"Методические указания по лабораторной диагностике брадзота овец"
(утв. Минсельхозом СССР 27.04.1984)

1.1. Брадзот - быстро протекающая инфекционная болезнь овец, сопровождающаяся образованием отечных инфильтратов в подкожной клетчатке, геморрагическим воспалением слизистой оболочки сычуга и двенадцатиперстной кишки, а также усиленным образованием газов в пищеварительном тракте, особенно в желудке.

1.2. Брадзот имеет полимикробную этиологию. Возбудителями являются анаэробные микроорганизмы Cl. septicum, Cl. oedematiens (тип B, реже тип A), Cl. sordellii. Последние два по культурально-морфологическим свойствам не отличаются.

1.3. Диагноз на брадзот ставят на основании клинических, эпизоотологических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.

1.4. Для исследования в лабораторию направляют паренхиматозные органы (при наличии в печени некротических очагов направляют участки печени с такими очагами), измененные участки стенки сычуга, отечную ткань, трубчатую кость, часть двенадцатиперстной кишки, перевязанную с двух сторон, экссудат грудной и брюшной полостей, инфильтрат подкожной клетчатки.

Материал берут только от свежих трупов, так как у овец после гибели происходит быстрое размножение анаэробных микроорганизмов в кишечнике и проникновение их в органы и ткани.

Результаты исследования материалов от несвежих трупов не учитывают.

1.5. Исследование на брадзот включает микроскопию мазков из патологического материала, посевы на питательные среды и заражение лабораторных животных.

Одновременно проводят исследования с целью исключения инфекционной энтеротоксемии.

2.1. Из доставленного материала делают мазки и окрашивают их по Граму или Муромцеву.

2.2. При микроскопии мазков отмечают форму микробов, их расположение, наличие вегетативных форм и спор (споры окраску не воспринимают). При наличии в материале Cl. septicum в мазках обнаруживают грамположительные одиночно расположенные палочки с закругленными концами, в мазках-отпечатках с серозных оболочек - длинные нити. Cl. oedematiens и Cl. sordellii представляют собой очень крупные грамположительные палочки с закругленными концами, расположенные одиночно, попарно, иногда короткими (3 - 4 членика) цепочками.

Споры у возбудителей брадзота овальные, расположены центрально или субтерминально.

3.1. Высевы делают из паренхиматозных органов, отечной ткани подкожной клетчатки и подслизистой сычуга и экссудата полостей в среду Китта - Тароцци, МПБ и на МПА. Среду Китта - Тароцци предварительно регенерируют - прогревают в кипящей водяной бане в течение 15 - 30 мин, после чего быстро охлаждают до 45 - 50 °C.

Одновременно высев можно делать и на глюкозо-кровяной агар Цейсслера в чашках Петри.

3.2. Засеянные пробирки помещают в термостат при 37 - 38 °C на 24 - 48 ч. Чашки с посевами инкубируют в анаэробных условиях 24 - 48 ч.

3.3. Для создания анаэробных условий наиболее приемлем физический метод. Чашки, не переворачивая (дном вниз), помещают в микроанаэростат или эксикатор, из которого удаляют воздух при помощи вакуум-насоса.

Из других методов можно применять химический с использованием безводного гипосульфита натрия (Na₂S₂O₄) и бикарбоната натрия (Na₂CO₃).

3.4. Посевы просматривают через 20 - 24 ч, при этом обращают внимание на интенсивность и равномерность помутнения жидких сред, наличие и степень газообразования.

При отсутствии роста посевы инкубируют еще сутки.

Рост Cl. septicum характеризуется интенсивным равномерным помутнением среды и обильным газообразованием.

Cl. oedematiens вызывает нежное помутнение среды, часто более интенсивное внизу, и слабое газообразование; уже через 20 - 24 ч бульон просветляется, и на дно выпадает хлопьевидный осадок. Cl. sordellii дает аналогичный рост, но просветление среды наступает медленнее и осадок слизистый.

В мазках из культур обнаруживают споровые и бесспоровые палочки, как и в мазках из исходного материала.

3.5. При отсутствии роста на агаре Цейсслера и в тех случаях, когда высевы из материала на плотную среду не делали, проводят дробный пересев со среды Китта - Тароцци на 3 - 4 чашки с агаром Цейсслера.

Посевы на плотной среде просматривают с помощью лупы или под малым увеличением микроскопа, обращая внимание на характер колоний, наличие гемолиза и изменение цвета среды.

Cl. septicum образует нежный вуалеобразный налет с микроскопически изрезанными краями и нежными отростками, колонии окружены зоной гемолиза (III форма колоний по Цейсслеру).

Колонии Cl. oedematiens и Cl. sordellii корневидные, складчатые, с выпуклым и более темным центром, шероховатые, края изрезаны. Гемолиз сильный, прозрачный, но может отсутствовать (II форма колоний по Цейсслеру).

4.1. Одновременно с посевами на питательные среды заражают морских свинок. Для этого кусочки пораженных тканей и другой патологический материал измельчают, тщательно растирают в стерильной ступке с песком и готовят равномерную взвесь, добавляя небольшое количество МПБ.

Полученную взвесь вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам массой 350 - 400 г в дозе 0,5 - 1,0 мл.

4.2. При наличии в исследуемом материале возбудителей брадзота овец морские свинки погибают через 16 - 48 ч (в зависимости от вида возбудителя).

При вскрытии у павших морских свинок обнаруживают следующие патологоанатомические изменения.

У морских свинок, зараженных Cl. septicum, кожа легко отделяется от мускулатуры, на месте введения материала мышца влажная, светло-красного цвета, в подкожной клетчатке значительное количество пузырьков газа, кишечник вздут, в грудной полости и сердечной сорочке большое количество транссудата.

При заражении Cl. oedematiens у павших морских свинок на месте введения наблюдают студенистый отек соединительной ткани и прилегающей мускулатуры, цвет отека от желтоватого до бледно-розового, мышцы бледные, паренхиматозные органы чаще без видимых изменений. Септицемия наступает не во всех случаях, поэтому в посевах из сердца возбудитель выделяется не всегда. Cl. sordellii вызывает у морских свинок аналогичную патологоанатомическую картину.

4.3. Из трупа морской свинки делают посевы из места введения материала, крови сердца и печени в среду Китта - Тароцци, МПБ и на МПА, мазки-отпечатки из тех же органов, а также с диафрагмальной поверхности печени. При наличии Cl. septicum в мазках с поверхности печени обнаруживают длинные нити.

4.4. При необходимости проверки вирулентности выделенных культур суточную культуру, выращенную на среде Китта - Тароцци, вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам в дозе 0,5 - 1,0 мл.

4.5. Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 8 сут.

5. Диагноз на брадзот считается установленным в случае:

выделения из патологического материала культуры со свойствами, характерными для одного из возбудителей данного заболевания, и гибели хотя бы одной морской свинки из двух, зараженных исходным материалом или полученной культурой, с типичной для данного возбудителя патологоанатомической картиной и выделением из ее органов культуры возбудителя;

гибели хотя бы одной морской свинки из двух, зараженных исходным материалом, при наличии у нее типичной для данного возбудителя патологоанатомической картины и выделения из нее культуры возбудителя, если даже в посевах из исходного материала культуры возбудителя не выделено.

6. Срок исследования - до 8 сут.