"МУК 4.1.2041.а-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств хлорорганических пестицидов в винах и виноматериалах методом хроматомасс-спектрометрии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 11.01.2006)

1. Разработаны Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве" (Иваненко А.В., Иванова Л.И., Полторацкий А.Ю., Солопов Е.В.), Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" (Брагина И.В., Шальнова Е.С.).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 11 января 2006 г. Введены в действие с 12 января 2006.

3. Введены впервые.

Методика определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов в винах методом ГХ-МС разработана с целью обеспечения аналитического контроля остаточных количеств пестицидов в винах и виноматериалах и оценки соответствия уровня их содержания гигиеническим нормам.

Измерения концентраций ХОП в вине выполняют методом хроматомасс-спектрометрии. Выделение и концентрирование ХОП из вин проводится экстракцией органическим растворителем, очисткой экстракта серной кислотой (в случае необходимости). Метод предназначен для анализа остаточных количеств пестицидов: альфа, бета, гамма-ГХЦГ, альдрина, гептахлора, ДДТ и его метаболитов. Полихлорированные бифенилы определению не мешают.

Диапазон измеряемых концентраций - 0,0001 - 1 мг/л.

Нижний предел обнаружения ХОП в вине - 0,0001 мг/л.

Допустимый уровень ДДТ и его метаболитов во фруктах, ягодах, винограде - 0,1 мг/кг.

Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной относительной погрешностью +/- 20% при доверительной вероятности 0,95.

5.1. Средства измерений

5.1.1. Хроматомасс-спектрометр "Varian Saturn 4D" (Fisons "MD-800") или аналогичный состоит из:

- масс-спектрометрического детектора;

- газового хроматографа "Varian 3800" (Fisons 8130) или аналогичного, оснащенного капиллярной хроматографической колонкой DB5-MS, HP5-MS длиной 30 м, с внутренним диаметром 0,25 мм, с толщиной пленки неподвижной фазы 0,25 мкм или аналогичной ей;

- системы обработки данных на базе персонального компьютера.

5.1.2. Микрошприц "Hamilton" вместимостью 10 мкл или аналогичный.

5.1.3. Весы лабораторные типа ВЛР-200, первого класса точности по ГОСТ 24104-2001 или аналогичные.

5.1.4. Цилиндры мерные 2-100 ГОСТ 1770-74.

5.1.5. Пипетки вместимостью 0,1, 0,5, 1,0 первого класса точности по ГОСТ 29169-91.

5.1.6. Колбы мерные 2-10-2, 2-200-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770-74.

5.1.7. ГСО состава пестицидов.

5.1.8. Внутренний стандарт состава раствора дейтерированных ПАУ (Аценафтен d10, Фенантрен d10, Хризен d12, Перилен d12, с концентрацией каждого компонента 2 мг/куб. см) (изг. Supelco, кат. N 4-8099).

5.1.9. Кислота серная концентрированная, ч., по ГОСТ 4204-77.

5.1.10. Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., по ГОСТ 1166-76.

5.1.11. Гелий газообразный очищенный марки А, ТУ 51-940-80.

5.1.12. Гексан "эталонный" по ГОСТ 74-08-04.

5.1.13. Петролейный эфир по ГОСТ 11992-66.

5.1.14. Диэтиловый эфир по ГОСТ 25055-87.

5.1.15. Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300-87.

При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами, по ГОСТ 12.1.005-88.

При выполнении измерений с использованием хроматомасс-спектрометра следует соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений допускаются лица с квалификацией не ниже инженера-химика или врача-лаборанта, имеющего химическое образование и опыт работы на хроматомасс-спектрометре.

При выполнении измерений соблюдаются следующие условия:

- процессы приготовления и подготовки проб к анализу проводят при нормальных условиях согласно ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха 20 +/- 5 °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%;

- выполнение измерений на хроматомасс-спектрометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору и настоящей методикой.

Перед выполнением измерений проводят следующие подготовительные работы:

9.1. Подготовка растворителя (гексана), при необходимости - его очистка серной кислотой с последующей перегонкой.

9.2. Приготовление исходных растворов определяемых хлорорганических пестицидов с номинальной концентрацией 0,2 мг/куб. см. Исходный раствор определяемых ХОП необходимо хранить в холодильнике не более 1 месяца.

При отсутствии аттестованных растворов пестицидов их готовят из чистых веществ с массовой долей основного компонента не менее 98%.

Для этого взвешивают на аналитических весах (с погрешностью не более 0,2 мг) по 20,0 мг каждого пестицида и помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см. Растворяют в гексане, доводя объем раствора до метки гексаном.

9.3. Приготовление раствора дейтерированных ПАУ, используемых для внутренней градуировки, с концентрацией 2 мкг/куб. см.

Пипеткой объемом 1 куб. см отбирают 1 куб. см основного раствора дейтерированных ПАУ (изг. Supelco, кат. N 4-8099) и помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см. Добавляют растворитель до метки. Получают основной раствор "внутреннего стандарта" с концентрацией 20 мкг/куб. см. Затем пипеткой объемом 5 куб. см отбирают 5 куб. см основного раствора и помещают в мерную колбу вместимостью 50 куб. см. Получают рабочий раствор дейтерированных ПАУ с концентрацией 2 мкг/куб. см.

9.4. Приготовление градуировочных растворов.

9.4.1. Приготовление градуировочных растворов N 1 - 3.

Пипетками объемом 1,0, 0,5 и 0,1 куб. см отбирают по 1,0, 0,5 и 0,1 куб. см исходных растворов компонентов (с концентрацией 2 мг/куб. см) и помещают в три мерные колбы объемом 100 куб. см. Пипеткой объемом 0,1 куб. см в каждую колбу помещают по 0,1 куб. см раствора "внутреннего стандарта" с концентрацией 0,2 мг/куб. см. Добавляют растворитель до метки.

9.4.2. Приготовление градуировочных растворов N 4 - 8.

Градуировочные растворы N 4 - 8 готовят аналогичным образом в мерных колбах объемом 100 куб. см из промежуточного раствора с концентрацией компонентов 0,01 мг/куб. см.

В табл. 1 приведены значения объемов и концентраций растворов, используемых для приготовления каждого градуировочного раствора.

Промежуточный раствор с концентрацией 0,1 мг/куб. см готовят по процедуре приготовления раствора N 2, но без "внутреннего стандарта".

9.5. Подготовка прибора.

9.5.1. Подготовка колонки.

Колонку кондиционируют при температуре 250 °С в течение 1 часа.

9.5.2. Подготовка масс-спектрометра.

Перед началом рабочего дня ГХ/МС-систему проверяют с помощью автоматического теста "Quick Autotune", каждую неделю выполняют тест "Standart Autotune".

Для выполнения тестов используют перфтортрибутиламин "PFTBA", ввод которого в прибор производится автоматически.

Выполнения данных тестов предполагают следующие инструментальные параметры:

Энергия электронов - 70 эВ (номинал);

Диапазон масс - 35 - 510 а.е.м.

Время сканирования - по меньшей мере 5 сканов на пик, но не более 1 секунды на скан.

Для получения градуировочных данных используют не менее 4-х градуировочных растворов, один из них должен иметь концентрацию, близкую к нижней границе диапазона определяемых содержаний.

Каждый градуировочный раствор анализируют не менее 3-х раз, вводя 1 мкл в инжектор без деления потока при следующих условиях:

Температура колонки:

- температура испарителя - 250 °С;

- программирование температуры;

- начальная температура термостата - 80 °С;

- выдержка - 1 мин.;

- 1-ый этап программирования температуры - 20 °С/мин. от 80 °С до 160 °С;

- 2-ой этап программирования температуры - 8 °С/мин. от 160 °С до 300 °С;

- выдержка - 15 мин.;

- общее время хроматографирования - 35 мин.

Газ-носитель:

гелий - 4 куб. см/мин.

Детектор:

- энергия электронов - 70 эВ;

- режим сканирования - SIM (режим сканирования выбранных ионов);

- время сканирования - 0,8 сек.

Времена удерживания компонентов и значения m/z основного и подтверждающих ионов приведены в табл. 2.

Для основного характеристического и двух подтверждающих ионов, выбранных из табл. 2, получают хроматограмму по реконструированной сумме выбранных ионов. На каждой хроматограмме измеряют площади пиков основных характеристических ионов определяемых компонентов и "внутреннего стандарта", полученные значения заносят в табл. 3.

Для каждого соединения обрабатывают полученные данные следующим образом:

Рассчитывают значение i-го поправочного коэффициента:

Отбор проб производится по ГОСТ Р 51144-98.

200 куб. см пробы вина помещают в делительную воронку и экстрагируют пестициды, встряхивая в течение 3-х минут, н-гексаном или петролейным эфиром тремя порциями по 30 куб. см или диэтиловым эфиром тремя порциями по 50 куб. см. В объединенный экстракт насыпают 10 г безводного сернокислого натрия или фильтруют через воронку, заполненную на 2/3 сернокислым натрием. Экстракт упаривают на ротационном испарителе до объема 5 - 7 куб. см при температуре водяной бани 35 - 40 °С под вакуумом, а затем в токе газообразного азота особой чистоты - досуха. Осушенный экстракт растворяют в 1 куб. см рабочего раствора внутреннего стандарта (С = 2 мкг/куб. см) и анализируют на хроматомасс-спектрометре, вводя в инжектор в режиме "Без деления потока" (Splitless) 1 куб. мм экстракта и осуществляя хроматографическое разделение смеси в условиях, указанных в п. 10.

На каждой хроматограмме измеряют площадь пика основного характеристического иона каждого анализируемого соединения и "внутреннего стандарта". Результаты измерений заносят в таблицу по форме табл. 4 и обрабатывают в соответствии с п. 12.

Если отклик для какого-нибудь экстракта превышает рабочий предел ГХ/МС-системы, экстракт разбавляют и повторяют анализ.

При измерении содержания пестицидов в вине и виноматериалах полнота обнаружения варьирует для альфа-ГХЦГ в пределах 75 - 89%, бета-ГХЦГ - 73 - 85%, гамма-ГХЦГ (линдан) - 77 - 88%, 4,4'-ДДТ - 75 - 85%, 4,4'-ДДЭ - 65 - 72%, 4,4'-ДДД - 75 - 86%, гептахлора - 70 - 89%, альдрина - 80 - 95%.

Минимально обнаруживаемые количества анализируемых соединений составляют: для альфа-, бета-, гамма-ГХЦГ - 0,01 нг, для гептахлора и альдрина - 0,01 нг, для 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДЭ, 4,4'-ДДД - 0,01 нг.

Нижний предел измерения для всех определяемых ХОП 0,01 нг.

1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" N 52-ФЗ от 30.03.99.

2. ГОСТ Р 8.563-96. ГСИ "Методики выполнения измерений".

3. ГОСТ 8.589-01 "Охрана природы. Метрологическое обеспечение контроля загрязненности атмосферы, поверхностных вод и почвы. Основные положения".

4. ГОСТ 1770-74 "Посуда мерная лабораторная стеклянная, цилиндры, мензурки, колбы. Общие технические условия".

5. ТУ 25-1173-102-84. Испаритель ротационный.

6. ГОСТ Р 51144-98 "Продукты винодельческой промышленности. Правила приемки и методы отбора проб".