже в посевах из исходного материала культуры возбудителя не выделено.

6. Срок исследования 8 сут.