"Методические указания по определению остаточных количеств валексона в растительном материале, почве и воде тонкослойной и газожидкостной хроматографией"
(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 N 2093-79)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1.1. Валексон.

1.2. 0,0-диэтилтиофосфорил-0-(альфа-цианобензальдоксим).

1.4. Фоксим, байтион, волатон, Bay-77488, ENT-27448.

1.5. В чистом виде жидкость светло-желтого цвета с Т кип. 102 °С при 0,01 мм рт. ст., Т пл. 3 - 4 °С. Хорошо растворяется в большинстве органических растворителей; растворимость в воде при 20 °С - 7 мг/л.

Разрушается в сильных кислотах и щелочных средах.

Выпускается в форме 50-процентного концентрата эмульсии, 40-процентного смачивающегося порошка для борьбы с сосущими и грызущими насекомыми на капусте, картофеле, томатах, яблонях и др. культурах, а также в виде 5-процентных гранул для борьбы с почвенными вредителями.

ПДК валексона в продуктах питания, воде и почве не установлена.

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении валексона из анализируемых проб органическим растворителем или для почвы смесью ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (смесь в соотношении 1:1), перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями с последующим определением тонкослойной или газожидкостной хроматографией с ТИД. При определении методом тонкослойной хроматографии пробу дополнительно чистят на колонке.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

2.1.3. Избирательность метода

Метафос, фталофос, фозалон, карбофос, диазинон, фосфамид, гардона, трихлорметафос-3 определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

Проявляющие реактивы:

1. 0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане;

2. 1-процентный раствор 4-(р-нитробензил)пиридина в ацетоне; 10-процентный раствор тетраэтиленпентамина в ацетоне;

3. Смесь бромфенолового синего и азотнокислого серебра в ацетоне:

А. 0,5-процентный водно-ацетоновый раствор азотнокислого серебра (1 ч. воды : 3 ч. ацетона);

Б. 0,03 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона, а затем разбавляют раствором А до 100 мл;

В. 5-процентный раствор уксусной кислоты.

Азот особой чистоты.

Водород.

Стандартные растворы валексона в ацетоне с содержанием 5 мкг/мл (для ТСХ) и в гексане с содержанием 0,5; 1; 2; 5; 7; 10 мкг/мл (для ГЖХ).

5-процентный SE-30 и 3-процентный XE-60 на хроматоне N (80 - 100 меш), силанизированный.

2-процентный полиэтиленгликольсукцинат на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм).

2.3. Приборы и посуда

Хроматограф Цвет-106 или аналогичный прибор с ТИД.

Аппарат для встряхивания.

Ротационный вакуумный испаритель или другой прибор для отгонки растворителей под вакуумом.

Хроматоскоп (хемоскоп) с излучением 250 - 280 нм.

Колбы конические со шлифами на 500 мл.

Колбы круглодонные на 500 мл.

Делительные воронки на 2 л, 1 л и 0,5 л.

Колбы мерные на 200 мл и 100 мл.

Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см, внутренним диаметром 15 мм.

Хроматографическая камера.

Камера для опрыскивания хроматограмм.

Пульверизаторы.

Пипетки на 0,1 мл, 1 мл, 5 мл, 10 мл.

Почвенное сито.

Микрошприц на 10 мкл.

2.4. Отбор и подготовка проб

Растительную пробу (овощи, фрукты, зеленую массу растений) измельчают ножом на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 см и отбирают среднюю пробу 25 г.

Почву в естественно-влажном состоянии или воздушно-сухую просеивают через почвенное сито и для анализа отбирают среднюю пробу 10 г.

Проба воды - 100 мл.

2.5. Проведение определения

Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 мл, пробы воды - в делительные воронки, куда добавляют по 10 г хлористого натрия.

Из растений валексон экстрагируют 100 мл смеси ацетона с водой (1:1), из почв - 50 мл смеси ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1). Из воды экстракцию валексона проводят хлороформом порциями по 120, 100 и 75 мл, экстракты объединяют.

Экстракцию инсектицида из образцов производят с помощью механического встряхивания в течение 30 мин. Растительные экстракты охлаждают в холодильнике или в смеси соли со льдом. Пробы отфильтровывают от растительных и почвенных остатков в делительные воронки через бумажный фильтр. Экстракцию повторяют еще два раза тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт подвергается очистке. Для этого в делительную воронку приливают гексан четыре раза по 20 мл. После встряхивания 3 - 5 мин. и расслоения жидкостей собирают гексановую фракцию в круглодонную колбу, высушивают путем фильтрования через безводный сернокислый натрий. Объединенный гексановый экстракт концентрируют под вакуумом при температуре не выше 40° до объема 0,5 - 1,0 мл.

При определении методов ТСХ или в случае, если методом ГЖХ получаются "грязные" хроматограммы, проводят дополнительную очистку. Это относится в основном к образцам из растительных объектов. Для этого в пробы добавляют 5 мл ацетонитрила (ацетонитрил можно заменить диметилформамидом, однако с первым растворителем очистка проходит значительно лучше) и доводят общий объем до 50 мл водой. Пробы встряхивают 1 - 2 мин., далее производят переэкстракцию валексона в гексан. С этой целью пробы переносят в делительную воронку, приливают 20 мл гексана, встряхивают 1 - 2 мин. и после разделения слоев гексановый сливают в круглодонную колбу для отгонки, фильтруя через безводный сернокислый натрий, а водно-ацетонитрильный еще два раза промывают гексаном. Объединенные гексановые экстракты концентрируют под вакуумом при 40° до 5 мл и проводят количественное определение.

В случае, если проба нуждается еще в очистке, то следует применить колоночную хроматографию, а именно, пробу вносят в колонку (30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого натрия (2 - 3 см), окиси алюминия для хроматографии (3 см), активированного угля КАД-молотый или ОУ-А (3 см) и безводного сернокислого натрия (1 см). Предварительно через колонку пропускают 30 - 40 мл хлороформа для уменьшения сорбционной емкости. Из колонки валексон элюируют 100 мл хлороформа при отсасывании с помощью водоструйного насоса. Хлороформ удаляют под вакуумом, остаток растворяют в гексане и определяют количество валексона хроматографическими методами.

Пробы воды, проэкстрагированные хлороформом, если необходимо, то чистят подобным способом.

Проба с помощью капилляра или микропипетки наносится на хроматографическую пластинку. Параллельно на пластинку наносят серию стандартных растворов с содержанием 1, 2 и 5 мг валексона. Хроматограмму развивают в системе гексан - ацетон (4:1), подсушивают на воздухе и обрабатывают одним из трех проявляющих реагентов.

1. Хроматограмму опрыскивают 0,5-процентным раствором 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане, а затем нагревают в течение 5 - 7 мин. в термостате при 110 °С. Валексон проявляется в виде оранжевых пятен на белом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.

2. Хроматограмму опрыскивают 1-процентным раствором 4-(р-нитробензил)-пиридина, нагревают в сушильном шкафу 3 - 5 мин. при 110 °С, затем снова опрыскивают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина в ацетоне. Валексон проявляется в виде сине-фиолетовых пятен на светлом фоне. Нижний предел обнаружения 0,5 мкг.

3. Хроматограмму опрыскивают бромфеноловым реагентом с последующим снятием фона в результате обработки пластинки 5-процентным раствором уксусной кислоты. Валексон проявляется в виде сине-фиолетовых пятен на светло-желтом фоне. Нижний предел обнаружения 3 мкг.

Пластинки со слоем силикагеля, в который внесен флуоресцирующий краситель, или пластинки "Силуфол UV-254" можно, не проявляя их, просматривать в хроматоскопе. Инсектицид определяют по тушению флуоресценции. Нижний предел обнаружения 1 мкг.

Содержание валексона в исследуемой пробе вычисляют по формуле:

Хроматограф Цвет-106 или другой модели с ТИД.

Скорость протяжки ленты самописца 1 см/мин.

Стеклянная колонка длиной 100 см и внутренним диаметром 3 мм, заполненная хроматоном N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30. Температура колонки и испарителя 130 °С. Скорость азота 25 мл/мин., водорода 15 мл/мин., воздуха 150 мл/мин. Время удерживания валексона 3 мин. 22 сек. Прочие ФОП выходят позже.

В хроматограф вводят 2 мкл рабочего раствора, линейность детектирования сохраняется в пределах 1 - 20 нг.

2.6. Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте пиков. Содержание валексона в анализируемой пробе вычисляют по формуле:

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит "зашкаливание", готовят более разбавленные растворы, добавляя к конечному раствору пипеткой известное количество гексана.

Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3 мм заполнена хроматоном N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм) с 2-процентным полидиэтилен-гликольсукцинатом. Температура колонки 190 °С, испарителя 200 °С.

Время удерживания валексона 1 мин. 37 сек. Прочие ФОП определению не мешают, т.к. выходят значительно позже, например, время удерживания метафоса 7 мин.

Настоящая методика включает разработки авторских коллективов:

1. Петрова Т.М., Федорова И.С., Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.

2. Лещинская Л.И., Новикова К.Ф., Косачева Е.И., Всесоюзный научно-исследовательский институт химических средств защиты растений, Москва.

3. Швец Д.А., Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, пос. Рамонь Воронежской обл.

Общепринятые требования безопасности при работе с горючими растворителями и фосфорорганическими пестицидами. Осторожно обращаться с ацетонитрилом, т.к. он ядовит.