"Методические указания по определению ронстара (оксидиазона) в рисе методами газовой и тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 N 2096-79)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

2. Методика определения ронстара в рисе

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении ронстара из анализируемой пробы ацетоном, очистке экстракта на колонке из окиси алюминия и последующем определении хроматографическими методами.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Нижний предел определения - 0,05 мг/кг.

Размах варьирования - 70 - 90%.

Среднее значение определения - 73%.

Стандартное отклонение - +/- 10,8% при n = 13.

Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 5,73 +/- 13%.

2.1.3. Избирательность метода

Определению не мешают линдан, 4,4'-ДДД, 4,4'-ДДТ, ДДЭ.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, хч, ГОСТ 2603-71.

н-Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-73.

Бензол, хч, ГОСТ 5955-75.

Хлористый метилен, ч, МРТУ 6-09-5362-68.

Натрий сернокислый безводный, ч, ГОСТ 4166-66.

Алюминия окись для хроматографии II ст. акт., МРТУ 6-09-5296-68.

Алюминия окись с 5% воды. К окиси алюминия прибавляют 5% по объему дистиллированной воды, тщательно перемешивают и оставляют на 12 часов. Хранят в банке с притертой пробкой.

Пластинки "Силуфол"

Проявители: N 1. а) Едкий натр, 2 н раствор в смеси этилового спирта и воды 1:1.

б) Тетразол синий, насыщенный раствор в смеси этилового спирта и воды 1:1.

N 2. 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл водного раствора аммиака (уд. вес 0,9) и доводят до 100 мл ацетоном.

Стандартные растворы: N 1. 10 мг ронстара (хч) растворяют в мерной колбе на 100 мл в н-гексане и доводят до метки этим растворителем. Раствор соответствует концентрации 100 мкг/мл.

N 2. 5 мл раствора с концентрацией 100 мкг/мл вносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки н-гексаном.

2.3. Приборы и посуда

Прибор для отгонки растворителей (ротационный испаритель ИР-1 или аналогичный).

Измельчитель твердых веществ (или кофемолка).

Колбы конические емк. 250 мл.

Воронки химические.

Колонки стеклянные хроматографические (200 мм х 20 мм).

Пипетки.

Камера для хроматографирования.

Пульверизаторы.

Вата обезжиренная.

Цилиндр с делениями емк. 100 мл.

Хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации (электронно-захватный) марки "Цвет" или др.

Микрошприцы на 10 мкл.

Колонка стеклянная, диаметр 3 мм, длина 1 м, неподвижная фаза 5% SE-30 на хроматоне NA-W или любая аналогичная неполярная фаза.

Азот газообразный особой чистоты, содержание кислорода не более 0,003%.

2.4. Подготовка к определению

Пробу риса отбирают в соответствии с утвержденными методическими указаниями. Размалывают 20 сек. в кофемолке.

2.5. Проведение определения

25 г риса помещают в коническую колбу, заливают пробу 50 мл ацетона и оставляют на ночь. Фильтруют растворитель через слой сульфата натрия и упаривают при температуре не выше 50 °С до объема 0,3 - 0,5 мл.

Окись алюминия смешивают с гексаном до кашеобразного состояния и наливают в хроматографическую колонку таким образом, чтобы высота слоя сорбента составляла 9 - 10 см. Сверху помещают слой в 2 см сульфата натрия, промывают колонку 10 мл гексана. Остаток из колбы (после упаривания) количественно переносят в увлажненную гексаном колонку порциями по 1 - 3 мл хлористого метилена. Препарат элюируют 100 мл хлористого метилена, элюат упаривают до объема 0,2 - 0,3 мл, остаток упаривают досуха на воздухе.

2.6. Обработка результатов

2.6.1. Качественная идентификация и количественное определение ронстара методом газожидкостной хроматографии.

Хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации (электронно-захватный).

Колонка стеклянная, длина 1 м, диаметр 3 мм.

Носитель - хроматон NA-W, 0,16 - 0,20 мм, силанизированный.

Неподвижная фаза - 5% SE-30 (любая аналогичная).

Скорость газа носителя (азота) - 60 мл/мин.

Температура термостата колонок - 190 °С, детектора - 230 °С, испарителя - 230 °С.

Вводимый объем - 3 - 5 мкл.

При указанных выше условиях время удерживания ронстара 4,5 мин. Определению не мешают линдан (время удерживания 1 минута), 4,4'-ДДД (время удерживания 5,4 мин.), 4,4'-ДДТ (время удерживания 6,6 мин.).

Расчет проводится по методу абсолютной калибровки.

2.6.2. Определение ронстара методом тонкослойной хроматографии.

Перед началом анализа пластинку "Силуфол" активируют нагреванием в сушильном шкафу при 130 °С в течение 1 часа.

Пробу, концентрированную после очистки до 0,2 - 0,3 мл, наносят на хроматографическую пластинку на расстоянии 1,5 см от нижнего края, параллельно с пробой наносят стандартный раствор ронстара (N 1) в количестве 0,02; 0,03; 0,04 мл, что составляет 2, 3, 4 мкг препарата соответственно. Затем пластинку помещают в камеру для хроматографирования с подвижным растворителем - бензолом. После хроматографирования пластинку сушат на воздухе и проявляют одним из проявителей. При проявлении тетразол-синим пластинку следует вначале опрыскать 2 н водно-спиртовым раствором едкого натра, нагреть в сушильном шкафу при температуре 120 °С в течение 4-х минут. Затем опрыскать насыщенным водно-спиртовым раствором тетразол-синего и вновь поместить в шкаф, нагретый до 120 °С, до появления фиолетовых пятен ронстара.

При отсутствии тетразол-синего препарат можно проявить аммиакатом серебра с последующим облучением УФ-светом. ДДТ и его метаболиты определению не мешают.

Количественное определение проводят путем сравнения интенсивности окраски и размера пятна проб и стандартных растворов. Количество препарата в пробе вычисляют по формуле:

2.7. Методические указания разработаны Д.Б. Гиренко, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС, Киев), З.Ф. Юрковой.