"Методические указания по определению метафоса, фосфамида и хлорофоса в сушеных овощах и плодах (картофель, морковь, петрушка, яблоки, груши, слива) методами тонкослойной и газожидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 28.12.1982 N 2649-82)

--------------------------------

<*> Разработаны О.И. Залуцкой, Н.А. Самошинским, С.С. Кедеш (ЛТЭИ).

Краткая характеристика препаратов метафос, фосфамид и хлорофос приведена в Унифицированной методике.

Принцип метода. Метод основан на экстракции препаратов из сушеных овощей и плодов органическим растворителем (этилацетат) или смесью растворителей (30-процентный раствор ацетона в н-гексане), очистке полученных экстрактов и последующем качественном и количественном определении методами хроматографии в тонких слоях сорбентов и ГЖХ.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблицах 38 - 40.

Примечание. 1 - внесено 1/2 МДУ фосфамида; 2 - внесено количество фосфамида, соответствующее МДУ.

Реактивы и растворы. Спирт этиловый 96-процентный ректиф. Ацетон х.ч. или ч.д.а., перегнанный. н-Гексан х.ч. (дважды перегнанный, первая перегонка над активированным углем). Этилацетат. Гидроксид натрия. Нитрат серебра. Аммиак водный. Карбонат натрия кристаллический. Уксусная кислота ледяная. Цинковая пыль. Эфир диэтиловый. Спирт метиловый х.ч. Хлороформ х.ч. Диоксан ч.д.а. Бензол х.ч. Кислота хлороводородная х.ч., 0,1 н раствор. Растворимый крахмал. Хромовая смесь (насыщенный раствор бихромата калия в концентрированной серной кислоте). Оксид алюминия для хроматографии.

Проявляющие реагенты. N 1 - 0,25-процентный раствор п-диметиламинобензальдегида в этаноле. Хранят в темной склянке, готовят перед опрыскиванием пластинок, смешивая раствор п-диметиламинобензальдегида с ледяной уксусной кислотой в соотношении 10:1; N 2 - 4 н раствор гидроксида натрия; N 3 - раствор хлорида палладия. 0,5 г хлорида палладия помещают в мерную колбу на 100 мл, прибавляют 40 мл 0,1 н раствора хлороводородной кислоты, растворяют при нагревании (60 - 70 °C) на водяной бане. После полного растворения прибавляют дистиллированную воду до метки. Полученный раствор переносят в склянку с хорошо притертой пробкой. Хранят на холоде. Срок хранения - несколько месяцев; N 4 - раствор резорцина (2 г резорцина растворяют в 98 мл воды) и 10-процентный раствор соды кристаллической смешивают в соотношении 2:3 (смесь готовят перед опрыскиванием пластинок).

Сульфат кальция ч.д.а., высушенный при 160 °C в течение 6 ч и просеянный через сито (100 меш). Хранят в склянке с хорошо притертой пробкой. Сульфат натрия безводный ч.д.а.

Затем нейтрализуют кислоту 5-процентным раствором щелочи и промывают силикагель дистиллированной водой до отрицательной реакции на хлорид-ионы (проба с раствором нитрата серебра).

Для удаления содержащейся в силикагеле воды и части органических веществ его промывают диэтиловым эфиром в течение 6 ч при трех сливах. Затем для окончательного извлечения органических веществ силикагель промывают метанолом в течение 6 ч при трех сливах.

После этого силикагель помещают слоем 1 см на стекло и сушат в термостате при температуре 110 °C в течение 2 ч для стандартизации количества воды, содержащейся в адсорбенте. Очищенный таким образом силикагель хранят в склянке с хорошо притертой пробкой.

Стандартные растворы метафоса х.ч., фосфамида х.ч., хлорофоса х.ч. в н-гексане (100 мкг/мл).

Подготовка к определению. Приготовление хроматографических пластинок. Для приготовления сорбционной массы используют:

а) силикагель с гипсом. Силикагель (14 г) и 1,5 г гипса тщательно перемешивают в фарфоровой ступке, прибавляют 40 мл дистиллированной воды, получившуюся суспензию наносят на 7 - 8 пластинок (по 6 мл суспензии на пластинку);

б) силикагель с крахмалом. Силикагель (40 г), 1 г растворимого крахмала, 125 мл дистиллированной воды. Крахмал заваривают в 15 мл дистиллированной воды, добавляют остальную воду и силикагель, хорошо перемешивают. Полученную суспензию наносят на 13 - 15 пластинок (по 10 г суспензии на каждую пластинку).

Для приготовления пластинок с цинковой пылью к суспензии прибавляют 1 г просеянной цинковой пыли;

в) силикагель с оксидом алюминия. Силикагель (9 г) и 9 г оксида алюминия тщательно перемешивают в фарфоровой ступке, приливают при перемешивании 30 мл дистиллированной воды. Полученную суспензию наносят на 6 - 8 пластинок.

Адсорбционную массу наносят чайной ложкой и разравнивают по всей поверхности легким покачиванием пластинки (можно использовать аппликатор). Полученные таким образом пластинки сушат на воздухе в течение 16 - 18 ч, хранят в камере, содержащей хлорид кальция, на специальном штативе.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробы отбирают в соответствии с установленными правилами отбора проб для анализа пестицидов, для определения остаточных количеств ФОП в сушеных плодах - по ГОСТ 12001-66, а в сушеных овощах - по ГОСТ 13342-67.

Средний образец измельчают на механическом измельчителе до размера частиц 0,5 - 0,8 см, тщательно перемешивают и берут для анализа пять параллельных навесок по 25 - 30 г. Каждую навеску продукта заливают 30 - 40 мл (в зависимости от объекта: морковь, картофель, сливы, груши - 30 мл; яблоки, петрушка - 40 мл) 30-процентного раствора ацетона в н-гексане, встряхивают в течение 1 ч на аппарате для встряхивания и оставляют при комнатной температуре на 1 ч. После отстаивания и фильтрования экстракцию повторяют еще дважды.

Объединенные экстракты сушат безводным сульфатом натрия (1 - 2 г), фильтруют в перегонные колбы через фильтр "красная лента" и слой безводного сульфата натрия (1 - 2 г). В приборе для отгонки под вакуумом отгоняют растворитель до 0,5 - 1 мл и количественно переносят в центрифужные пробирки, центрифугируют 5 - 10 мин. при 3000 об./мин. Отцентрифугированный раствор количественно переносят в пробирки вместимостью 3 - 5 мл, с помощью вентилятора растворитель удаляют досуха, сухой остаток растворяют в охлажденном ацетоне, вымораживают 1,5 ч в холодильнике, фильтруют, удаляют ацетон с помощью вентилятора. Сухой остаток растворяют в н-гексане и полученный таким образом экстракт используют для дальнейшего анализа (для экстрактов из сушеного картофеля вымораживание не требуется). Полученный экстракт хроматографируют.

Для хроматографирования проб моркови, петрушки, яблок весь экстракт концентрируют до небольшого объема и количественно наносят на хроматографическую пластинку (силикагель - крахмал) в виде полоски длиной 2 - 2,5 см, шириной 0,3 - 0,5 см; на расстоянии 2 см от края полоски наносят стандартный раствор метафоса. Высушенную пластинку хроматографируют в системе н-гексан - эфир (1:1) или гексан - ацетон (4:1), высушивают, затем проявляют часть пластинки, где нанесен стандартный раствор метафоса, реагентом N 3. С не обработанной проявляющим реагентом части пластинки снимают слой сорбента площадью 3 x 4 см, расположенный напротив проявленного пятна стандартного раствора метафоса, и переносят в центрифужную пробирку. Элюируют метафос из сорбента небольшими порциями (0,8 мл) н-гексана 4 - 5 раз.

Для хроматографирования проб моркови, петрушки, яблок, груш, слив экстракт подвергают дополнительной очистке на хроматографической пластинке (силикагель - крахмал). Для этого его концентрируют до небольшого объема и помещают на пластинку в виде полоски длиной 2 - 2,5 см и шириной 0,3 - 0,5 см. На расстоянии 2 см от края полоски наносят стандартный раствор фосфамида, содержащий 10 мкг этого вещества (0,1 мл).

Высушенную пластинку хроматографируют последовательно в системах н-гексан - ацетон (4:1), н-гексан - эфир (1:1), высушивают, проявляют реагентом N 3 только часть пластинки, где нанесен стандартный раствор фосфамида. С не обработанной проявляющим реагентом части пластинки снимают участок сорбента (3 x 4 см), расположенный напротив проявленного пятна стандартного раствора фосфамида, переносят в центрифужную пробирку, элюируют фосфамид из сорбента небольшими порциями (0,8 - 1 мл) н-гексана 4 - 5 раз. Объединенный элюат переносят в калиброванный пикнометр вместимостью 2 мл и доводят общий объем н-гексаном до метки.

Можно очищать экстракты методом возгонки и микросублимации под вакуумом при температуре 40 - 50 °C. Для этого концентрированный экстракт (полученный по методике без вымораживания) переносят в пробирку, в которую вставляют охлаждаемый водой стержень. При возгонке пестицид и незначительное количество коэкстрактивных веществ сублимируются на стержне. Стержень осторожно вынимают, смывают н-гексаном или эфиром, доводят до определенного объема и хроматографируют.

Калиброванной микропипеткой отбирают 0,5 мл элюата или очищенного после возгонки экстракта и по каплям наносят на хроматографическую пластинку (силикагель - крахмал или силикагель - оксид алюминия). При содержании фосфамида в пробе меньше 1/2 МДУ на пластинку наносят весь элюат (экстракт), сконцентрировав его дополнительно до объема 0,2 - 0,5 мл. Хроматографируют в системе н-гексан - ацетон (1:1) или н-гексан - диоксан (1:1). Дальше техника хроматографирования аналогична описанной выше.

Высушенную пластинку проявляют реагентом N 3. Фосфамид проявляется в виде светло-коричневых пятен.

Идентификация и количественное определение хлорофоса методом ТСХ. Для хроматографирования проб картофеля, моркови, петрушки, яблок, груш, слив экстракт концентрируют до объема 2,0 мл, калиброванной микропипеткой отбирают аликвотную часть (0,5 мл) и наносят на хроматографическую пластинку (силикагель - крахмал, силикагель - оксид алюминия) в виде пятна размером 0,8 - 1 см (при содержании хлорофоса меньше 1/2 МДУ наносят весь экстракт, сконцентрировав его до небольшого объема). Для получения более точных результатов можно применить дополнительную очистку экстрактов. На расстоянии 2 см от исследуемой пробы и один от другого наносят стандартные растворы хлорофоса, содержащие соответственно 4; 6 и 8 мкг этого вещества.

Высушенную пластинку хроматографируют последовательно в системах н-гексан - ацетон (4:1), н-гексан - эфир (1:1); н-гексан - ацетон (1:1) или н-гексан - диоксан (1:1). Перед повторным хроматографированием и проявлением пластинку каждый раз хорошо просушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре, используя вентилятор. Для проявления применяют реагент N 4. После опрыскивания проявляющим реагентом пластинку выдерживают в сушильном шкафу 7 - 10 мин. при температуре 100 °C. Зоны локализации хлорофоса проявляются в виде оранжевых пятен.

Обработка результатов анализа. Количество метафоса, фосфамида и хлорофоса в анализируемых объектах определяют путем визуального сравнения интенсивности окраски, а также сравнения площади пятна определяемого пестицида в исследуемом экстракте и того стандарта, окраска (площадь) пятна которого наиболее близка к окраске (площади) пятна пробы. Площадь пятен измеряют планиметром или с помощью промасленной миллиметровой бумаги. Содержание пестицида в анализируемом объекте (X, мг/кг) при визуальном сравнении рассчитывают по формуле:

Определение метафоса и фосфамида методом ГЖХ. Экстракт подвергают дополнительной очистке на пластинке. Окончательный объем очищенного экстракта доводят н-гексаном до 2,0 мл. Вводимые в колонку объемы: при определении метафоса - 0,5 мкл, фосфамида - 5 мкл.

Условия хроматографирования: температура колонки - 220 °C (метафос), 200 °C (фосфамид); детектора - 220 °C (метафос), 240 °C (фосфамид); испарителя - 250 °C (метафос), 225 °C (фосфамид). Расход газа-испарителя (азота) через колонку для метафоса - 40 мл/мин., для фосфамида - 60 мл/мин. Скорость движения диаграммной ленты 240 мм/ч. Время удерживания: абсолютное для метафоса - 2 мин. 15 с, для фосфамида - 58 с.

Линейный диапазон детектирования: метафос - от 0,25 до 25,0 нг, фосфамид - от 2,5 до 20 нг.

Содержание метафоса и фосфамида в анализируемой пробе рассчитывают по формулам, приведенным в Методических указаниях.

Требования безопасности. Необходимо строго руководствоваться правилами по технике безопасности в химических лабораториях.