"МУК 4.1.634-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению ремантадина в атмосферном воздухе методом тонкослойной хроматографии"
(утв. Госкомсанэпиднадзором России 31.10.1996)

Настоящие методические указания устанавливают хроматографический (ТСХ) количественный химический анализ атмосферного воздуха для определения в нем содержания ремантадина в диапазоне концентраций 0,004 - 0,083 мг/м3.

Мол. масса 215,77.

Ремантадин (а-метил-1-адамантил-метиламина гидрохлорид) - белый кристаллический порошок с температурой плавления 365 - 367 °C. Растворяется в этаноле, хлороформе. В воде трудно растворим. В воздухе находится в виде аэрозоля.

Ремантадин обладает раздражающим действием. Ориентировочный безопасный уровень воздействия - 0,005 мг/м3.

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +/- 17%, при доверительной вероятности 0,95.

Измерение концентрации ремантадина выполняют методом тонкослойной хроматографии. Концентрирование его из воздуха осуществляют на фильтр. Десорбцию проводят экстрагированием смесью растворителей.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0,5 мкг.

Определению не мешают: адамантан, бромадамантан, мидантан.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

4.1. При работе с реактивами следует соблюдать требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.

4.2. При выполнении измерений с использованием электроаспиратора соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений допускают лиц, имеющих квалификацию не ниже старшего лаборанта.

При выполнении измерений следует соблюдать следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях согласно ГОСТу 15150-69 при температуре воздуха (20 +/- 10) °C, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка хроматографической камеры, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

Калий марганцовокислый, 1,5% раствор. 1,5 г калия марганцовокислого растворяют в 100 см3 дистиллированной воды.

Кислота соляная 10% раствор. В цилиндр вместимостью 1000 см3 к 200 см3 дистиллированной воды осторожно приливают 241 см3 концентрированной соляной кислоты (уд. вес 1,19) и доводят объем водой до метки.

Исходный раствор ремантадина для градуировки (c = 500 мкг/см3). 0,05 г ремантадина растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см3 хлороформом. Срок хранения - 3 дня в холодильнике.

Подвижная фаза. Хлороформ:бензол:метанол:25% раствор аммиака в соотношении 50:40:20:2, соответственно.

Проявляющий реактив. 50 см3 1,5% раствора калия марганцовокислого и 50 см3 10% раствора соляной кислоты помещают на дно эксикатора вместимостью 1,5 дм3, осторожно перемешивают. Внутрь эксикатора помещают фарфоровую вкладку и закрывают пришлифованной крышкой. Реактив готовят перед определением за 60 мин в вытяжном шкафу.

о-толидин. 160 мг о-толидина растворяют в 30 см3 ледяной уксусной кислоты, доводят объем до 500 см3 дистиллированной водой и добавляют 1 мг йодистого калия. Хранят в посуде из темного стекла не более 2-х недель.

На дно хроматографической камеры наливают подвижную фазу таким образом, чтобы уровень жидкости не доходил до линии "старта" на пластине. Камеру плотно закрывают крышкой и насыщают в течение 30 мин.

Градуировочную характеристику устанавливают по 5-ти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 7-ми растворов, готовят в мерных колбах вместимостью 100 см3. Для этого в каждую колбу вносят исходный раствор ремантадина для градуировки в соответствии с табл. 1, доводят объем хлороформом до метки и перемешивают. Растворы устойчивы в течение 3-х дней при хранении в холодильнике.

На пластине "Силуфол", на расстоянии 1 см3 от края, простым карандашом проводят линию "старта", на которой намечают (не повреждая поверхности силикагеля) точки на расстоянии 2,5 см друг от друга. В каждую точку с помощью пипетки, легко касаясь пластины, наносят 0,1 см3 градуировочного раствора в несколько приемов. Каждую следующую часть раствора наносят в ту же точку после полного испарения хлороформа от предыдущей части. Диаметр пятна градуировочного раствора на линии старта не должен превышать 5 мм.

Пластину с нанесенными растворами помещают под углом 30° в хроматографическую камеру так, чтобы линия "старта" располагалась внизу. После того как подвижная фаза продвинется по пластине вверх на 10 - 15 см от линии "старта", пластину вынимают, сушат в вытяжном шкафу до полного удаления подвижной фазы. Затем пластину помещают в сушильный шкаф при температуре 100 °C на 10 мин для освобождения от паров аммиака. Далее пластину обрабатывают парами воды, для чего ее держат 20 сек над кипящей водяной баней и переносят в эксикатор с парами хлора (кладут на фарфоровую вкладку силикагелем вверх) на 15 мин. Для удаления паров хлора пластинку помещают в сушильный шкаф при температуре 50 °C на 2 мин и после этого орошают раствором о-толидина для проявления ремантадина в виде темно-синего пятна с величиной Rf 0,49 +/- 0,02. Количественное определение ремантадина проводят через 60 мин при длине волны 550 нм по отношению к поверхности фона (участок пластины без градуировочных растворов) на "Спекорд М-40". Для каждого пятна градуировочного раствора измеряют интенсивность отражения (Т) и вычисляют оптическую плотность по формуле:

Т выражен в % и 

Градуировочная характеристика выражает зависимость оптической плотности (Д) от массы ремантадина (мкг) и строится по средним результатам из 5-ти серий. Градуировку проверяют 1 раз в месяц и при смене партии реактивов.

Отбор проб воздуха проводят согласно ГОСТу 17.2.3.01-86. Воздух со скоростью 20 дм3/мин аспирируют через фильтр АФА-ХА-10, закрепленный в фильтродержателе, в течение 30 мин. После отбора пробы фильтр осторожно складывают загрязненной стороной внутрь и помещают в пакет. Срок хранения - 1 месяц.

Фильтр с отобранной пробой извлекают из пакета, помещают в химический стакан и заливают 10 см3 смеси этанола с хлороформом в соотношении 3:1. Десорбцию ремантадина с фильтра проводят в течение 15 мин при периодическом помешивании стеклянной палочкой. Степень десорбции составляет 98%. Полученный раствор переносят в грушевидную колбу, упаривают под вакуумом при температуре 60 - 70 °C досуха. Сухой остаток пробы растворяют 0,5 см3 хлороформа. На пластину "Силуфол" наносят 0,1 см3 раствора. Одновременно наносят "свидетель", содержащий 4,0 мкг ремантадина. Пластину с пробой обрабатывают согласно п. 7.3, измеряют интенсивность отражения пятна и вычисляют оптическую плотность.

Массу ремантадина в пробе определяют по градуировочной характеристике.

Концентрацию ремантадина в атмосферном воздухе (мг/м3) вычисляют по формуле:

m - масса ремантадина в пробе, найденная по градуировочной характеристике, мкг;

- объем раствора пробы, см3;

- объем раствора пробы, взятый на анализ, см3;

- объем пробы воздуха, приведенный к нормальным условиям, дм3;

P - атмосферное давление при отборе пробы воздуха, мм рт. ст.;

t - температура воздуха в местах отбора проб, °C;

- объем пробы воздуха, дм3.

Методические указания разработаны Н.И. Юрченко, В.Д. Алященко, Л.М. Курбатовой (ВНЦ БАВ, г. Старая Купавна).