"МУК 4.1.2483-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение непищевых красителей Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 05.02.2009)

1. Методические указания разработаны ГУ НИИ питания РАМН (академик РАМН В.А. Тутельян, к.т.н. В.Г. Байков, к.х.н. В.В. Бессонов, Ю.В. Ведищева, к.ф.н. О.И. Передеряев, Е.П. Хромченкова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 3 от 25.12.2008).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 05.02.2009.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Красители Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) (далее - Судан I - IV и Para Red) в сферах экономики используются при производстве дизельного топлива, в легкой промышленности для окрашивания тканей, а также при проведении биохимических исследований для окрашивания препаратов и относятся к непищевым красителям.

Необходимость определения непищевых красителей Судан I - IV и Para Red (Пара Ред) обусловлена их использованием при фальсификации специй и пряностей, а также продуктов их переработки, БАД к пище, изготовленных с использованием специй и пряностей, и других пищевых продуктов, в состав которых входят специи и пряности, с целью придания им более интенсивной окраски.

1.1. Настоящие Методические указания устанавливают методику определения возможного присутствия непищевых красителей Судан I - IV и Para Red в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в специях, пряностях и продуктах их переработки, а также в биологически активных добавках к пище (БАД) и других пищевых продуктах (в состав которых входят специи и пряности).

1.2. Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, находящихся в обращении на территории Российской Федерации, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

1.3. Присутствие непищевых красителей Судан I - IV и Para Red в пищевых продуктах в пределах обнаружения данным методом является основанием для запрещения продукции к реализации.

Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) являются синтетическими непищевыми красителями, практически нерастворимыми в воде, хорошо растворимыми в органических растворителях (хлороформе, ацетоне, эфире), и имеющими интенсивную окраску от оранжевого до ярко-красного цвета. Структура непищевых красителей Судан I - IV и Para Red приведена на рис. 1.

Структурная формула (не приводится).

Обнаружение и определение содержания непищевых красителей Судан I - IV и Para Red (Пара Ред) проводится методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с диодно-матричным детектированием (при длине волны 504 нм). В качестве арбитражного метода используют метод ВЭЖХ с масс-детектированием (по молекулярным и дочерним ионам, см. таблицу 1).

- Высокоэффективный жидкостной хроматограф.

- Хроматографическая колонка С18, 5 мю, 4,6 х 250 мм.

- Ультразвуковая баня.

- Весы лабораторные общего назначения с пределом взвешивания 100 г и погрешностью + 0,0001 г.

- Дистиллятор.

- Установка для фильтрования и дегазирования подвижной фазы.

- рН-метр лабораторный.

- Центрифуга лабораторная ОПН-8, 8000 об./мин.

- Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

- Пипетки 2-1-2-1 или 1-1-2-1, 2-1-2-10 или 2-2-2-10 или 3-2-2-10 по ГОСТ 29227.

- Колбы мерные К 1-50-1, К 1-50-2 по ГОСТ 1770-74.

- Вода дистиллированная.

- Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.

- Тетрагидрофуран для жидкостной хроматографии.

- Трифторуксусная кислота квалификации "ОСЧ".

- Ацетон квалификации "ХЧ".

Навеску стандартного вещества около 0,02 г (с точностью 0,0001 г) помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 30 мл 95% этанола, интенсивно встряхивают, при необходимости озвучивают на ультразвуковой бане до полного растворения вещества. После этого объем доводят до метки 95% этанолом (основной раствор). В мерную колбу на 50 мл помещают 1 мл основного раствора и доводят объем до метки 95% этанолом (рабочий раствор). Полученный рабочий раствор фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Приготовленные стандартные растворы хранят в прохладном месте в течение 1 месяца.

Около 1,0 г (точная навеска) образца помещают во флакон объемом 20 мл с завинчивающейся крышкой, добавляют 10 мл ацетона, интенсивно встряхивают в течение 2 минут и озвучивают на ультразвуковой бане в течение 5 минут. После озвучивания образец снова встряхивают и центрифугируют на 6000 об./мин. После центрифугирования супернатант отбирают и исследуют. При необходимости отобранный супернатант фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

При подготовке контрольных образцов указанным способом извлекается более 95% добавленного количества каждого из исследуемых красителей.

При постоянном перемешивании к бидистиллированной воде добавляют по каплям трифторуксусную кислоту до рН = 2,4 и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Подвижная фаза хранится в холодильнике при температуре 2 - 8 °С не более 3 месяцев.

Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляют путем сравнения со временем удерживания стандарта красителя, УФ и видимого спектра. Для подтверждения рекомендуется сравнивать также молекулярные массы каждого компонента и его дочерних ионов.

Идентификация красителей Судан I - IV и Para Red только по времени удерживания не будет являться достоверной ввиду сложного матрикса исследуемых объектов и наличия природных компонентов, обладающих сходными спектральными характеристиками и хроматографическим поведением.

Колонка 5u С18(2), 5 мю, 4,6 х 250 мм.

Приготовление подвижной фазы: бидистиллированную воду доводят трифторуксусной кислотой до рН 2,4 (мл на 1 л бидистиллированной воды).

Подвижная фаза: смесь ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до рН = 2,4 (Б). Оптимальным является градиентное элюирование смесью ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до рН = 2,4 (Б): 0 мин. - 80% (А), 10 мин. - 98% (А) (градиент линейный), 20 мин. - 98% (А), 21 мин. - 80% (А). Регенерация колонки занимает не менее 9 мин. Общее время анализа составляет 30 минут.

В случае использования только диодно-матричного детектора вместо бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до рН = 2,4, допускается использование бидистиллированной воды. Также возможно использование изократического элюирования смесью ацетонитрила - бидистиллированной воды с содержанием ацетонитрила 90 - 95% (в зависимости от параметров колонки).

Для полной регенерации колонки следует использовать подвижную фазу на основе тетрагидрофурана, обладающего такой же элюирующей силой, как и ацетон.

Скорость подачи подвижной фазы: 1,0 куб. см/мин.

Детектирование: лямбда = 504 нм.

Объем вводимой пробы 5 мкл.

Порядок выхода и параметры количественного определения непищевых красителей Судан I - IV и Para Red приведены в таблице 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I - IV и Para Red представлен на рисунке 2 (не приводится).

Проведение количественного определения красителей Судан I - IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктах не допускается, поскольку они являются непищевыми веществами, и их присутствие в пределах обнаружения данного метода является основанием для запрещения продукции к реализации. Пределы обнаружения красителей Судан 1 - 4 и Пара Ред приведены в таблице 2.

--------------------------------

<*> Проведение количественного определения красителей Судан I - IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктах не допускается.

Количественное определение проводят абсолютной градуировкой.

Содержание красителей Судан I - IV и Para Red проводят по следующей формуле:

где:

C, мг/кг - содержание красителя, мг/кг;

C1 - концентрация красителя в стандартном растворе, мкг/мл;

S1 - площадь пика красителя в стандартном растворе;

S2 - площадь пика красителя в определяемом образце;

V - объем раствора образца, мл;

m - масса навески, г.