"Методические указания по определению трифорина в растительной продукции (яблоки, огурцы), почве, воде методом тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 06.08.1981 N 2423-81)

--------------------------------

<*> Разработаны И.Ю. Юргайтене (НИИ эпидемиологии, микробиологии, гигиены); Н.И. Киселевой (ВНИИГИНТОКС).

Принцип метода. Метод основан на экстракции пестицида из анализируемой пробы хлороформом, очистке экстракта колоночной и двумерной хроматографией и хроматографировании на пластинках "Силуфол" или в тонком слое силикагеля.

Метрологическая характеристика метода дана в таблице 159.

Предел обнаружения трифорина в растительной продукции, почве и воде показан в таблице 160.

Избирательность метода. Определению не мешают пестициды кельтан, хлорофос, оксихлорид меди, которые применяют для обработки тех же культур.

Реактивы и материалы. Нитрат серебра х.ч. Активированный уголь АГ-3. Аммиак 25-процентный. Ацетон ч.д.а. Хлороформ х.ч. Четыреххлористый углерод. Этилацетат. Бензол х.ч. Дифениламин 2-процентный раствор в ацетоне. н-Гексан х.ч. н-Гептан ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Пластинки "Силуфол". Силикагель ЛС 5/40. Смеси растворителей: N 1 - четыреххлористый углерод и этилацетат (2:1); N 2 - бензол и этилацетат (6:1); N 3 - н-гексан и ацетон (10:7); N 4 - н-гептан и ацетон (1:2). Оксид алюминия II степени активности. Этиловый спирт-ректиф. Стандартный раствор трифорина (растворяют 0,025 г х.ч. препарата в 50 мл этилового спирта, концентрация раствора 5000 мкг/мл). Фильтры обеззоленные "синяя лента".

Проявляющие реагенты: N 1 - раствор нитрата серебра и аммиака в ацетоне; N 2 - 2-процентный раствор дифениламина в ацетоне; N 3 - 5-процентный раствор фосфорномолибденовой кислоты.

Приборы, аппаратура, посуда. Аспирационное устройство. Аппарат для встряхивания. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Водяная баня. Воронки химические. Камера для опрыскивания пластин. Камера для хроматографирования. Колбы: конические вместимостью 100, 150 мл; грушевидные для отгонки растворителя. Лампа ультрафиолетовая марки ОКН-11. Микропипетки для нанесения проб. Микрошприцы на 1, 10 мкл. Пластинки стеклянные размером 90 x 120 мм со слоем силикагеля. Поглотительные приборы с пористой пластинкой N 1. Пульверизатор стеклянный. Ротационный испаритель. Колонка стеклянная (длина 25 см, диаметр 1 см). Шкаф сушильный. Цилиндры мерные на 50, 100 мл. Эксикатор.

Приготовление пластинок. Стеклянные пластинки размером 90 x 120 мм тщательно моют раствором хромовой смеси, промывают проточной водой, затем дистиллированной и сушат. Взвешивают 14 г силикагеля и 1 г гипса, в фарфоровой ступке растирают с 40 мл дистиллированной воды. Наносят на пластинки одинаковые количества массы и оставляют сохнуть до следующего дня на воздухе. Хранят в эксикаторах над хлористым кальцием.

Ход анализа. Экстракция. Пробу измельченных яблок (40 г) заливают 40 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 1 ч. Отфильтровывают пробу, промывают ее хлороформом. Растворитель упаривают досуха в ротационном испарителе. К сухому остатку прибавляют охлажденную смесь ацетона и воды (2:1) и выдерживают 30 мин. в холодильнике. Воски отфильтровывают через бумажный фильтр, который промывают охлажденной смесью ацетона и воды (2:1). Трифорин из водно-ацетонового раствора реэкстрагируют хлороформом. Растворитель упаривают до 3 - 4 мл.

Пробу измельченных огурцов (20 г) заливают 40 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 1 ч. Отфильтровывают, промывают остаток на фильтре хлороформом. Объединяют экстракты и упаривают до объема 3 - 4 мл.

К 20 г анализируемой почвы прибавляют 50 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 15 мин. Отфильтровывают, промывают почву хлороформом 2 раза по 20 мл. Упаривают растворитель до объема 3 - 4 мл.

К 100 мл анализируемой воды в делительной воронке прибавляют 50 мл хлороформа и встряхивают 5 мин. Экстракцию хлороформом повторяют. Хлороформенный слой 2 раза профильтровывают через воронку, заполненную 4 - 5 г безводного сульфата натрия. Фильтрат упаривают до объема 0,05 - 0,1 мл и хроматографируют.

Из фильтра "синяя лента" трифорин извлекают хлороформом 2 раза по 15 мл в течение 30 мин. при периодическом встряхивании, объединяют его с хлороформом из поглотителей, упаривают до объема 0,05 - 0,1 мл и хроматографируют.

Очистка экстрактов из яблок, огурцов, почвы. Колонку, заполненную оксидом алюминия (высота слоя 8 см) и активированным углем (высота слоя 5 см), промывают 30 мл хлороформа. На колонку переносят сконцентрированный экстракт и элюируют трифорин 75 мл хлороформа. Элюат отгоняют до объема 0,05 - 0,1 мл и хроматографируют.

Условия хроматографирования. Сконцентрированный экстракт с помощью капилляра количественно наносят на правую сторону пластинки для хроматографирования. Колбу промывают по 0,1 мл хлороформа и наносят на пластинку. На левой стороне пластинки наносят стандартные растворы. Повернув на 90°, пластинку правой стороной опускают в камеру для хроматографирования в подвижную фазу N 1 или 2. Хроматографирование в одной из этих фаз проводят дважды для дополнительной очистки экстрактов. После улетучивания растворителей пластинку поворачивают на 90° в направлении движения первой подвижной фазы, затем хроматографируют в смеси растворителей N 3 или 4.

Для экстрактов из воды двумерное хроматографирование не проводят и пластинки после нанесения исследуемого экстракта и стандартных растворов помещают в смесь растворителей N 3 или 4.

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности пятен рабочей пробы и серии стандартов. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией пестицида наблюдается в пределах от 0,5 до 10,0 мкг. При большем содержании трифорина в пробе на пластинку наносят аликвотную часть раствора.

Содержание пестицида в анализируемой пробе яблок, огурцов, почвы и воды (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле: