"МУК 4.1.768-99. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика количественного определения экзогенного фенола в биосредах (моча). Методические указания"
(утв. Минздравом России 06.07.1999)

1. Разработаны под редакцией академика РАЕН, д.м.н., проф. Зайцевой Н.В., к.б.н. Улановой Т.С., к.б.н. Нурисламовой Т.В., Карнажицкой Т.Д., Суетиной Г.Н., Поповой Н.В., Митрофановой В.М., Плаховой Л.В., Рудаковой Е.А. (ПНИКИ детской экопатологии).

2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 6 июля 1999 г.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений" и ГОСТа Р 1.5-92. Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение фенола в диапазоне концентраций 0,1 - 1,2 мкг/куб. см.

Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата измерений 12,6% при доверительной вероятности 0,95.

Метод основан на перегонке фенола с водяным паром и фотометрическом определении по азокрасителю, образующемуся при взаимодействии фенола с диазотированным паранитроанилином.

Определению мешают крезолы.

Нижний предел измерения в объеме пробы - 0,05 мкг.

Длительность анализа - 30 мин.

При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий" (СН 245-71) и СНиП-74.

При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.

При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).

При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.

При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на спектрофотометре.

При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

- температура воздуха (20 +/- 5) °С;

- атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха - не более 80% при температуре 25 °С. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

Соляная кислота, 4%-ный раствор. 10,0 куб. см концентрированной соляной кислоты (ро = 1,19 г/куб. см) добавляют к 100,0 куб. см дистиллированной воды.

Нитрит натрия, 25%-ный раствор. 25 г нитрита натрия растворяют в 100 куб. см дистиллированной воды.

Паранитроанилин, 0,1%-ный раствор. 0,1 г паранитроанилина, предварительно высушенного при температуре 60 °С в течение 2-х ч, растворяют в 4%-ном растворе соляной кислоты в мерной колбе вместимостью 100 куб. см. Перед употреблением раствор охлаждают до 0 - 5 °С.

Диазотированный паранитроанилин. 12,5 куб. см охлажденного раствора паранитроанилина приливают в мерную колбу вместимостью 50 куб. см, прибавляют постепенно 2,5 куб. см раствора нитрита натрия и через несколько минут доводят объем до 50 куб. см дистиллированной водой. Диазотирование паранитроанилина следует проводить в вытяжном шкафу.

Щавелевая кислота, 10%-ный раствор. 10 г щавелевой кислоты растворяют в 100 куб. см дистиллированной воды.

Исходный раствор для градуировочной характеристики, 1 мг/куб. см. В мерную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 20 - 30 куб. см дистиллированной воды и точную навеску свежеперегнанного фенола 50 мг и доводят объем до 50 куб. см дистиллированной водой.

Рабочий раствор для установления градуировочной характеристики с содержанием фенола 10 мкг/куб. см готовится путем разбавления перед отгонкой.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности от концентрации фенола в пробе, устанавливают по 3 сериям растворов.

Растворы для градуировки готовят в мерных колбах вместимостью 100 куб. см. Для этого в каждую колбу вносят раствор согласно таблице.

Для установления градуировочной характеристики в колбу для перегонки помещают 5 куб. см стандартного раствора, добавляют щавелевую кислоту до кислой реакции среды по лакмусовой бумаге и проводят перегонку с водяным паром. Отгоняют 10 куб. см пробы. К отгону объемом 5 куб. см добавляют 0,04 г карбоната натрия и тщательно перемешивают, затем добавляют 0,4 куб. см диазотированного паранитроанилина и через 20 мин. замеряют оптическую плотность на спектрофотометре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при 494 нм.

Отбор проб мочи в объеме 100 куб. см производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.

Для анализа берут 5 куб. см мочи, наливают в колбу для перегонки, добавляют щавелевую кислоту до кислой реакции среды по лакмусовой бумаге и ведут перегонку с водяным паром. Из полученного отгона отбирают 5 куб. см пробы, добавляют 0,04 г карбоната натрия и тщательно перемешивают, затем добавляют 0,4 куб. см раствора диазотированного паранитроанилина. Содержимое пробирки вновь энергично встряхивают и через 20 мин. замеряют оптическую плотность растворов в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при 494 нм.

Концентрацию (С) фенола в моче (мкг/куб. см) вычисляют по формуле:

Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).

Периодичность контроля сходимости измерений зависит от количества рабочих измерений (2 параллельные пробы). Отбирают 2 пробы мочи и каждую из них анализируют в соответствии с прописью методики.

Результаты признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.

Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50 - 150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы Х и рабочей пробы с добавкой Х'. Результаты анализа исходной рабочей пробы Х и рабочей пробы с добавкой Х' получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.