"МУК 4.1.881-99. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентраций N-ацетил-L-глутаминовой кислоты в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом России 30.12.1999)

Методические указания подготовлены коллективом специалистов в рамках Проблемной Комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии". Утверждены Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, Председателем Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко в декабре 1999 г.

Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (сборник 36) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Данная методика контроля вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработана и подготовлена в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".

Методика выполнена с использованием современных методов исследования, метрологически аттестована и дает возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и меньше их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в ГН 2.2.5.686-98 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и ГН 2.2.5.687-98 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

N-ацетил-L-глутаминовая кислота (АГК) - белый или почти белый кристаллический порошок без запаха, с температурой плавления 193 - 198 °С. Растворим в воде, умеренно растворим в спирте 95%, практически не растворим в эфире.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Обладает общетоксическим действием.

ПДК в воздухе - 2,0 мг/куб. м.

Метод основан на хроматографировании вещества в тонком слое на пластинках Силуфол с последующим обнаружением хроматограмм раствором о-толидина и денситометрировании окрашенных зон при длине волны 513 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания вещества в анализируемом объеме - 2,0 мкг.

Нижний предел измерения вещества в воздухе - 1,0 мг/куб. м (при отборе 20,0 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций в воздухе от 1,0 до 10,0 мг/куб. м.

Определению не мешают добезилат кальция, анестезин, аммиак.

Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20%.

Время выполнения измерения 2 часа, включая отбор проб.

Спектрофотометр Спекорд М-40 с приставкой для измерения отражения с фотометрическим шаром, денситометр БИАН-170.

Аспирационное устройство.

Фильтродержатели.

Хроматографическая камера для ТСХ размером 10 х 20 см, ГОСТ 23932-79Е.

Пластинки для тонкослойной хроматографии Силуфол УФ 254, <...>.

Хроматографическая камера для ТСХ, ГОСТ 23932-79.

Стаканы химические вместимостью 50 мл, ГОСТ 19980-80.

Вакуумная установка.

Колбы грушевидные вместимостью 25 мл, ГОСТ 23932-79.

Колбы мерные вместимостью 25 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Эксикатор с пришлифованной крышкой, ГОСТ 6371-73.

Сушильный шкаф.

N-Ацетил-L-глутаминовая кислота, фармакопейная.

Этиловый спирт, ГОСТ 5963-67.

Бутиловый спирт, ГОСТ 6006-78.

Кислота уксусная ледяная, ГОСТ 61-75.

Кислота соляная, х.ч., ГОСТ 3118-77, 10% раствор.

Калий йодистый, ч.д.а., ГОСТ 4232-74.

О-толидин, ТУ 6-09-11-788-764.

Калий марганцовокислый, ГОСТ 20490-77, х.ч., 1,5% раствор.

Калий йодистый, ГОСТ 4232-74, ч.д.а.

Подвижный растворитель: н-бутиловый спирт-ледяная уксусная кислота-вода (40:15:10 мл).

1. Получение паров хлора. На дно эксикатора вместимостью 1,5 л наливают 50 мл 1,5% раствора калия перманганата и 50 мл 10% раствора соляной кислоты и осторожно перемешивают. Внутрь эксикатора кладут фарфоровую вкладку и закрывают пришлифованной крышкой. Смесь готовят за 60 мин. до определения. Эксикатор должен находиться в вытяжном шкафу.

2. Раствор о-толидина. 160 мг о-толидина растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты, доводят объем до 500 мл дистиллированной водой и добавляют 1,0 г йодистого калия. Хранят в посуде темного стекла. Реактив устойчив в течение 2 недель.

Стандартный раствор N 1 с концентрацией 500 мкг/мл готовят растворением 0,0500 г вещества в 40% растворе этанола в мерной колбе вместимостью 100 мл. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

Стандартные растворы с концентрацией 20-40-80-120-200 мкг/мл вещества готовят соответствующим разбавлением 40% раствором этанола стандартного раствора N 1. Растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.

Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 95-743-80.

Воздух с объемным расходом 10 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для измерения 1/2 ПДК следует отобрать 20 л воздуха. Срок хранения проб 7 суток.

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан, <...> доводят 40% этанолом до 6 мл и оставляют на 15 мин., периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Степень десорбции с фильтра - 95%. Полученный раствор сливают в грушевидную колбу и упаривают досуха под вакуумом при температуре 60 - 70 °С. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл 40% этанола и используют полученный раствор для анализа.

На линию старта пластинки Силуфол (от края 1,5 см) наносят с помощью микропипетки по 0,1 мл раствора пробы и стандартных растворов с концентрацией от 20 до 200 мкг (размер пятна не должен превышать 0,5 см). Пластинку высушивают на воздухе в течение 3 мин., помещают в камеру для хроматографирования с системой растворителей н-бутиловый спирт-ледяная уксусная кислота-вода (40:15:10 мл) и хроматографируют восходящим методом. После того как фронт растворителя пройдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры и подсушивают на воздухе 20 мин. Затем пластинку обрабатывают парами воды (держат 2 мин. над кипящей водяной баней) и переносят в камеру с парами хлора, где выдерживают 20 мин. Для удаления паров хлора пластинку помещают под фен и обрабатывают теплым воздухом 2 мин., затем орошают раствором о-толидина и высушивают феном (все операции осуществляют только в вытяжном шкафу).

Количественное измерение содержания АГК в пробе проводят путем измерения пятен проб и стандартов с помощью планиметра или денситометра.

Интенсивность окраски пятен вещества измеряют на спектрофотометре Спекорд М-40 с приставкой для отражения с фотометрическим шаром при длине волны 513 нм по отношению к фону. В качестве фона используется участок исследуемой пластинки без вещества. Для каждой концентрации измеряют отражение (Т) в %. Оптическая плотность (Д) и отражение (Т) связаны между собой соотношением:

По средним результатам из пяти определений строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных хроматограмм, на ось абсцисс - соответствующее им количество вещества в мкг в градуировочном растворе.

При использовании планиметра количество вещества "М" (в мкг) в анализируемом объеме пробы находят по формуле:

При использовании денситометра содержание вещества в анализируемом объеме находят по градуировочному графику.

Концентрацию АГК в воздухе "С" (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

где:

а - содержание вещества, найденное по градуировочному графику, мкг;

в - общий объем раствора пробы, мл;

б - объем раствора пробы, используемый для анализа, мл;

V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).

Приведение объема воздуха к условиям по ГОСТ 12.1.016-79 (температура 20 °С, давление 760 мм рт. ст.) проводят по следующей формуле: